一种疫苗，包含ＡＴＣＣ ＶＲ２５０９病毒。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
技术介绍
1.专利
本专利技术一般涉及给猪施用的低致病性活体病毒疫苗，以使有效免疫从而抵御猪的生殖和呼吸综合征(PRRS)病毒的感染。更具体的是，本专利技术涉及这类活体疫苗，以及使猪对PRRS病毒免疫的方法和制备这类疫苗的方法。一种新的、基本分离和纯化的低致病性的PRRS病毒也构成了本专利技术的部分，其ATCC保藏号为VR2509。2.现有技术的说明近年来PRRS已成为猪的一种重要的病毒性疾病。PRRS会使怀孕母猪严重地生殖衰退，表现为猪崽早产、流产数增加、干尸化和死产数增加、猪崽数减少及延迟恢复动情期。急性PRRS的生殖症状持续2-4个月，但疾病的呼吸问题会持续多年，导致明显的生产减少。已经报道了对孕后期(妊娠77-95天)母猪/小母猪PRRS病毒感染的发病机理的研究。每个这类研究显示了PRRS病毒导致经胎盘感染和胎儿致病性的能力。但是，胎儿致病性对孕中期的母猪的影响不明显，孕中期感染的子宫中的胎儿仍然很正常。在野生条件下，有些农场没有显示出疾病的急性生殖问题或慢性的呼吸症状，但其血清学都是PRRS阳性。人们对在这样的情况下缺乏临床疾病体征的基础尚不了解。据推测可能存在低致病性的PRRS病毒毒株，它们会使猪群感染，但没有显示出PRRS的临床征状。不同的研究者已经报道了许多PRRS病毒分离物。所有的都已经显示具有RNA和含脂包膜，但没有使不同动物种的红细胞血凝的能力。专利技术综述本专利技术克服了上述问题并提供了给猪施用改进的活体或改性活体PRRS疫苗。本专利技术的疫苗包含能给予猪抗烈性野生型PRRS感染的有效免疫的足量活体或改性活体病毒。本文所用的“有效免疫”指疫苗防止猪PRRS感染的能力，所述的感染会引起疾病的明显临床体征。即经免疫的猪对PRRS的血清学可为阳性或不为阳性，但没有任何临床症状。在较好的形式中，本专利技术的疫苗包括新的活体病毒，称为MN-Hs，它于1995，7，26被保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)(12301 Parklawn Drive，Rockville，美国马里兰州20852)，ATCC保藏号为VR2509。该病毒基本无毒，能给予有效免疫。这里的疫苗可施用于繁殖的母猪、小母猪、公猪或断奶猪崽，这类施用可用任何常规的方法，如肌内注射或口服-经鼻给药。一般来说，疫苗的剂量可含约104-108空斑形成单位的病毒。更一般的是，本专利技术也涉及制备PRRS猪疫苗的方法，它涉及首先通过空斑克隆技术得到PRRS病毒株或在MARC-145细胞铺满培养物上的平均空斑直径低于约2毫米的分离物，然后从这类毒株中制备活体疫苗。MARC-145细胞系已保藏在ATCC，其ATCC保藏号为＿＿＿＿。较好的是，本专利技术的疫苗基本上由这类小直径的空斑病毒组成，它以基本纯化的形式得到。较好的病毒ATCC保藏号VR2509具有这类小的空斑直径，在免疫时基本完全无毒。附图简述附图说明图1是显示在MARC-145细胞系上的PRRS病毒分离物MN-Hs(＜2mm)的空斑形态和大小的照片；图2是显示在MARC-145细胞系上的PRRS病毒分离物MN-HL(3-5mm)的空斑形态和大小的照片；和图3是显示在MARC-145细胞系上的PRRS病毒分离物MN-W(2-3mm)的空斑形态和大小的照片。较好实施例的详细叙述下列实施例是分离、鉴定和克隆低致病性PRRS病毒株的较好技术，以及从中产生疫苗的较好技术；应当明白该信息仅供叙述用，不是用来限制本专利技术的总范围。提及的参考文献并入本文。实施例1综述在该实施例中，对怀孕的母猪进行猪生殖和呼吸综合征(PRRS)病毒的小空斑变异体(MN-Hs)的研究。