本发明专利技术披露了其特征在于包含标识为SEQ ID No.5或SEQ ID No.12的氨基酸序列的白介素‑15(IL‑15)活性的拮抗剂肽，或者这些肽的同二聚体，以及编码具有标识为SEQ ID No.5或SEQ ID No.12的序列的肽的核酸。包含所述肽或编码所述序列的核酸的药用组合物是本发明专利技术的一部分。此外，本发明专利技术提供了包含标识为SEQ ID No.5或SEQ ID No.12的氨基酸序列的IL‑15的拮抗剂肽或者这些肽的同二聚体在制备药物中的用途。本发明专利技术考虑了用于治疗与IL‑15的过表达相关的疾病、前列腺癌和肾癌的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】白介素-15活性的拮抗剂肽
本专利技术涉及分子药理学和人类医学的领域，特别地涉及获得具有比以前所鉴定的肽拮抗剂更大的效应的白介素-15(IL-15)活性的拮抗剂肽，其衍生自所述细胞因子。由于其生物学活性，本专利技术的拮抗剂肽可用于治疗与IL-15和/或IL-15受体的α亚基(IL-15Rα)的非调控表达相关的疾病。现有技术IL-15最初被鉴定为T细胞的激活因子(Grabstein,K.H.等人,Science1994,264,965-968；Burton,J.D.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA1994,91,4935-4939)。尽管IL-15的信使核糖核酸(mRNA)的分布广泛，但是蛋白质的表达在转录后水平上强烈地受到调控(BamfordRN等人,J.Immunol1998,160:4418-4426；KurysG等人,JBiolChem2000,275:30653-30659)。该细胞因子可以作为膜内在蛋白质(Musso等人,Blood1999,93:3531-3539)或以可溶形式进行表达，分别充当受体或配体。作为膜内在蛋白质进行表达的IL-15通过与可溶性IL-15Rα相互作用而触发反向信号传导的机制。这包括促炎细胞因子(肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8))的分泌和细胞迁移(BudagianV.等人,J.BiolChem2004,40:42192-42201)。IL-15作为配体的生物学效应是通过与由α、β和γc亚基构成的细胞膜三聚体受体的结合来介导的。这些亚基可以在同一个细胞中共表达，或者可以发生与α亚基相结合的IL-15被呈递给只表达β和γc亚基的邻近细胞，已知为反式信号传导的机制(BurkettP.R.等人,JExp.Med2004,200:825-834)。尽管β和γc亚基是与其他细胞因子共享的，但是IL-15Rα对于IL-15是特异性的(GiriJG等人,EMBOJ1995,14:3654-63)。已经将IL-15的非调控表达与自身免疫疾病和炎性疾病例如克罗恩病(KirmanI.,Am.J.Gastroenterol.1996,91:1789-1794)、银屑病(RückertR.J.Immunol2000,165:2240-2250)、某些类型的白血病(YamadaY.LeukemiaandLymphoma1999,35:37-45)和类风湿性关节炎(RA)(MclnnesI.B.,ImmunologyToday1998,19:75-79)的发病机理和发展相联系。在Mclnnes和Ziolkowska的工作中所显示的实验证据支持IL-15作为有吸引力的治疗靶标，特别是在RA中。这些证据包括：在滑膜液中升高的IL-15浓度，在滑膜细胞中增加的表达，TNF–α、IL-6和IL-17分泌的刺激，和T细胞迁移至RA患者的滑膜液(MclnnesI.B.等人,NatMed1997,3:189-195；ZiolkowskaM.等人,JImmunology2000,164:2832-2838)。在该疾病的动物模型中，Yoshihara等人证明，IL-15在对于该细胞因子来说转基因的小鼠中加重由胶原所诱导的关节炎(YoshiharaK.等人,EurJ.Immunol.2007,37:2744-2752)。所有这些要素暗示，IL-15的拮抗剂在治疗RA和其他与该细胞因子的过表达相关的自身免疫疾病和炎性疾病中可能是有用的。在这个意义上，开发了在Asp56和Gln156处具有置换的IL-15的突变蛋白质(经突变的蛋白质)，和针对受体亚基的抗体，其作为拮抗剂分子起作用(专利号US6,177,079、US6,168,783、US6,013,480、US6,001,973、US9,706,931和国际专利申请号WO9741232)。