通过定量P 来诊断和监测阿尔海默氏病制造技术

一种通过定量病人体液样品中的Ｐ↑［９７］来诊断阿尔茨海默氏病的方法，它包括以下步骤： ａ）从怀疑患有阿尔茨海默氏病的病人中获取体液样品，从而得到试验样品； ｂ）测定试验品中Ｐ↑［９７］的量； ｃ）比较试验样品和对照样品中Ｐ↑［９７］的量， 其中，试验样品中存在的Ｐ↑［９７］的量比对照样品中的高表示可能患有阿尔茨海默氏病。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及用定量P97来诊断和监测阿尔茨海默氏病的方法。阿尔茨海默氏病(AD)是一种影响认知、行为和功能的神经退化性疾病。最近的一个研究表明，AD可影响大约7％的75岁的人，85岁的则超过25％。其它的研究表明老年人中AD的发生率甚至更高。目前，对AD只有非常有限的治疗选择，仅有的定性诊断方法是大脑剖检。AD的特征是大脑中有各种各样的病理标记，这些标记包括主要含β淀粉样蛋白(Aβ)的老年斑、带有高磷酸化微管相关Tau蛋白的神经原纤维结、神经元细胞死亡和突触连接丧失。据报道Aβ蛋白的异常沉淀导致大脑中认知记忆区域中的神经元细胞死亡。临床上AD的诊断是通过神经和神经病理评价来完成的，遗憾的是在疾病的早期它不能检测出来。一致的临床诊断标准，如NINCDS-ADRDA已经使临床病理诊断的准确性提高到80％以上。一些试图证明脑脊液(CSF)中某些蛋白质的水平与AD有关的试验只取得了有限的成功。例如，用于检测CSF中Aβ的试验表明，尽管早年发生AD的病人与晚年对照组相比，Aβ水平有轻微的升高，AD病人中总的Aβ水平与对照组相比没有显著差异。但也有试验显示，在AD病人脑组织中蔓延到位置42的Aβ，Aβ1-42在扩散和老年淀粉样斑块中都占优势，而AD病人CSF中的Aβ1-42比对照组显著降低。在对可转化为Aβ的淀粉样前体蛋白(APP)的分泌型的研究中发现，AD病人CSF中可溶性的APP比对照组明显降低。而其它的研究仅显示APP有轻微的降低甚至升高。用于监测CSF中Tau蛋白的试验显示，尽管与对照组相比，AD病人的平均Tau水平升高，但与正常对照组和患有其它神经疾病对照组也有相当程度的重叠。由于相互矛盾的结果和AD病人与对照组之间的结果重叠，其它的CSF诊断指标已被否认，例如与老年斑有关的αI-抗糜蛋白酶和遍在蛋白。不但这些结果令人失望，而且通常用于病人诊断的样品CSF也不能很好地得到。但是，商业性的诊断试验已经由Athena Neuroscience Inc.开发，它用位于人染色体19上的阿朴脂蛋白E(ApoE)E4等位基因频率来检测CSF中Tau蛋白和Aβ1-42的水平。现已有实验证实，ApoE与老年斑有关，ApoE E4为纯合子的人更有可能发展为AD病人。据文献报道，这种联合分析能帮助医生判定病人患有AD病的可能性。但是，这种试验费时而且只是提供一个可能的答案。最近一个研究瞳孔反应的报告显示，AD病人对乙酰胆碱阻滞剂托吡卡胺的稀溶液呈现高敏感性。这种高敏感性首先在Down′s综合征病人中发现，这种病人总是在中年发展为与AD病人非常相似的神经病理。尽管该研究似乎给人以希望，但其结果不易被重复，并存在重叠和解释上的一些困难，如眼疾病或眼颜色对试验可能存在的影响。最新文献描述了一种方法，即通过检测修复DNA损伤能力的缺陷来鉴定AD细胞。该试验在支持或表示病人不是AD的诊断方面证明是有用的。但是，该试验还远未达到临床应用的水平，因为它费力而且需要多个培养细胞的步骤。最后，有研究已经显示用正电子发射X线断层照相技术有可能检测AD病人脑中葡萄糖代谢的变化。该试验不适用于常规应用。人们已经对AD的遗传病因有着相当的兴趣，现已证明，几个基因的突变使人易患少数几种家族性AD。染色体21上的APP基因突变和Karlinsky，H.Neurology，42，1445-1449(1992)]与常染色体显性、早年(＜65岁)的AD有关，早老基因(Presenilins)，例如与染色体14相连的S182和与染色体1相联的STM2的突变与少数家族性AD有关。