MN-Hs株最初从小空斑和大空斑(MN-H)病毒混合物的MN-H病毒中克隆。第一个试验是比较对胎儿的致病性，对2个妊娠86天的怀孕母猪分别鼻内接种MN-Hs、MN-HL、野生分离物(MN-W)和细胞培养基(对照)，除了对照母猪外让所有的母猪到期生下小猪。感染的母猪在接种后(PI)7天出现病毒血症，在接种后14天由间接荧光抗体(IFA)试验显示为血清转化。两头被MN-Hs病毒感染的母猪生下了14头活猪崽和5个死猪崽，其中2头被MN-HL病毒感染的母猪生下了全部的25头死猪崽。两头被MN-W感染的母猪产下了10头活猪崽和20头死猪崽。两头对照的母猪在怀孕的107天宰杀时产下了16头正常的猪崽。从6头感染的母猪产下的24头活猪崽中的16头(66.7％)、14头死产中的9头(64.3％)和25头干尸化的3头(12.0％)中分离出病毒。IFA方法显示，有4个MN-HL或MN-W感染的母猪产下的13头死产的血清中的6头其PRRS病毒的抗体滴度范围为116-11，024。接着的实验是重复MN-Hs病毒感染的结果，对2头妊娠86天的怀孕母猪分别鼻内接种MN-Hs、肌内注射接种MN-Hs以及鼻内接种不同的野生分离物(OVL-173)，让所有的母猪到期生下小猪。两头被MN-Hs病毒经鼻内和肌内注射感染的母猪分别产下了15头活猪崽和6个死猪崽，以及25头活猪崽和5头死猪崽，而2头感染OVL-173的母猪产下了6头活的和24头死猪崽。这些结果表明PRRS病毒对猪胎的致病性在病毒分离物间不同，PRRS病毒的MN-Hs毒株是温和致病性病毒。在死产猪崽的血清中检测PRRS病毒抗体是诊断胎儿感染的有用方法。材料和方法病毒和细胞培养物。本研究使用了三种不同的PRRS病毒分离物。在具有亚临床PRRS体征的农场中从健康繁殖的猪崽血清中得到分离物MN-H。MN-H病毒最初是各种空斑大小的病毒群的混合物。从MN-H病毒中独立地克隆小(MH-Hs)空斑病毒和大(MN-HL)空斑病毒，每个病毒经空斑纯化四次以用于第一实验，再进行六次纯化以用作接着的根据Him等在Am.J.Vet.Res.，521649-1652(1991)中所述的空斑克隆方法的实验。在每个这类空斑传代中，铺满MARC-145(来自非洲绿猴肾细胞系(MA-104)的允许克隆)的细胞单层在60mm×15mm培养皿中生长(细胞被保存在补充有3％胎牛血清(FCS)、0.15％碳酸钠和抗生素的Eagles极限必需培养基(MEM)中(Kim等，Arch.Virol.，133477-483(1993))，并用各个病毒进行接种。让培养物在37℃下培养60分钟，除去上面的接种物，培养物用MEM洗涤一次。此后，向每个培养皿中加入5毫升等分的由等体积2×MEM和补充有50微克二乙基氨基乙基(DEAE)-葡聚糖/毫升的1.6％煮沸的Noble琼脂(Disco Laboratories)构成的液体培养基，让培养皿在37℃下CO2培养器中再培养5天。在培养末期，通过加入3毫升补充有1％中性红的PBS使空斑培养物可见。用消毒的巴氏吸管挑出选择的空斑，进行克隆，并在未感染的MARC-145细胞单层上接种传代。对于永久染色，小心地除去琼脂，细胞单层用2毫升在20％乙醇中的1％结晶紫染色10分钟。培养皿用自来水淋洗以便于检查空斑。从具有典型急性PRRS体征的农场的病母猪血清中分离得到PRRS病毒MN-W，从牛津兽医实验室(Worthington，美国明尼苏达州)中得到OVL-173。动物和实验设计从没有PRRS病毒感染的临床或血清学迹象历史的农场采购妊娠约80天的本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：H·S·朱，
申请(专利权)人：明尼苏达大学董事会，
类型：发明
国别省市：
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