稳定样本中所含蛋白质的方法、用于稳定样本中所含蛋白质的溶液技术

本发明专利技术提供一种稳定蛋白质的方法，包括使源自活体的样本中所含蛋白质与芳基硼酸共存的步骤，源自活体的样本中所含蛋白质是选自由血红蛋白、结合珠蛋白、和血红蛋白‑结合珠蛋白复合物组成的组中的至少一种。根据本发明专利技术，能够稳定源自活体的样本中所含血液蛋白质等蛋白质。本发明专利技术还提供用于稳定源自活体的样本中所含蛋白质的稳定溶液，以及用于检测源自活体的样本中所含蛋白质的方法以及试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】稳定样本中所含蛋白质的方法、用于稳定样本中所含蛋白质的溶液
本专利技术涉及稳定源自活体的样本中所含蛋白质的方法、用于稳定源自活体的样本中所含蛋白质的稳定溶液、以及用于检测源自活体的样本中所含蛋白质的方法及试剂盒。
技术介绍
对粪便、尿、唾液等样本中所含蛋白质的检测用于多种疾病的诊断。例如，通过检测粪便样本中血液的粪便隐血检查，能够得到以大肠癌为主的消化器官疾病诊断中的重要信息。关于检测粪便等样本中所含的血红蛋白、结合珠蛋白、血红蛋白-结合珠蛋白复合物等血液蛋白质等的方法，已知有使用针对这些蛋白质的抗体进行检测的免疫学测定方法。通常，用于隐血检查的样本由受检者自己采集到存入了保存溶液的保存容器中，并运送至医院等的检查机构。多数情况下，运送含有样本的保存溶液(试样)需要数日，在运送中的温度管理一般较为困难，因此多被置于不利于保存的温度条件下。若样本中所含的血液蛋白质等蛋白质因运送时的温度条件等而改性、或被样本中的细菌或酶分解或修饰，表位或者其附近的结构发生变化，则抗体会无法识别这些粪便中所含的蛋白质，而无法通过免疫学测定法进行准确的测定。尤其是血红蛋白在溶液中是不稳定的，高温条件下特别容易改性或分解。作为稳定保存溶液中血红蛋白的技术，提出了多种方法，例如：添加硫柳汞、洗必泰等抗菌剂的方法(例如，专利文献1)；添加蛋白酶抑制剂的方法(例如，专利文献2)；添加糖苷酶型裂解酶的方法(例如，专利文献3)；添加血红蛋白的酶降解产物的方法(例如，专利文献4)；添加苹果酸等有机酸的方法(例如，专利文献5)；添加氨基羧酸的方法(例如，专利文献6)；以及添加卤代烷磺酸的方法(例如，专利文献7)等。而且，为了稳定血红蛋白，已知还有添加结合珠蛋白的方法(例如，专利文献8)。已知的是，结合珠蛋白存在于多种动物的血液中，可与血红蛋白快速结合而形成稳定的血红蛋白-结合珠蛋白复合物(Hb-Hp复合物)。通过在保存粪便等样本的保存溶液等中预先添加结合珠蛋白，在加入粪便等样本时，能够将源自活体的样本中所含的血红蛋白转化成稳定的血红蛋白-结合珠蛋白复合物。然而，因为血红蛋白非常不稳定，即使是这些血红蛋白的稳定方法，也未能充分防止其改性或分解。因此，虽然作为检测便隐血的方法已知有测定比血红蛋白稳定性更好的转铁蛋白的方法(例如，专利文献9)，然而血液中的转铁蛋白只有血红蛋白的1/60左右，因此存在敏感度低的问题。现有技术文献专利文献专利文献1：日本特开昭63-271160号公报专利文献2：日本特开平3-279859号公报专利文献3：日本特开昭63-246667号公报专利文献4：日本特开平11-218533号公报专利文献5：日本特开2003-14768号公报专利文献6：日本特开2009-097956号公报专利文献7：日本特开2016-191580号公报专利文献8：日本特开平10-132824号公报专利文献9：日本特开昭63-246668号公报
技术实现思路
专利技术要解决的问题由于在粪便、尿、唾液等源自活体的样本、尤其是粪便中，多存在引起血红蛋白等蛋白质分解或修饰的细菌或酶，因此，即使是血红蛋白-结合珠蛋白复合物这样稳定性较高的蛋白质，有时也会被分解或修饰。因此，本专利技术的目的在于，提供一种即使在源自活体的样本中所含的蛋白质容易发生分解或改性等的不利温度条件下也能够提高稳定性的方法。解决问题的手段(1)一种稳定源自活体的样本中所含蛋白质的方法，包括使所述源自活体的样本中所含蛋白质与芳基硼酸共存的步骤，所述源自活体的样本中所含蛋白质是选自由血红蛋白、结合珠蛋白、和血红蛋白-结合珠蛋白复合物组成的组中的至少一种。(2)根据(1)所述的方法，芳基硼酸是选自由苯基硼酸及其衍生物组成的组中的至少一种。(3)根据(1)(2)所述的方法，芳基硼酸是选自由苯基硼酸、羟基苯基硼酸、羧基苯基硼酸、氨基苯基硼酸和这些硼酸的盐组成的组中的至少一种。(4)根据(1)-(3)所述的方法，所述步骤是将所述源自活体的样本中所含蛋白质分散在含有所述芳基硼酸的溶液中的步骤，所述溶液中所述芳基硼酸的浓度为0.1mmol/L以上。(5)根据(1)-(4)所述的方法，所述步骤是使所述源自活体的样本中所含蛋白质与所述芳基硼酸以及糖共存的步骤。(6)根据(5)所述的方法，所述糖是选自由糖醇、单糖和二糖组成的组中的至少一种。(7)根据(5)(6)所述的方法，所述糖是选自由山梨糖醇、葡萄糖、甘露醇、果糖、木糖醇、赤藓糖醇、蔗糖、海藻糖、乳糖、和麦芽糖组成的组中的至少一种。(8)根据(5)-(7)所述的方法，所述步骤是将所述源自活体的样本中所含蛋白质分散在含有所述芳基硼酸和所述糖的溶液中的步骤，所述溶液中所述糖的浓度为5mmol/L以上。(9)根据(1)-(8)所述的方法，所述源自活体的样本至少包括血红蛋白，所述方法包括使该血红蛋白与结合珠蛋白接触而形成血红蛋白与结合珠蛋白的复合物的步骤。(10)根据(1)-(9)所述的方法，所述源自活体的样本是粪便、唾液、或尿。(11)一种用于稳定源自活体的样本中所含蛋白质的稳定溶液，其含有芳基硼酸，所述源自活体的样本中所含蛋白质是选自由血红蛋白、结合珠蛋白、和血红蛋白-结合珠蛋白复合物组成的组中的至少一种。(12)根据(11)所述的稳定溶液，所述芳基硼酸是选自由苯基硼酸及其衍生物组成的组中的至少一种。(13)根据(11)(12)所述的稳定溶液，所述芳基硼酸是选自由苯基硼酸、羟基苯基硼酸、羧基苯基硼酸、氨基苯基硼酸和这些硼酸的盐组成的组中的至少一种。(14)根据(11)-(13)所述的稳定溶液，其含有糖。(15)根据(14)所述的稳定溶液，糖是选自由山梨糖醇、葡萄糖、甘露醇、果糖、木糖醇、赤藓糖醇、蔗糖、海藻糖、乳糖、和麦芽糖组成的组中的至少一种。(16)根据(11)-(15)所述的稳定溶液，其含有结合珠蛋白。(17)根据(11)-(16)所述的稳定溶液，所述样本是粪便、唾液、或尿。(18)根据(11)-(17)所述的稳定溶液，所述稳定溶液是用于保存所述源自活体的样本的溶液。(19)一种检测源自活体的样本中的蛋白质的方法，包括：在(11)-(18)所述的稳定溶液中添加所述源自活体的样本而得到含有该样本的试样的步骤；和通过免疫学测定方法检测试样中的所述蛋白质的步骤，所述源自活体的样本中的蛋白质是选自由血红蛋白、结合珠蛋白、和血红蛋白-结合珠蛋白复合物组成的组中的至少一种。(20)根据(19)所述的方法，所述源自活体的样本至少包括血红蛋白，所述试样中的所述血红蛋白与结合珠蛋白形成复合物。(21)根据(20)所述的方法，所述稳定溶液是(16)所述的稳定溶液。(22)一种用于检测源自活体的样本中所含蛋白质的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种稳定源自活体的样本中所含蛋白质的方法，其特征在于，/n包括使所述源自活体的样本中所含蛋白质与芳基硼酸共存的步骤，/n所述源自活体的样本中所含蛋白质是选自由血红蛋白、结合珠蛋白、和血红蛋白-结合珠蛋白复合物组成的组中的至少一种。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180302 JP 2018-0372271.一种稳定源自活体的样本中所含蛋白质的方法，其特征在于，
包括使所述源自活体的样本中所含蛋白质与芳基硼酸共存的步骤，
所述源自活体的样本中所含蛋白质是选自由血红蛋白、结合珠蛋白、和血红蛋白-结合珠蛋白复合物组成的组中的至少一种。