另外，在染色体19上发现的ApoE的E4等位基因可改变发展为晚年发作型AD的危险性。这些基因的发现在判定少数病人发展为AD的素因方面将具有相当的价值，但遗传学评估不适用于检测或者监测AD。P97抗原，又称为黑转铁蛋白，与AD有关(PCT/CA93/00272，1994年1月20日公开，公开号为W094/01463)。P97属于铁结合蛋白中非常重要的一组，这组铁结合蛋白包括血清转铁蛋白(Tf)、乳铁蛋白和来自鸟蛋白的卵转铁蛋白。P97能与铁结合，参与细胞铁摄取过程。P97有两种类型一种是通过糖基-磷脂酰肌醇锚状物吸附在细胞表面上，另一种是主动分泌型。最近一个研究发现，P97和转铁蛋白受体(TR)高度集中于人脑毛细管内皮。而转铁蛋白(Tf)本身主要集中于神经胶质细胞中。还有实验表明，在AD病人死后脑组织中，P97在与淀粉样斑有关的反应性小神经胶质细胞上有特异性表达。其它与老年AD斑无关的小神经胶质细胞以及患其它神经病理疾病(帕金森氏病，进行性核上麻痹、亨迁顿病和肌萎缩性侧索硬化)的脑组织的小神经胶质细胞均不能表达可检测水平的P97。本专利技术的专利技术人特别说明，跟健康的个体相比，可溶性铁结合蛋白，P97在阿尔茨海默氏病人的血清和脑脊液(CSF)中显著升高。来自阿尔茨海默氏病人样品中的P97的量经常比来自健康个体样品中的高。本专利技术的专利技术人还特别说明，随着病程的延长，血清中P97的水平升高。另外，在可观察到AD症状的大概两年前，P97的水平开始升高。这种特殊的P97定量能鉴别患有AD的病人，用于监测疾病的发作和纵向进展。作为上述发现的结果，本专利技术的专利技术人设计了一个简单和可靠的在体液中检测AD的试验，该试验在AD病的评估和处理方面都很有价值。利用本专利技术进行AD的早期诊断可以给家庭更多的时间来计划正确照顾阿尔茨海默氏病人，减少出现类似阿尔茨海默氏病病状如抑郁或中风的可能性。本专利技术的方法能用于有效治疗AD的新策略。尽管已开发许多用于治疗AD的药物，但没有一种便宜而又快速的用于研究这些药力效果的方法。现在临床上用于测定药物效力的试验是复杂、劳动量大的神经行为评估。概括地说，本专利技术涉及一种通过定量病人体液样品中的P97来诊断阿尔茨海默氏病的方法，它包括以下步骤a)从怀疑患有阿尔茨海默氏病的人体中获取体液样品，从而得到试验样品；b)测定试验样品中P97的量；c)比较试验样品和对照样品中P97的量。其中，试验样品中P97的量比对照样品中的高表示可能患有阿尔茨海默氏病。本专利技术还涉及一种通过定量患有阿尔茨海默氏病人体液样品中的P97来监测该病进展的方法，它包括以下步骤a)从阿尔茨海默氏病人中获取体液样品，从而得到试验样品；b)测定试验样品中P97的量；c)比较试验样品和以前获得的第一个试验样品中P97的量。其中，试验样品中P97的量比第一个试验样品中的高表示病人的阿尔茨海默氏病情在进展。本专利技术进一步涉及一种通过定量阿尔茨海默氏病人体液样品中的P97来监测阿尔茨海默氏病治疗的方法，包括以下步骤a)从已接受治疗的阿尔茨海默氏病人获取体液样品，从而得到试验样品；b)测定试验样品中的P97的量；c)比较试验样品和治疗前从病人中获得的体液样品中P97的量。其中，试验样品中与治疗前样品中P97量的差异表示治疗的效果。本专利技术还进一步涉及用于完成本专利技术方法的试剂盒，它包括检测试验样品中P97存在的试剂、检测P97存在的所有试剂和用于完成本专利技术方法的合适的支持用品。参照下面的详细描述和附图，本专利技术的上述各特征及其它特征将很清楚。另外，本专利技术中引用的专利文献及出版物全部合并于此作为参考。附图说明图1为P97标准品的标本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：W·A·杰福里斯，M·肯纳德，
申请(专利权)人：不列颠哥伦比亚大学，
类型：发明
国别省市：