选择性调节细胞内信号发出的短肽制造技术

公开的肽是蛋白质酪氨酸激酶ＨＪ环的肽衍生物。这种肽可调节蛋白质酪氨酸激酶活性。还公开了通过服用本发明专利技术一种肽，调节受试者蛋白质酪氨酸激酶活性的方法。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
相关申请本申请是1997年5月21日提交的美国专利序列号No.08/861,153的部分继续申请，其全部内容通过在此引述而合并于本文。本专利技术的技术背景蛋白质酪氨酸激酶是真核蛋白质激酶大家族中的成员。这一类的酶特异磷酸化细胞内蛋白质的酪氨酸残基，对于调节多细胞有机体中的信号传导是很重要的。蛋白质酪氨酸激酶是以膜结合受体存在的，参与细胞内的信号传导，包括向核子的信号传导。这样，酪氨酸激酶对酪氨酸的磷酸化作用，对于随环境变化而调节细胞内事件方面是一项重要的机理。许多细胞事件是由酪氨酸激酶调节的，包括细胞因子反应，抗原相关免疫反应，RNA病毒引起的细胞变异，瘤形成，细胞周期的调节，细胞形态和显型的改性。加强蛋白质酪氨酸激酶活性可导致分泌生长因子的持久刺激作用，这样可导致扩增性疾病如癌症，非恶性扩增性疾病如动脉硬化，牛皮癣，和炎症反应如脓毒性休克。减弱功能也可导致疾病，如，减弱胰岛素受体酪氨酸激酶活性是多种类型糖尿病的病因，严重减少B细胞的祖细胞激酶会导致人类X-连锁血中丙球蛋白贫乏。这样，就需要可调节蛋白质酪氨酸激酶表达的化合物。这样的化合物可应用在治疗由于蛋白质酪氨酸激酶过度活性和活性不足引起的疾病中。这样的化合物也可应用在对蛋白质酪氨酸激酶的活动模式，以及这些蛋白质如何调节细胞功能和活性的研究中。本专利技术的概述目前已发现从多种不同的蛋白质酪氨酸激酶的HJ环衍生的短肽，可显著地影响表达蛋白质酪氨酸激酶细胞的活性(“HJ环”本文下面定义)。一些实例如下列出c-Src，Csk，c-Abl和c-Met的HJ环的肽衍生物已发现可抑制多种不同内皮细胞类型的扩增(实例2和4)。其他c-Src，Lck，内皮细胞酪氨酸激酶受体(Endoth)的HJ环的肽衍生物已发现可刺激牛毛细血管内皮细胞的体外扩增(实例2)。Lyn/Hck的HJ环的肽衍生物已发现可引起血管平滑肌细胞体外形态的改变(实例5)。具体地，与Ac-IVTYGKI-NH2(SEQ ID NO.1)和Ac-IVTYGRI-NH2(SEQ ID NO.2)，即分别为HJ24和HJ32，一起温育的细胞，变长并呈现纺锤形结构。c-Src的HJ环的肽衍生物已发现可保护神经元细胞在体外不受血清剥夺的影响(实例3)。依据前面提及的发现，本文公开的新的肽是蛋白质酪氨酸激酶的HJ环的肽衍生物。同时公开的还有，确定调节所说的蛋白质酪氨酸激酶活性的蛋白质酪氨酸激酶HJ环的肽衍生物的方法。在受试者中调节蛋白质酪氨酸激酶活性的方法也公开了。本专利技术的一个具体实施是一种新的肽，是蛋白质酪氨酸激酶HJ环的肽衍生物。这种肽包括约五个到约二十个之间的氨基酸残基或氨基酸残基类似物，并调节蛋白质酪氨酸激酶的活性。肽的N-端和/或C-端可以是取代或未取代的。肽可以是线性的或环状的。本专利技术的另一个具体实施是在受试者中调节蛋白质酪氨酸激酶活性的方法。方法包括服用治疗上有效量的肽，肽是一种所说的蛋白质酪氨酸激酶HJ环的衍生物，如上所述。本专利技术的另一个具体实施是确定调节蛋白质酪氨酸激酶活性的肽的方法。该方法包括提供一种“测试肽”，其含有约五个到二十个氨基酸或氨基酸类似物，是一种从所说的蛋白质酪氨酸激酶衍生的肽。在所说的蛋白质酪氨酸激酶的控制下，在适合测定蛋白质酪氨酸激酶活性的条件下，将测试肽与有细胞活性或功能的细胞一起温育。测定蛋白质酪氨酸激酶活性，并与在相同条件但没有测试肽存在的情况下生长的相同细胞类型的细胞比较。与在没有测试肽存在的情况下生长的细胞相比，大些或小些的活性表明测试肽调节蛋白质酪氨酸激酶的活性。本专利技术的肽可用在治疗多种由蛋白质酪氨酸激酶活性过度及活性不足引起的疾病。实例包括但不限于，癌症，平滑肌扩增引起的疾病(restinosis和动脉硬化)，牛皮癣，炎症病变，糖尿病，免疫病变及骨质疏松症。