【技术实现步骤摘要】
一种定量分析人血浆维格列汀浓度的LC-MS/MS检测方法
本专利技术属于药物分析
，涉及一种定量分析人血浆维格列汀浓度的LC-MS/MS检测方法，具体地说，涉及一种应用高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术进行人血浆中维格列汀浓度的检测方法。
技术介绍
维格列汀(vildagliptin)是一种具有选择性、竞争性、可逆的二肽基肽酶IV(dipeptidylpeptidase-4，DPP-4)抑制剂，由瑞士诺华制药有限公司研制开发,化学名为1-[[(3-羟基-1-金刚烷基)氨基]乙酰基]-2-氰基-(S)-四氢吡咯烷。2007年获得欧盟委员会批准，用于治疗2型糖尿病，其作用机理是通过与DPP-4结合形成DPP-4复合物而抑制该酶的活性，在提高胰高血糖素样肽-1(GLP-1)浓度，促使胰岛B细胞产生胰岛素的同时，降低胰高血糖素浓度，从而降低血糖，且对体重无明显影响。目前在世界上有超过132个国家使用。国内外血浆中维格列汀浓度的检测方法主要包括高效液相色谱法(HPLC)、毛细管电泳(CE)加紫外线(UV)或(...
【技术保护点】
1.一种定量分析人血浆维格列汀浓度的LC-MS/MS检测方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)样品制备：/na.标准样品制备：精密称取维格列汀对照品10.68mg于10ml容量瓶中，用甲醇溶液4ml和3ml分别冲洗管壁和称量纸残余至容量瓶中，混匀溶解，再加入甲醇定容，颠倒混匀，配成浓度为1.068mg/ml的维格列汀标准储备液A；用甲醇：水溶液＝50：50，V/V稀释配制维格列汀的标曲工作溶液，浓度分别为：22.25ng/ml、44.5ng/ml、89.0ng/ml、178.0ng/ml、534.0ng/ml、1186.67ng/ml、3560.0ng/ml、10680...
【技术特征摘要】
1.一种定量分析人血浆维格列汀浓度的LC-MS/MS检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)样品制备：
a.标准样品制备：精密称取维格列汀对照品10.68mg于10ml容量瓶中，用甲醇溶液4ml和3ml分别冲洗管壁和称量纸残余至容量瓶中，混匀溶解，再加入甲醇定容，颠倒混匀，配成浓度为1.068mg/ml的维格列汀标准储备液A；用甲醇：水溶液＝50：50，V/V稀释配制维格列汀的标曲工作溶液，浓度分别为：22.25ng/ml、44.5ng/ml、89.0ng/ml、178.0ng/ml、534.0ng/ml、1186.67ng/ml、3560.0ng/ml、10680.0ng/ml；
以人空白血浆作为空白基质，加入维格列汀标准工作溶液，配制8个已知的不同浓度的维格列汀标准样品；
b.质控样品制备：精密称取维格列汀对照品10.70mg于10ml容量瓶中，用甲醇溶液4ml和3ml分别冲洗管壁和称量纸残余至容量瓶中，混匀溶解，再加入甲醇定容，颠倒混匀，配成浓度为1.070mg/ml的维格列汀标准储备液B；用甲醇：水溶液＝50：50，V/V稀释配制维格列汀的质控工作溶液，浓度分别为：44.583ng/ml、535.0ng/ml、8560.0ng/ml；
以人血浆作为空白基质，加入维格列汀标准溶液，配制低、中、高三个已知浓度的维格列汀质控样品；
(2)样品处理：包括待测人血浆样品、标准样品、质控样品，处理方法均如下：
取血浆样品100μl至2mlEP管中，加入1.0ml含3.15ng/ml内标的沉淀剂乙腈，振荡器上自动震荡5min，15000r/min下离心10min后，吸取50μl上清液至另一干净2mlEP管中，再加入300μl5mM甲酸铵水溶液与乙腈混合液，所述甲酸铵水溶液与乙腈混合液的体积比为1：1，振荡器上自动震荡2min，15000r/min下离心5min后，转移上清至进样瓶；
(3)样品检测：步骤(2)获得的样品，取2μl自动进样，进行高效液相色谱串联质谱检测；
(4)标准曲线制作和定量分析：步骤(3)完成后，以维格列汀与内标峰面积的比值(Y)为纵坐标，以维格列汀在血浆样本中的浓度X为横坐标，采用加权最小二乘法权重因子l/X2进行线性回归，制作到维格列汀的标准曲线方程，再通过标准曲线定量质控样本和待测人血浆样本。
2.根据权利要求1所述的定量分析人血浆维格列汀浓度的LC-MS/MS检测方法，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：谭志荣，王医成，彭静波，饶泰，陈尧，周宏灏，贺康，
申请(专利权)人：中南大学湘雅医院，
类型：发明
国别省市：湖南;43
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