人肿瘤抑制基因制造技术

本发明专利技术提供了一种新的人肿瘤抑制基因，它编码肿瘤抑制蛋白，它的表达受人生长激素的抑制。本发明专利技术还提供了组成该基因的ＤＮＡ以及该基因编码的蛋白。该ＤＮＡ具有序列表中ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１或ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的核苷酸序列。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种人肿瘤抑制基因，该基因的表达受生长因子处理所抑制，还涉及组成该基因的DNA以及该DNA编码的蛋白质。由于重组生长激素(rhGH)刺激生长的作用，它在世界上已广泛用作治疗药物来治疗患GH分泌缺陷、Turner综合征或慢性肾病的儿童。另外，由于它表现出各种生理效应，因此预计GH在例如脂质代谢、蛋白质组成代谢、骨质疏松和造血以及更广泛地在衰老上有更广的药物用途。高等动物具有大约100000个基因，其中约15％在细胞内表达并控制生命活动的所有过程(即发育、增殖、分化、体内环境稳定、细胞周期调节等)。这些基因的表达对蛋白合成的调节主要是在转录(mRNA)和翻译水平上，而且认为GH与这些功能紧密相关。另一方面，通过对肿瘤(由细胞异常增殖引起)的研究，在70年代提出存在肿瘤基因，然后Hanabusa等人首次鉴定了一种肿瘤基因v-src。后来，通过分析遗传性肿瘤，发现了各种肿瘤抑制基因，这些基因的抑制是引起肿瘤的原因，而且也已积累了许多证据表明某些肿瘤的进展受到抑制细胞增殖的肿瘤抑制基因所抑制。通常测定肿瘤抑制基因的标准是(1)在肿瘤两个等位基因中发现点突变和缺失，和(2)在遗传性肿瘤高发病率的癌家族中，在含有一个等位基因的生殖细胞中发现了突变。肿瘤抑制基因的特征在于其功能的丧失会导致癌发生。已经表明，在癌的发展和进展中，涉及到一系列基因突变，包括由于基因缺失或突变引起的肿瘤基因的激活和肿瘤抑制基因的灭活。通过肿瘤抑制基因的鉴定以及表明许多肿瘤细胞中缺少正常等位基因的证据积累，肿瘤抑制基因在生理上的重要性已经得到认同。目前已经发现了10个以上的主要肿瘤抑制基因，它们包括RB1基因(其突变导致成视网膜细胞瘤)、p53基因(导致结肠癌)和WTI基因(导致Wilms肿瘤)。最近，进行了许多研究来弄清某些类型肿瘤与染色体13q缺失之间的关系。借助于不同的多态性DNA标记，限制性片段长度多态性(RFLP)已经能检测染色体特定区域中等位基因的缺失(例如杂合性的丧失(LOH))。在前列腺、卵巢、子宫颈、结肠、输尿管和乳腺肿瘤中观察到染色体13q12上缺失了等位基因。例如，两种癌敏感型基因(染色体17q21上的BRCA1和染色体13q12上的BRCA2)被认为是导致具有多起女性早发性乳房癌病例的美国家庭中约80％乳房癌病例的原因。然而，该数字只是针对美国人群获得的，预计其它国家将有所不同。例如，在芬兰乳房癌家庭中，由BRCA1和BRCA2基因突变引起的总共只占21％。这些数据表明其它一些乳房和乳房-卵巢癌易感基因可能是重要的，预计它们中的一些在染色体13q12-13q13上。在许多类型的人肺癌中发现染色体13(包括染色体13q12)缺失，这些肺癌例如是小细胞癌、鳞状细胞癌、大细胞癌和腺癌。然而，由于染色体13的延伸区丢失，不可能对出问题的基因座精确定点。对于非小细胞肺癌获得了准确得多的数据表明特异性地丧失13q12。另外，预计该区域中还存在着一些未知的肿瘤抑制基因。在67％的肝细胞癌中(不论乙型肝炎病毒是阳性还是阴性)，在头颈鳞状细胞癌中(据信是由于其它还未鉴定的位于染色体13q、特别是13q12上的肿瘤抑制基因的缺失引起的)，在胰癌和腺癌中，在垂体腺瘤中(反映具有预后标记的潜在价值的侵蚀型生物活性)，在甲状旁腺腺瘤中，在脂肪瘤中，均发现染色体13Q12基因座明显缺失。对于下述某些血癌获得了与染色体13q12丧失相关的进一步的资料多发性骨髓瘤和浆细胞性白血病、骨髓增生性肿瘤和与T-细胞白血病/淋巴瘤以及外周血液嗜酸细胞增多症相关的非特异性骨髓增生性疾病、慢性成淋巴细胞白血病。这些文献中有一些预示了新的肿瘤抑制基因位于染色体13q12上。