本专利技术的肽也可在体外应用，例如，产生抗体，而该抗体特异性地结合蛋白质酪氨酸激酶，而该酪氨酸激酶的HJ环具有与肽相应的序列或亚序列。这些抗体可用来确定表达蛋白质酪氨酸激酶的细胞，以研究蛋白质酪氨酸激酶的细胞内分布。此外，本专利技术的肽可用来确定和定量与衍生肽的蛋白质酪氨酸激酶HJ环结合的配体。附图的简要说明附图说明图1给出了在蛋白质酪氨酸激酶家族中发现的HJ环的共有序列。图2的列表给出了下列蛋白质酪氨酸激酶的HJ环的氨基酸序列c-Src(SEQ ID NO.3)，Lck(SEQ ID NO.4)，Csk(SEQID NO.5)，c-Abl(SEQ ID NO.6)，c-Met(SEQ ID NO.7)，FAK(SEQ ID NO.8)，Lyn/Hck(SEQ ID NO.9)，Endoth(SEQID NO.10)，Trk-神经生长因子(Trk-NGFR)(SEQ ID NO.11)和EGFR(SEQ ID NO.12)。也给出了在这些氨基酸序列中的保守取代基的实例。“*”表示氨基酸侧链上的羧基酸基团被保护为脂族、取代的脂族、苄基、取代的苄基、芳族或取代的芳族酯。图3的列表给出了肽HJ4(SEQ ID NO.13)，HJ4.2(SEQ IDNO.14)，HJ4Nitro(SEQ ID NO.15)，HJ6(SEQ ID NO.16)，HJ7(SEQ ID NO.17)，HJ7.1(SEQ ID NO.18)，HJ8(SEQ IDNO.19)，HJ9(SEQ ID NO.20)，HJ10(SEQ ID NO.21)，HJ11(SEQ ID NO.22)，HJ11.1(SEQ ID NO.23)，HJ11Met(SEQ ID NO.24)，HJ12(SEQ ID NO.25)，HJ13(SEQ ID NO.26)，HJ14(SEQ ID NO.27)，HJ15(SEQ ID NO.28)，HJ18(SEQ ID NO.29)，HJ20(SEQ ID NO.30)，HJ20.1(SEQ IDNO.31)，HJ21.1(SEQ ID NO.32)，HJ22(SEQ ID NO.33)，HJ23.1(SEQ ID NO.34)，HJ24(SEQ ID NO.1)，HJ25(SEQID NO.35)，HJ27(SEQ ID NO.36)，HJ28(SEQ ID NO.37)，HJ30(SEQ ID NO.38)，HJ31(SEQ ID NO.39)，HJ32(SEQ ID NO.2)，HJ33(SEQ ID NO.40)，HJ34(SEQ ID NO.41)，Lena 1(SEQ ID NO.42)，Lena 2(SEQ ID NO.43)，J49(SEQ ID NO.44)的序列。图3还给出了衍生每种肽的蛋白质酪氨酸激酶和与每种肽的序列对应的HJ环部分。图4给出了在增加K105H101(SEQ ID NO.53)浓度(μm)的情况下，与对照物细胞相比，牛大动脉内皮细胞A19扩增的抑制百分比。K105H101是酪氨酸激酶DDR2的HJ环的肽衍生物。图5给出了在增加K055H101(SEQ ID NO.72)浓度(μm)的情况下，与对照物细胞相比，前列腺癌细胞DU145扩增的抑制百分比。K055H101是酪氨酸激酶Lyn的HJ环的肽衍生物。图6给出了在增加K055H101(SEQ ID NO.72)浓度(μm)的情况本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肽，其含有蛋白质酪氨酸激酶ＨＪ环的肽衍生物，其中：（ａ）所说的肽有约五个到约二十个之间的氨基酸或氨基酸类似物；以及（ｂ）所说的肽调节蛋白质酪氨酸激酶的活性。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：施姆尔A本赛森，
申请(专利权)人：儿童医疗中心有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]