家蚕丝心蛋白重链表达系统及其制备方法和应用技术方案

本发明专利技术公开了家蚕丝心蛋白重链表达系统及其制备方法和应用，所述家蚕丝心蛋白重链表达系统含有目的基因表达框，所述表达框5’端为丝心蛋白重链启动子3信号肽序列；3’端为截断轻链结合位点；将该表达框用于表达目的蛋白，发现目的蛋白能够在丝腺及茧丝的丝素层表达，表明含信号肽的N端和C端截短后并不影响目的蛋白的表达及分泌；通过丝素N端和C端的解析为蚕丝的成丝机理提供了实验及理论基础，有利于创造真正实用的家蚕丝腺生物反应器，保持蚕丝产业可持续发展，促进我国蚕学和昆虫学科的长远发展。

【技术实现步骤摘要】
家蚕丝心蛋白重链表达系统及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种家蚕丝心蛋白重链表达系统(N端仅含信号肽，C端含截短LBS)，还涉及该系统的制备方法和应用。
技术介绍
家蚕茧丝的主要组成是丝素(fibroin)和丝胶(sericin)两种蛋白，其中丝素是茧丝的主要成分，约占茧丝重的82％。丝素由家蚕的后部丝腺(PSG)细胞合成，丝胶由中部丝腺(MSG)细胞合成，它们都在中部丝腺聚集，最后经过前部丝腺(ASG)被榨丝后而吐丝结茧。丝素由350-kDa的重链蛋白(H-chain)，26-kDa的轻链蛋白(L-chain)和30-kDa的fibrohexamerin/P25(fhx)三种蛋白构成。这些蛋白在后部丝腺细胞内首先按照一定的比例(H-chain：L-chain：fhx＝6：6：1)形成丝素基本单元，然后丝素基本单位被分泌到丝腺腔。其中丝素基本单位由6个通过二硫键结合的重链、轻链(H-L)二聚体和1个P25糖蛋白分子组成。H-L二聚体在Fib-L的Cys-172和Fib-H的Cys-c20之间形成二硫键。一个P25糖蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.家蚕丝心蛋白重链表达系统，其特征在于：所述家蚕丝心蛋白重链表达系统含有目的基因表达框，所述表达框5’端为丝心蛋白重链启动子信号肽序列Fib-H P

【技术特征摘要】
1.家蚕丝心蛋白重链表达系统，其特征在于：所述家蚕丝心蛋白重链表达系统含有目的基因表达框，所述表达框5’端为丝心蛋白重链启动子信号肽序列Fib-HP(s)；3’端为截短轻链结合位点LBS(s)；所述丝心蛋白重链启动子信号肽序列Fib-HP(s)的核苷酸如SEQIDNO.1所示；所述截短轻链结合位点LBS(s)的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。


2.含有权利要求1所述家蚕丝心蛋白重链表达系统的重组载体。


3.根据权利要求2所述的重组载体，其特征在于：所述家蚕丝心蛋白重链表达系统由含有目的基因表达框通过BamHⅠ和HindⅢ酶切位点连入pSLfa1180fa载体而得。


4.根据权利要求2所述的重组载体，其特征在于：所述家蚕丝心蛋白重链表达系统由含有目的基因表达框连入pBac[3×P3DsRedaf]载体的AscⅠ和FseⅠ酶切位点处。


5.权利要求3所述重组载体的制备方法，其特征在于：所述重组载体由含有目的基因表达框连入pSLfa1180fa载体的BamHⅠ和HindⅢ酶切位点处而得。


6.根据权利要求5所述重组载体的制备方法，其特征在于，制备方法如下：先将截短轻链结合位点LBS(s)通过BamHI和SalI酶切位点连入pSLfa118...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵爱春，郝占章，龙定沛，
申请(专利权)人：西南大学，重庆西蚕生物技术研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆;50