预计这些肿瘤抑制基因在生物种属中是保守的，参与调节细胞增殖和凋亡，肿瘤抑制基因的许多产物在调节细胞周期中起作用。因此，已经揭示肿瘤抑制基因产物与细胞粘附蛋白、信号引导分子、转录因子、细胞周期调节分子或凋亡调节分子有关。另一方面，最近的基因分析表明，约80％的人基因与黑尾果蝇(Drosophilamelanogaster)同源，预计果蝇是在分子水平研究人肿瘤发展的很好的模型。包含果蝇基因组的基因数约为10,000。尽管该数目低于人所含基因组的基因数(即约100000)，但是认为人基因与昆虫基因是相似的，因为大多数人基因是多样的衍生的基因。许多蛋白及其结构域和整个复合物以及各种代谢和信号转导系统在人和果蝇之间是保守的。另外，已发现黑尾果蝇产生的肿瘤具有人肿瘤的共同特征，且黑尾果蝇的肿瘤基因和肿瘤抑制基因与人的肿瘤基因和肿瘤抑制基因同源。因此，采用黑尾果蝇基因数据的方法提供了搜寻新基因的强大工具。在上述背景下，本专利技术的目的是提供一种新的共基因表达受人生长激素等抑制的人肿瘤抑制基因，组成该基因的DNA以及由该基因编码的蛋白。如下文所要描述的，在采用家兔软骨细胞的研究中，本专利技术者发现某些基因的表达受到生长因子(如生长激素GH)的抑制，并在分离后检查和鉴定了该基因。结果是，本专利技术者得出结论，该基因可能是一种新的肿瘤抑制基因，因此是到了本专利技术。因此，本专利技术提供了具有序列表中SEQ ID NO1或SEQ ID NO2所示核苷酸序列的DNA。另外，本专利技术提供了构成一种人基因的DNA，该基因的表达受到生长因子的抑制，该DNA具有序列表中SEQ ID NO1或SEQ ID NO2所示核苷酸序列或是相对于此二者任一所述核苷酸序列有一个或多个碱基缺失、替代或增加的核苷酸序列。另外，本专利技术提供了构成所述人基因的DNA，其中生长因子是人生长激素或胰岛素样生长因子-1。另外，本专利技术提供了构成一种人基因的DNA，该人基因编码肿瘤抑制蛋白，具有序列表中SEQ ID NO1或SEQ ID NO2所示核苷酸序列或是相对于此二者任一所述核苷酸序列有一个或多个碱基缺失、替代或增加的核苷酸序列。另外，本专利技术提供了具有序列表中SEQ ID NO3或SEQ ID NO4所示氨基酸序列的蛋白质。另外，本专利技术提供了其表达受生长因子抑制的蛋白，该蛋白具有序列表中SEQ IDNO3或SEQ ID NO4所示氨基酸序列或是相对于此二者任一所述氨基酸序列有一个或多个氨基酸缺失、替代或增加的氨基酸序列。另外，本专利技术提供了上述蛋白质，其中生长因子是人生长激素或胰岛素样生长因子-1。另外，本专利技术提供了一种肿瘤抑制蛋白，该蛋白具有序列表中SEQ ID NO3或SEQ ID NO4所示氨基酸序列或是相对于此二者任一所述氨基酸序列有一个或多个缺失、替代或增加的氨基酸序列。另外，本专利技术提供了一种DNA，该DNA包含编码具有前述氨基酸序列的一种蛋白的核苷酸序列。另外，本专利技术提供了一种探针，该探针包含与组成前述核苷酸序列之一的DNA杂交的DNA。另外，本专利技术提供了一种重组载体，该载体包括组成前述一种核苷酸序列的DNA。另外，本专利技术提供了一种DNA片段，该片段用作引物，并由前述一种核苷酸序列的部分序列组成。另外，本专利技术提供了一种人用诊断性药物制剂，该制剂包含前述探针。诊断性药物制剂可用于侏儒症、巨人症、肢端肥大症、血管病、糖尿病性肾病、或心脏病或恶性肿瘤(包括白血病)，以检查受到生长因子抑制的肿瘤抑制基因的表达。另外，本专利技术提供了含有前述蛋白之本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种ＤＮＡ，它具有序列表中ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１或ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示核苷酸序列。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：古贺淳一，河野惠子，FN佐洛塔里奥夫，
申请(专利权)人：日本化学研究株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]