包含一个IgE-结合结构域和一个HSA成分的融合多肽及其在诊断和治疗中的应用制造技术

一种融合多肽或其盐，其包含至少一个与至少一个人血清白蛋白（ＨＳＡ）成分融合的免疫球蛋白Ｅ（ＩｇＥ）－结合区，或其生理功能相同物。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及融合多肽。它涉及包含一个IgE-结合结构域和一个人血清白蛋白(HSA)成分的融合多肽及其盐。它也涉及多核苷酸和生理功能相同的多肽，它们是制备这些融合蛋白过程中的中间物；以及适当的重组表达载体，相应的原核和真核表达系统，和合成此融合多肽的方法。专利技术背景免疫球蛋白E(IgE)与其受体之间的相互作用在人抵御寄生虫感染中具有确定的作用(M.Capron和A.Capron.《科学》(Science)2641876-1877)。然而在具有良好卫生条件的工业化国家，环境变应原引起的IgE的过量产生对IgE网络的干扰要比接触寄生虫更频繁，它导致变态反应和其它的IgE或者IgE受体介导的疾病状态。IgE是参与引发速发型变应性应答的主要抗体，是维持晚期应答的主要参与者。IgE在B淋巴细胞中合成，与高亲和力的IgE受体即FcεRI结合后发挥效应，发现FcεRI位于变态反应效应细胞如肥大细胞、嗜碱性粒细胞和嗜伊红性粒细胞的表面。IgE也可通过与其在抗原提呈细胞如朗罕氏细胞、B细胞和单核细胞上的受体结合发挥诱导功能(G.C.Mudde等人，《变态反应》(Allergy)50193-199)。当IgE分子通过IgE受体FcεRI与变态反应效应细胞表面结合，并且被变应原交联时，即出现变应性应答或状态。由此导致信号传导，起始了细胞中胞质颗粒的脱粒，并伴随着变态反应介质的释放，如组胺、5-羟色胺、前列腺素和细胞因子，以及随后发生的局部组织水肿和炎性细胞的流入。另一个刺激变态反应及相关状态的方法是IgE受体FcεRI与抗FcεRI的循环自身抗体的相互作用。FcεRI典型地以四聚体存在，包含一个α-、一个β-和两个γ-链(即＂亚单位＂)，尽管在单核和朗罕氏细胞上β-亚单位缺失。据显示FcεRI的IgE结合位点完全包含于其α亚单位中(称为FcεRIα)(J.Hakimi等人，《生物化学杂志》(J.Biol.Chem.)26522079-22081；U.Bank等人，《生物化学杂志》(J.Biol.Chem.)2662639-2646)。发现删除完整α-亚单位基因的重组＂敲除＂鼠不能使变应性应答演变为变应原激发(D.Dombrowicz等人，《细胞》(Cell)75969-976)。FcεRIα是一种高度糖基化的多肽，分子量大约60KD，包含一个疏水穿膜结构域以及暴露于细胞外表面的亲水胞外(＂外＂)和胞质结构域。FcεRIα的IgE结合能力被进一步定位于胞外部分(J.Hakimi等人，出处同前；Leder等人，美国专利4′962′035)。可通过切除穿膜部分及其下游序列而产生了可溶的分泌性分子(C.Ra等人，《国际免疫学》(Int.Immunol.)547-54)；产生的截短成分基本由人FcεRIα胞外结构域组成，在体内和体外均具有IgE结合活性(M.Haak-Frendscho等人，《免疫学》(Immunol.)151351-358“与截短的IgG1 H链C区融合的FcεRIα的氨基酸残基1-204”；C.Ra等人，出处同前FcεRIα的残基1-172，对应于SEQ.ID.NO.1的残基26-197)。此片段的结构特征包括两个潜在的二硫桥和七个潜在的糖基化位点(M.Haak-Frendscho等人，出处同前)。因此，基本由胞外结构域组成的截短的FcεRIα可能用于治疗性地向哺乳动物施用，结合血清IgE，以防止它与变态反应效应细胞上的高亲和力受体结合，并且也抑制人淋巴细胞中IgE的从头生物合成(Y.Yanagihara等人，《临床调查杂志》(J.Clin.Invest.)942162-2165)。