本发明专利技术涉及一种物质，此物质包含包括ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ２所示序列所含的一个或多个氨基酸序列，或其变体，或其同源物、或其片段、衍生物或模拟物，其作用形式与ＥｔｘＢ和／或ＣｔｘＢ相同或相似，但不表现ＧＭ－１结合活性。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种物质。具体而言，涉及一种医药中十分有用的能展示一种或多种性质的物质。例如此物质能作为毒素引起的腹泻的免疫调制剂和/或佐剂和/或者抑制剂。具体而言，本专利技术涉及免疫调制物质在调节免疫应答，例如和自身免疫疾病相关应答的中的应用。再具体而言，本专利技术涉及此物质作为佐剂和一种相关或无关抗原时一起的应用。更具体而言，本专利技术涉及这种物质在抑制毒素引起的腹泻中的应用。本专利技术还涉及对能和此物质相互作用的试剂筛选的分析。
技术介绍
大肠杆菌(大肠杆菌)热不稳定肠毒素(Etx)和它的同源物来源于霍乱弧菌(Vibrio cholerae)的霍乱毒素(Ctx)都是和宿主细胞表面糖脂受体结合的蛋白毒素。每种毒素由六个非共价结合的多肽链组成，一个A亚基(27kDa)和五个B亚基(11.6kDa)，B亚基能和哺乳动物细胞表面GM-1神经节苷脂受体结合(Nashar et al 1996Proc Natl Acad Sci 93:226-230)。A亚基为毒性基团，有腺苷二磷酸(ADP)ADP-核糖基转移酶活性，而B亚基(EtxB和CtxB)为无毒寡聚体，能结合和交联细胞表面普遍存在的神经节糖苷脂GM-1，促使A亚基进入细胞。同A亚基的弱免疫原性相比，EtxB和CtxB都有很强的免疫原性和各自的全毒素，当和无关抗原结合时，Etx和Ctx(包含A亚基和B亚基)是强有效的佐剂(Ruedl et al 1996 Vaccine 14:792-798；Nashar et al 1993 Vaccine 11:235；Nashar and Hirst 1995Vaccine 13:803；Elson and Ealding 1984 J Immunol133:2892；Lycke and Holmgren 1986 Immunology 59:301)。因为它们的免疫原性，EtxB和CtxB已被用作其它抗原决定簇和抗原的载体(Nashar et al 1993 ibid)，还被用作霍乱和大肠杆菌介导的腹泻疾病的疫苗组分(Jetborn et al 1992 Vaccine 10:130)。为了开发抗霍乱毒素和大肠杆菌热不稳定肠毒素的疫苗，一些关于EtxB和CtxB亚基的优势免疫表位的研究已经进行。下面的公开内容显示了这个领域已经进行的工作。英国专利申请2415419A公开了一个霍乱毒素和大肠杆菌热不稳定肠毒素的合成疫苗，它包含一个载体和一段相当于CtxB序列的合成肽段的偶联物。WO85/02611公开了一个相当于EtxB特定序列的合成肽，被认为是一个有效的偶联物或是产生抗B亚基抗体的活化组分，可以保护宿主动物不受肠毒素的侵染。WO89/10967公开了一个氨基酸序列，代表CtxB的50-64位氨基酸，在疫苗形成中能和一个异种有机体，如鞭状体(Flagellum)和沙门氏菌属(salmonella)的表位结合，提供保护，从而不受异种有机体的侵染，或是有机体抗原引起的条件变化或紊乱。WO90/03437涉及一个CtxB亚基与异种抗原的活性序列融合形成的杂种蛋白，异种抗原被认为在接种疫苗时有意义，尤其利于异种抗原在肠环境中的稳定。WO94/06465涉及一个氨基酸序列，通过或不通过一连接物而连接到一个合适的载体上，这样，连接了载体的氨基酸序列便能产生一个调理或保护性的免疫应答。WO95/29701公开了一个霍乱弧菌(Vibrio cholera)的疫苗，它是一个包含霍乱毒素B亚基(CTB)或是它的一个合成肽段的偶联物，例如CTP3，它包含连接到一个惰性载体上的B链的50-64位上的氨基酸。WO96/26282公开了一个表达系统，它表达源于重组菌株博德特氏菌属(Bordetella)的基因产品，这个基因产品可以是霍乱毒素分子。