一种具有抗疲劳作用的西藏凹乳芹多糖的制备方法及应用技术

西藏凹乳芹(Vicatia thibertica de Boiss)属伞形科。西藏凹乳芹粗多糖可降低乳酸生成含量，增强代谢产物消除效率，从而达到抗疲劳的作用。由此可知，两藏凹乳芹的抗疲劳作用效果明显，且抗疲劳的活性部位为多糖部分。本发明专利技术提供一种西藏凹乳芹多糖的制备方法，明确其抗疲劳效果，并深入研究均一多糖组分的抗疲劳机制，开发其在抗疲劳保健品或药品制备中的应用。

【技术实现步骤摘要】
一种具有抗疲劳作用的西藏凹乳芹多糖的制备方法及应用
本专利技术涉及一种中药提取物，具体涉及一种从西藏凹乳芹中提取分离得到的具有抗疲劳活性的多糖及其应用。
技术介绍
由于工作、生活压力及社会环境因素，约有70％左右人群处在亚健康状态。亚健康状态是介于疾病和健康之间的一种心理、生理功能降低状态，表现为活力降低、反应能力及适应能力减退。在日常生活中，“疲劳”已成为一种普遍的亚健康状态表述。疲劳可以是一种症状形式伴随着其他的疾病，如缺铁性贫血、恶性肿瘤、硬化综合征等出现，又可作为一种疾病单独出现。随着时代发展，疲劳已逐渐成为了影响人类健康的一种“隐形杀手”。世界卫生组织把疲劳列为了21世纪影响危害人类健康的重要因素之一，因此有关疲劳的研究也引起了广泛关注。调查发现，有1/2以上的人都会感觉到疲劳，其中有超过1/3的人明确受到疲劳影响而降低了生活质量及工作效率。越来越多证据显示，从植物中提取的多糖在抗疲劳方面具有低毒、高效的优势。如：枸杞多糖有抗疲劳作用；五味子多糖显著改善小鼠的抗疲劳和耐缺氧作用；荔枝多糖可增加小鼠糖原储备，能减少小鼠运动后尿素本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有抗疲劳作用的西藏凹乳芹多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)西藏凹乳芹粗多糖的制备：/n取干燥的西藏凹乳芹，经粉碎后用10倍量的85％乙醇在室温下浸提3次，乙醇提取后的西藏凹乳芹，经过干燥后，按照料液比为1∶10加入蒸馏水，85℃加热提取3次，1h/次，离心(4500r/min，20min)收集上清液，60℃减压浓缩至浸膏，在搅拌条件下，将浸膏加入10倍浸膏重量体积的95％乙醇中，室温静置48h，离心(10000r/min，10min)，沉淀用水溶解，浓缩，冷冻干燥得西藏凹乳芹粗多糖；/n(2)西藏凹乳芹多糖的纯化：/n多糖纯度直接影响到多糖质量和作用效果，因此对西藏...

【技术特征摘要】
1.一种具有抗疲劳作用的西藏凹乳芹多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)西藏凹乳芹粗多糖的制备：
取干燥的西藏凹乳芹，经粉碎后用10倍量的85％乙醇在室温下浸提3次，乙醇提取后的西藏凹乳芹，经过干燥后，按照料液比为1∶10加入蒸馏水，85℃加热提取3次，1h/次，离心(4500r/min，20min)收集上清液，60℃减压浓缩至浸膏，在搅拌条件下，将浸膏加入10倍浸膏重量体积的95％乙醇中，室温静置48h，离心(10000r/min，10min)，沉淀用水溶解，浓缩，冷冻干燥得西藏凹乳芹粗多糖；
(2)西藏凹乳芹多糖的纯化：
多糖纯度直接影响到多糖质量和作用效果，因此对西藏凹乳芹多糖进一步纯化，具体过程如下：
a、采用大孔吸附树脂(D101型)对以上粗多糖进行脱色，将大孔吸附树脂用95％的乙醇浸泡24h后，倒入层析柱(10cm×90cm)，用蒸馏水洗脱平衡12h，将粗多糖溶于水，上样后吸附过夜，用蒸馏水洗脱，减压浓缩洗脱液，冷冻干燥后，得到脱色后的粗多糖；
b、脱蛋白：取脱色后的粗多糖，溶于蒸馏水中，置于分液漏斗，加入糖液的1/2体积Sevag试剂(试剂配比为三氯甲烷∶正丁醇＝5∶1)，然后剧烈震荡5min后，静置分层，离心(3000r/min)，收集上清液，重复操作至无变性蛋白层出现，减压浓缩，加入10倍量95％乙醇，4℃静置过夜，离心，冷冻干燥，得脱蛋白的西藏凹乳芹多糖，命名为VTP(VicatiathiberticadeBoissPolysaccharide，VTP)；
c、蛋白去除率的计算：蛋白去除率＝(去除蛋白前蛋白的含量-去除蛋白后蛋白的含量)/去除蛋白前蛋白的含量*100％。


2.根据权利要求1所述具有抗疲劳作用的西藏凹乳芹多糖的制备方法，其特征在于，西藏凹乳芹多糖含量测定包括以下步骤：
(1)试剂配制
a、苯酚溶液配制：取精制的苯酚加蒸馏水，配制成6％苯酚溶液，备用；
b、标准溶液配制：精密称取0.5000g葡萄糖，于100mL容量瓶中定容，从中取出1mL溶液加水定容到50mL，得到100μg/mL的标准溶液：
(2)标准曲线的制作
用微量移液器分别取100μg/mL的标准溶液0.5mL、1mL、1.5mL、2mL、2.5mL、3mL定容于50mL的容量瓶中，分别取1mL于试管中，各加入6％苯酚1mL，浓硫酸5mL，摇晃试管，混合，静置，用722型分紫外光度计于490nm处测吸光度值，求算回归方程；
(3)西藏凹乳芹多糖中总糖含量测定
将检测样品配成200μg/mL溶液，然后取样1mL，其他步骤和标准曲线制作一致，检测结束后，计算西藏凹乳芹多糖总糖含量；
(4)3，5-二硝基水杨酸法测所制备西藏凹乳芹多糖中还原糖的含量：
试剂的配置：
a、间羟基联苯的配制：称取间羟基联苯用5mg/mLNaOH溶液配成质量浓度为1.5mg/mL，4℃避光保存；
b、四硼酸钠硫酸溶液配制：取四硼酸钠用浓硫酸配成0.125mol/L，室温保存；
c、葡萄糖醛酸标准溶液的配制：准确称取0.5000g葡萄糖醛酸，用蒸馏水配成100μg/mL的标准溶液；
葡萄糖醛酸标准曲线的制作：
用微量移液器分别取100μg/mL的标准溶液0mL、0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL到试管中，加蒸馏水补到1mL，冰浴，加四硼酸钠硫酸溶液5mL，沸水浴，加间羟基联苯溶液100μL，37℃恒温水浴10min，用722型分光光度计于525nm处测吸...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘晓波，郭美仙，何正春，施贵荣，段金成，沈磊，陈俊雅，
申请(专利权)人：大理大学，
类型：发明
国别省市：云南;53