然而，由于IgE-结合多肽如FcεRIα的胞外结构域可被从循环血浆中快速清除，在体内存留极短，从而阻碍了其在系统治疗哺乳动物IgE-或IgE受体介导的变应性疾病中的有效应用。鉴于IgE-或IgE受体介导的疾病占医生-患者接触的10-20％，有效的治疗将明显有益于患此疾病的患者，并对临床中治疗IgE或IgE受体介导的疾病如变态反应和变态反应相关疾病有重要提高。因此将受益于获得一种IgE-结合多肽，它具有延长的有效的血清寿命，并在治疗变态反应尤其是系统治疗特应性皮炎、变应性哮喘和慢性荨麻疹中具有提高的临床应用，以及在效率高、效益好的方法中具有提高的活性。专利技术概述现在发现，通过将一个IgE-结合结构域与一个人血清白蛋白(HSA)成分融合，可以获得比单独的IgE-结合结构域具有延长的血清半寿期的融合多肽，而IgE-结合活性不丢失，产生用于系统治疗变态反应和其它IgE-介导疾病的IgE-结合多肽。系统施用的IgE-结合多肽将与血清IgE及抗IgE受体的循环自身抗体FcεRIα结合，防止它们与细胞所结合的FcεRIα结合，并且防止和/或抑制变应性反应及相关现象。进一步发现，可以应用每分子包含多于一个IgE-结合结构域的本专利技术的融合多肽来获得IgE-结合活性的显著提高。例如，发现本专利技术的＂二聚体＂分子比本专利技术的＂单体＂具有显著提高的IgE-结合活性。名词＂二聚体＂在此指本专利技术的具有两个IgE-结合结构域的融合多肽。名词＂单体＂指本专利技术的具有一个IgE结合区的融合多肽。单体或二聚体可包括单个或多个HSA成分。例如，一种本专利技术的单体融合多肽可包含一个IgE-结合结构域，其氨基端或羧基端与一个HSA成分相融合。另外，单体也可包含一个两端均与HSA成分融合的IgE-结合结构域。根据本专利技术的二聚体融合多肽可包含，例如，两个IgE-结合结构域，它们中一个的羧基端和另一个的氨基端与介入的HSA成分相融合。另外，除两个IgE-结合结构域之外，二聚体可包含多个HSA成分。进一步发现本专利技术的二聚体分子具有意外的有利的活性。因此本专利技术涉及融合多肽及其盐，它们包含至少一个与至少一个HSA成分相融合的IgE-结合结构域；优选的，涉及单体融合多肽，其中单个IgE-结合结构域与一个或多个HSA成分相融合，或者涉及多聚体融合多肽，其中两个或多个IgE-结合结构域与至少一个HSA成分相融合；更优选的，涉及具有两个IgE-结合结构域和至少一个HSA成分二聚体。本专利技术进一步涉及其多核苷酸中间物。名词＂融合的＂或＂融合＂在此指如下多肽(i)一个给定的功能性结构域(即IgE-结合结构域)，其羧基端通过共价(优选的，肽，即酰胺)键与另一个功能性结构域(即HSA成分)的氨基端或接头肽相结合，此接头肽本身通过共价(优选的，肽)键与其它功能性结构域的氨基端结合；和/或，(ii)一个给定的功能性结构域(即IgE结合结构域)，其氨基端通过共价(优选的，肽，即酰胺)键与另一个功能性结构域(即HSA成分)的羧基端或接头肽相结合，此接头肽本身通过共价(优选的，肽)键与其它功能性结构域的羧基端结合。同样地，当与本专利技术的多核苷酸中间物一同使用时，＂融合的＂意思是指编码第一个功能性结构域的核苷酸序列的3′-端，通过共价键或间接地通过核苷酸接头，与编码第二个功能性结构域的核苷酸序列相应的5′-端结合，此接头本身的末端优选地与编码第一个功能性结构域的多核苷酸及编码第二个功能性结构域的多核苷酸共价结合。优选地，融合多肽或其盐是单体或二聚体；当是二聚体时，它包含两个与一个HSA成分融合的IgE-结合结构本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：M·E·迪根，P·拉克，H·格拉姆，
申请(专利权)人：诺瓦提斯公司，
类型：发明
国别省市：