由Bernard等人所描述的其他突变蛋白质可以作为IL-15的激动剂或拮抗剂起作用(BernardJ.等人,JBiolChem2004,279:24313-24322)。然而，这些实体未能有助于用于治疗引起IL-15过表达的疾病的商购可得的药品。在2006年，鉴定出了阻断该细胞因子与IL-15Rα相互作用的IL-15的拮抗剂肽(国际专利申请号WO2006/029578)。由该肽所取得的半抑制浓度(IC50)为130μM。在古巴专利申请号2008-0184中所反映的所述拮抗剂的优化研究使得能够鉴定出更有活性(IC5024μM)但比起始肽化合物更难溶解的肽。该低的溶解度使得将其开发为药品变得困难。考虑到IL-15对IL-15Rα的高亲和力，需要鉴定出具有比已经描述的拮抗剂更高的抑制活性的分子实体，其使得能够获得在RA和其他与IL-15的过表达相关的自身免疫疾病和炎性疾病的治疗中更有效的药品。专利技术详述本专利技术对解决上面提及的问题做出了贡献，通过提供其特征在于包含标识为SEQIDNo.5或SEQIDNo.12的氨基酸序列的IL-15活性的拮抗剂肽，或者这些肽的同二聚体。这些肽拮抗剂比在专利申请号WO2006/029578中所描述的更有活性，因为其具有比起始拮抗剂更小的IC50。该优化通过在原始拮抗剂中将一个或两个L构象残基置换为其相应的D构象残基来取得。在本专利技术中鉴定出的其他拮抗剂是在最有活性的单体之间形成同二聚体的结果，所述单体通过存在于它们中的游离半胱氨酸而以化学方式相连接。为了本专利技术，IL-15活性的拮抗剂为阻断该细胞因子与其受体的相互作用(从而抑制该细胞因子的生物学效应)的那种实体。在本专利技术的背景下，具有标识为SEQIDNo.5或SEQIDNo.12的氨基酸序列的肽的同二聚体为其中所述肽的两个相同单体以化学方式相连接的那种肽。由于已知将D氨基酸(D-aa)引入到肽中增加其稳定性，因而令人惊讶的是，在本专利技术中，一些该类型的置换取消了起始肽(在本专利技术中命名为肽1)所具有的作为IL-15活性的拮抗剂的能力。在本专利技术中，产生了10种具有L氨基酸(L-aa)被D-aa改变的肽变体，其在用依赖于IL-15的CTLL-2细胞系的生物学活性测定法中进行了评价。还获得了标识为SEQIDNo.5的肽的同二聚体。另外，设计了两种每个具有两个D-aa的肽(肽13和肽15)，并且通过化学合成获得了相应的二聚体(肽14和肽16)。通常，将小尺寸的肽应用作为IL-15的拮抗剂具有选择性地阻断IL-15与IL-15Rα的结合的优点；其中由于与所述受体亚基的相互作用而抑制该细胞因子的效应。通过ELISA类型的免疫测定法来评价所述肽与IL-15Rα结合的能力，并且在CTLL-2细胞系上的细胞增殖测定法中测定其对于抑制IL-15的生物学活性的效应(Rodríguez-等人,BiotecnAplic2014,31:291-6)。另外，通过用分离自RA患者的滑膜液的细胞的离体测定法来测定这些肽对于抑制两种炎性细胞因子(TNF-α和IL-6)的分泌的效应。在这些实验中证明了，只有四种变体(命名为肽5、肽12、肽1本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.其特征在于包含标识为SEQ ID No.5或SEQ ID No.12的氨基酸序列的白介素-15(IL-15)活性的拮抗剂肽，或者这些肽的同二聚体。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171229 CU 2017-01771.其特征在于包含标识为SEQIDNo.5或SEQIDNo.12的氨基酸序列的白介素-15(IL-15)活性的拮抗剂肽，或者这些肽的同二聚体。
2.根据权利要求1的肽，其通过遗传操作或通过化学合成来获得。
3.根据权利要求1的肽，其中所述同二聚体从通过游离半胱氨酸残基相连接的两个肽单体开始来获得。
4.核酸，其特征在于，其编码包含标识为SEQIDNo.5或SEQIDNo.12的氨基酸序列的肽。
5.药用组合物，其特征在于，其包含：包含标识为SEQIDNo.5或SEQIDNo.12的氨基酸序列的IL-15的拮抗剂肽，或者这些肽的同二聚体，和在药学上可接受的赋形剂。
6.药用组合物，其特征在于，其包含权利要求4的核酸和在药学上可接受的赋形剂。
7.包含标识为SEQIDNo.5或SEQIDNo.12的氨基酸...
【专利技术属性】
技术研发人员：Y·罗德里格斯阿尔瓦雷兹，H·E·伽莱佩雷斯，O·乐耶斯阿克斯塔，A·卡布拉尔斯利可，
申请(专利权)人：遗传工程与生物技术中心，
类型：发明
国别省市：古巴;CU
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。