WO96/34893公开了一个EtxB和CtxB的杂合分子，它能作为有效的疫苗阻止或治愈个体的肠毒素引起的疾病。WO98/21344公开了一个插入了一个抗原肽的EtxB亚基，在宿主动物中，这个嵌合的抗原-EtxB分子能引起这个抗原肽的抗体反应。这些研究涉及的是以下运用(ⅰ)包含CtxB/EtxB部分序列的肽段或(ⅱ)包含偶联于第二实体(譬如一个抗原)的CtxB/EtxB序列的肽，第二实体能引起或放大对于该肽的免疫应答。因此这些文献涉及优势免疫表位CtxB/EtxB或其一部分在引起对这些亚基的免疫应答中的作用，增强由霍乱或大肠杆菌引起的腹泻疾病的免疫性。WO91/07979公开了一个包含部分CtxB和一个目标抗原的表位的嵌合蛋白，其目的是作为疫苗在受试者中引起对这个抗原的免疫应答。在这一点上，CtxB的部分被用作佐剂而不是免疫调制剂。因此，上述文献中没有涉及到CtxB/EtxB或其一部分作为调节免疫应答的免疫调制剂的运用。我们已指出在免疫紊乱时EtxB亚基能作为免疫调制剂。例如，我们已经在WO97/02045中公开了EtxB亚基能结合在哺乳类细胞表面的GM-1神经节苷脂受体上，这种结合对不同淋巴细胞有不同效果，包括CD8+T细胞的衰竭(depletion)和B细胞的激活。而EtxB蛋白突变体(G33D)(缺乏GM-1结合活性)则无上述效果。由于缺乏GM-1受体的结合能力的突变体(例如EtxB(G33D))不能作为佐剂或免疫调制剂，因而，这些实验结果表明所有CtxB和EtxB相关的功能都在于CtxB和EtxB亚基和GM-1受体的结合能力，。这样，到此为止可以说明CtxB和EtxB的免疫调制作用和其它作用都是通过和GM-1的结合介导的。直到现在，仍然没有关于保留了GM-1受体结合能力却没有免疫调制作用的CtxB/EtxB突变体的报道。然而我们却惊奇的发现，并不是所有的CtxB和EtxB的作用都通过GM-1的结合来介导。专利技术概述根据本专利技术，我们发现CtxB和EtxB的免疫调制作用和其它一些功能并不是通过GM-1结合介导。本专利技术的各方面将在权利要求书和以下描述与讨论中述及。在本专利技术的一个方面，本专利技术提供了一种物质，该物质包括如下一或多种一段包含有SEQ ID No.2中的氨基酸序列的序列，或其变体，或其同源物，或其片段，或其衍生物，或其模拟物；此物质能以相同或相似于CtxB或EtxB的方式起作用；但这种物质没有GM-1的结合活性。在本专利技术的一个优选的方面，本专利技术提供了一种物质，该物质包括如下一或多种包括SEQ ID No.2所示序列的氨基酸序列，或其变体，或其同源物，或其片段，或其衍生物，或其模拟物；该物质能以EtxB和/或CtxB环相同或相似的方式起作用；但该物质不和GM-1结合。在本专利技术高度优选的一个方面，本专利技术提供了一种物质，该物质包括如下一或多种包含有SEQ ID No.2中的氨基酸序列的序列，或其变体，或其同源物，或其片段，或其衍生物，或其模拟物；此物质能以相同或相似于CtxB和/或EtxB上的β4-α2环的方式起作用；但这种物质没有GM-1的结合活性。本专利技术中的物质可以是一段氨基酸序列或其化学衍生物。这个物质可以是一段合成肽或合成肽的变体，譬如retroinverso D肽。这种物质甚至可以是一个有机化合物或其它化学物质。以下的实例为SEQ ID No.2的模拟物。本专利技术中的物质以相同或相似于Ct本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种包括下列一种或几种的物质：一段包含ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２所示序列的氨基酸序列，或它的变体，或其同源物，或其片段，或其衍生物，或其模拟物；这种物质能以ＥｔｘＢ和／或ＣｔｘＢ相同或相似的方式起作用；但这种物质不具有ＧＭ－１结合活性。
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：NA威廉斯，TR希尔斯特，
申请(专利权)人：布里斯托尔大学，
类型：发明
国别省市：GB[英国]
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