2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述芳基硼酸是选自由苯基硼酸及其衍生物组成的组中的至少一种。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述芳基硼酸是选自由苯基硼酸、羟基苯基硼酸、羧基苯基硼酸、氨基苯基硼酸和这些硼酸的盐组成的组中的至少一种。


4.根据权利要求1-3中的任一项所述的方法，其中，所述使所述源自活体的样本中所含蛋白质与芳基硼酸共存的步骤是将所述源自活体的样本中所含蛋白质分散在含有所述芳基硼酸的溶液中的步骤，
所述溶液中所述芳基硼酸的浓度为0.1mmol/L以上。


5.根据权利要求1-4中的任一项所述的方法，其中，所述使所述源自活体的样本中所含蛋白质与芳基硼酸共存的步骤是使所述源自活体的样本中所含蛋白质与所述芳基硼酸以及糖共存的步骤。


6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述糖是选自由糖醇、单糖和二糖组成的组中的至少一种。


7.根据权利要求5或6所述的方法，其中，所述糖是选自由山梨糖醇、葡萄糖、甘露醇、果糖、木糖醇、赤藓糖醇、蔗糖、海藻糖、乳糖、和麦芽糖组成的组中的至少一种。


8.根据权利要求5-7中的任一项所述的方法，其中，所述使所述源自活体的样本中所含蛋白质与芳基硼酸共存的步骤是将所述源自活体的样本中所含蛋白质分散在含有所述芳基硼酸和所述糖的溶液中，
所述溶液中所述糖的浓度为5mmol/L以上。


9.根据权利要求1-8中的任一项所述的方法，其中，所述源自活体的样本至少包括血红蛋白，
所述方法包括使该血红蛋白与结合珠蛋白接触而形成血红蛋白与结合珠蛋白的复合物的步骤。


10.根据权利要求1-9中的任一项所述的方法，其中，所述源自活体的样本是粪便、唾液或尿。


11.一种用于稳定源自活体的样本中所含蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：酒卷望，田口秀典，牧之段满，山田未佑，
申请(专利权)人：荣研化学株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP