一种通过化学转化法间接测定中药材或中成药中藁本内酯含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种通过化学转化法间接测定中药材或中成药中藁本内酯准确含量的方法，是通过对中药材或中成药粉末中的藁本内酯进行提取和/或转化，使中药材或中成药中化学结构不稳定的藁本内酯转化为结构稳定的环丙藁本，再通过HPLC外标法直接测定环丙藁本的含量，然后通过等摩尔量间接计算得到中药材或中成药中藁本内酯的含量。本发明专利技术方法用于定量检测药物中藁本内酯的含量，其结果可靠，准确度高，方法稳定性、重现性良好，通过该方法的应用达到有效控制药物质量的直接目标。

【技术实现步骤摘要】
一种通过化学转化法间接测定中药材或中成药中藁本内酯含量的方法
本专利技术涉及一种中药材或中成药中藁本内酯的含量测定方法，尤其涉及一种通过化学转化测定环丙藁本的含量而间接计算药材或药物中藁本内酯准确含量的方法，属于药物分析领域。
技术介绍
伞形科植物中，当归属和藁本属的植物均含有苯酞类化合物，如当归和川芎等药用植物，该类化合物为植物挥发油的主要成分，大都具有浓烈的芳香气味，在植物中具有丰富的含量。该类化合物结构类型较多，且普遍具有化学不稳定性，单独存在遇环境中的光、热以及酶等容易氧化或降解。但该类化合物普遍具有较好的药理活性，如抗氧化、抗血小板聚集、促进微循环、镇痛消炎、中枢神经保护以及抗肿瘤等显著的药理活性。藁本内酯（ligustilide）是传统中药当归、川芎等伞形科植物挥发油中的主要药理活性成分，其含量高达1-2%左右。具有显著的心脑血管药理活性。国内外学者对藁本内酯的药理活性曾经和正在进行大量的研究工作，发表了相关的药理活性研究成果，如藁本内酯对脑神经保护，改善微循环，舒张血管，抑制血管平滑肌细胞增殖，抗抑郁，抗阿尔茨海默症，镇痛消炎等重要药理作用，同时研究人员对于藁本内酯的药理研究成果进行了大量的综述（A.DouglasKinghorn,HeinzFalk,SimonGibbons,andJun’ichiKobayashiedited,ProgressintheChemistryofOrganicNaturalProducts,2017,P127,SpringerInternationalPublished.;左爱华,王莉,肖红斌,藁本内酯药理学和药代动力学研究进展,中国中药杂志,2012,37(22):3350-3353.）。中药成分复杂，功能主治多样，中药质量标志物可以用于药材质量的准确控制。藁本内酯作为当归和川芎药材挥发油的主要成分，在改善血液流变性等重要药理活性中发挥关键和主要作用，通常被作为当归和川芎的药效标志物。但《中国药典》2015年版中当归和川芎药材的定量控制指标为阿魏酸，其专属性不强，不能充分反映药材的质量属性和药材活血化瘀的主要功效（闫孟琳，丁国钰，丛龙飞，李超雯，牛瑞雪，姜民，侯媛媛，张铁军，白钢，刘昌孝。基于质量标志物的当归血管舒张功效的近红外快速评价，中草药，2020，50(19):4538-4546.）。藁本内酯由于具有3个烯键和1个羰基双键的高度不饱和共轭体系，但未形成芳香环的稳定共轭体系，反应位点较多，反应活性较强，相对自由能较低，故容易发生1,2、1,4和1,6的Diels-Alder反应，形成复杂的二聚或三聚化合物。由于该化合物天然的化学结构不稳定性，藁本内酯的国家药典标准品质量一直未得到较好的解决，致使采用藁本内酯为定量检测指标的技术问题一直没有被应用。大量的研究显示，当归和川芎药材中藁本内酯的含量随着药材种植地域（产地）、药材储存时间以及药材初加工方式的不同而产生非常显著的变化。由于含有藁本内酯的药物（饮片、中成药、中药注射剂等）的临床治疗效果会随着中成药和药材饮片的质量发生显著的变化，因此有必要定量控制有关当归、川芎等含有藁本内酯活性成分的药物的准确含量来满足药物的有效、安全和可控的基本特征。虽然当归的国际标准（ISO-22584，2019年12月发布）中未对藁本内酯的含量做出限定，但英国药典（2017版）和香港药典对藁本内酯的含量已经做出明确规定（英国：大于等于0.1%；香港：大于等于0.6%），尤其香港药典只对藁本内酯做出限定，不再控制挥发油总量和阿魏酸的含量要求，随着国际范围内当归药材标准的逐步提高，藁本内酯的含量限定要求成为必然局势。CN201810730744.7公开了采用藁本内酯的化学结构衍生和活性筛选得到化合物环丙藁本，成功解决了藁本内酯的稳定化问题。因此，可以利用环丙藁本为标准品，通过化学转化法间接测定当归、川芎等含有藁本内酯中药材中活性成分藁本内酯的准确含量，也可以应用于含有藁本内酯活性成分的中成药的质量控制。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种通过化学转化测定环丙藁本的含量而间接计算中药材或中成药中藁本内酯准确含量的方法。一、中药材或中成药中藁本内酯含量的测定本专利技术通过测定环丙藁本含量间接计算中药材或中成药中藁本内酯含量的方法，是通过对中药材或中成药中的藁本内酯进行提取、转化，使中药材或中成药中化学结构不稳定的藁本内酯转化为结构稳定的环丙藁本，再通过HPLC外标法直接测定环丙藁本的含量，然后通过等摩尔量间接计算得到中药材或中成药中藁本内酯的含量。中药材或中成药中的藁本内酯转化成环丙藁本的路线如下式所示：本专利技术利用藁本内酯化学结构中内酯环羰基官能团的强亲电活性与环丙胺的氨基孤对电子发生分子间亲核取代反应，生成酰胺过渡态，同时环戊烯基侧链的烯醇结构发生异构化形成酮羰基，比较巧合的酰胺键的孤对电子同时又与异构化的酮羰基发生二次分子内亲核取代反应，产生游离的羟基官能团，同时环丙藁本的内酯环通过两次亲核反应最终形成五元环状的内酰胺稳定结构。因此，该检测方法通过化学转化将不稳定的藁本内酯转化为等摩尔的稳定产物环丙藁本，通过测定反应产物中生成的环丙藁本的量，可间接计算药材或药物中的藁本内酯含量。图1为藁本内酯和环丙藁本的HPLC典型色谱图。其中，A为330nm波长下HPLC检测的当归甲醇提取物液相色谱图，tR=20min处为藁本内酯色谱峰。tR=12min未有色谱峰出现。B为232nm波长下HPLC检测的当归甲醇提取物液相色谱图，tR=20min处为藁本内酯色谱峰，表示藁本内酯在该波长下也有紫外吸收，但在tR=12min未有色谱峰出现，表明该波长作为环丙藁本的定量检测波长不受当归甲醇提取物中其它杂质的干扰。C为330nm波长下HPLC检测的当归甲醇/环丙胺反应液液相色谱图，tR=20min处未出现藁本内酯色谱峰，显示该化合物已反应完全。tR=12min未有色谱峰出现，表明生成的环丙藁本在该波长下没有紫外吸收，也没有其它藁本内酯的类似物在该位置出现而影响环丙藁本的准确测定。D、为232nm波长下HPLC检测的当归甲醇/环丙胺反应液液相色谱图，tR=20min处未有藁本内酯色谱峰出现，表明反应完全。tR=12min为环丙藁本的色谱峰，其余临近的色谱峰分离度良好，可以用于定量检测。图2为环丙藁本和藁本内酯在DAD检测器中记录的紫外吸收光谱图。其中A为藁本内酯的UV图，分别在205nm，280nm和330nm处有最大吸收波长。B、为环丙藁本的UV图，分别在232nm和292nm处有最大吸收波长。本专利技术检测中药材或中成药中的藁本内酯含量的具体方法如下：方法I：先采用有机溶剂和环丙胺对于中药材或中成药中的藁本内酯进行提取和/或反应同步进行，防止藁本内酯在提取和反应过程中的降解，再通过超声辅助处理加速藁本内酯固定化，同时促进固定化的环丙藁本在植物细胞中的溶出；然后通过一段时间的藁本内酯和环丙胺的充分反应促使该反应完全转化，最后反应体系用溶剂充分洗脱、转移、稀释、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种通过化学转化法间接测定中药材或中成药中藁本内酯含量的方法，是通过对中药材或中成药粉末中的藁本内酯进行提取和/或转化，使中药材或中成药中化学结构不稳定的藁本内酯转化为结构稳定的环丙藁本，再通过HPLC外标法直接测定环丙藁本的含量，然后通过等摩尔量间接计算得到中药材或中成药中藁本内酯的含量。/n

【技术特征摘要】
1.一种通过化学转化法间接测定中药材或中成药中藁本内酯含量的方法，是通过对中药材或中成药粉末中的藁本内酯进行提取和/或转化，使中药材或中成药中化学结构不稳定的藁本内酯转化为结构稳定的环丙藁本，再通过HPLC外标法直接测定环丙藁本的含量，然后通过等摩尔量间接计算得到中药材或中成药中藁本内酯的含量。


2.如权利要求1所述一种通过化学转化法间接测定中药材或中成药中藁本内酯含量的方法，其特征在于：先采用有机溶剂和环丙胺对中药材或中成药中的藁本内酯进行提取和/或反应同步进行，防止藁本内酯在提取和反应过程中的降解，再通过超声辅助处理加速藁本内酯固定化，同时促进固定化的环丙藁本在植物细胞中的溶出；然后通过一段时间的藁本内酯和环丙胺的充分反应促使该反应完全转化，最后反应体系用溶剂充分洗脱、转移、稀释、定量后直接进行HPLC外标法测定环丙藁本的含量，并通过等摩尔的量计算，间接得到药物中藁本内酯的含量。


3.如权利要求2所述一种通过化学转化法间接测定中药材或中成药中藁本内酯含量的方法，其特征在于：具体工艺如下：
（1）供试品溶液的制备：将中药材粉碎并过四号药典筛；将中药材粉末与环丙胺加入到有机溶剂中，在0~60℃水浴中电磁搅拌提取/反应5~20min；再超声提取2~10min，然后继续在0~60℃水浴中电磁搅拌提取/反应30~90min，反应物抽滤后有机溶剂洗脱三次，合并洗脱溶液；稀释至环丙藁本的浓度为80µg/mL~400µg/mL，作为供试品溶液；药材粉末按0.05g/mL~0.5g/mL加入到有机溶剂中；中药材粉末与环丙胺的质量体积比为0.1g/mL~0.77g/mL；
（2）HPLC外标法测定供试品溶液中环丙藁本含量：HPLC外标法测定环丙藁本含量的色谱条件：流动相由甲醇和水组成，且甲醇和水的体积比为35:65，进样量：20μL，流速：1mL/min；测定波长：200~400nm；
（3）通过等摩尔量计算，间接得到药物中藁本内酯的含量。


4.如权利要求1所述一种通过化学转化法间接测定中药材或中成药中...

【专利技术属性】
技术研发人员：柳军玺，伍鹏程，
申请(专利权)人：中国科学院兰州化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃;62