皮肤发炎或刺激的检测方法和试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种非侵入性的体内方法，用于测定由于接触外用皮肤护理产品，暴露于外部侵害或者两者的结合而引起的哺乳动物皮肤亚临床或临床发炎或刺激。在一个实施方案中，所述方法包括用非侵入性收集装置从皮肤上收集类二十烷酸，并分析采自皮肤的类二十烷酸含量的步骤。发明专利技术还公开了一种用于测定皮肤刺激或发炎的标记物的试剂盒。该试剂盒包括用于收集皮肤表面分泌物的非侵入性收集装置，和用于测定分泌物中的类二十烷酸含量的免疫分析法。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及皮肤发炎或刺激的检测方法和试剂盒。更具体的，本专利技术涉及皮肤发炎或刺激的非侵入性体内检测方法和试剂盒。
技术介绍
皮肤是人体最大的器官，其外观对一个人的自信和生活质量有巨大影响。事实上，对某人的最初印象(这种印象会持续很长时间)往往是由此人的外表(面部特征、头发颜色等)而产生的。消费者用护肤产品来治疗他们的皮肤病(如粉刺、牛皮癣、细纹和皱纹)，改善皮肤健康(如干燥、鳞片状皮肤；油脂性皮肤)或遮盖皮肤上的小瘢疤。对于发展新型活性物质已进行了大量持续的研究，以提高治疗各种皮肤病的速度和效率，这导致生产了过多的新型护肤配方。这些产品往往能达到特定的皮肤护理效果，但需要持续较长时间(8到12周或更长)以达到最佳效果。这些外用皮肤护理产品需要较长时间才能达到它们的最终效果，这就需要建立一种能确定这些产品的刺激性，而不需要由消费者在使用过程中试验的方法。事实上，特别优选的是使用一次后，在还没有产生可见的副作用(即亚临床效果)，比如炎症、刺激、浮肿和红斑时就能确定其刺激性的灵敏测试方法。此外，受到诸如擦伤、磨伤、刮伤、日晒、风侵、烟熏和其他环境伤害的外部侵害，或者施加和除去粘性物质，如在皮肤上缠上或解下绷带，也能伤害皮肤并导致发炎或刺激，其程度易受检测方式的影响。本专利技术提供对这种亚临床或临床效果进行检测和量化的新方法和装置。由于护肤品或外部侵害而导致的皮肤发炎反应主要由皮肤中的角质化细胞，通过两个不同途径进行调节细胞因子途径和花生四烯酸途径。在这些途径中，表达、分泌或释放的各种介质被认为是原发或次级发炎介质。白介素-1α(IL-1α)被认为是细胞因子途径中主要的前发炎介质，而前列腺素E2(PGE2)被认为是花生四烯酸途径主要的前发炎介质。对于刺激或发炎的检测模式，存在两种主要的方法，即体外检测或体内检测。标题为“评价急性皮肤过敏潜在性的策略”的综述文章(Robinson等，J.Pharmacol.Toxicol.，1999)提供了对现有皮肤侵蚀和刺激的体外检测方法的一个很好综述，此处全文引作参考。US-A-6020148公开了代表性的皮肤侵蚀和刺激检测方法，其说明书此处全文引作参考，该申请公开了利用一种体外方法，来检测外用皮肤护理产品对眼睛或皮肤的刺激。眼睛或皮肤刺激是通过测量涂抹护肤品后模型细胞培养体系的存活力来进行量化。利用该技术可以测量不同的目标标记物，这可以随时进行监测。EP-A-049739中公开了另一种方法，其说明书此处全文引作参考，该申请公开了利用一种包括人体皮肤的角质化细胞和成纤维细胞的共同培养物的体外模型，通过细胞毒性和预发炎终点来评价表面活性剂的刺激性。尽管这些方法能够提供有关潜在刺激性或其他临床安全问题的直接信息，但这些体外模型不能准确代表人体皮肤表现出的发炎和刺激。此外，体内方法也已用于评价护肤产品的临床安全性。体内方法的例子包括4小时肤斑实验方法(见Robinson等的综述，或Robinson等在ContactDermatitis，1998中的“用于比较和研究性评价皮肤刺激的4小时人体肤斑实验方法的应用”)，评价小面积涂抹该产品后形成的红斑；在24小时肤斑接触后，利用排气液体(suction blister fluid)来检测IL-1α和类二十烷酸(Muller-Decker等，Toxicology and Applied Pharmacology，1998.“用表面活性剂贴片测试人皮肤产生的原发性刺激性皮炎中花生四烯酸代谢”)，用胶带剥离和辣椒素检测急性皮肤刺激中的类二十烷酸和细胞因子含量(Reilly和Green，Acta.Derm.Venereol.，1999，“胶带剥离和辣椒素引起的急性皮肤刺激中类二十烷酸和细胞因子的水平)。Rheins等教导的另一种方法，即WO 00/10579“检测表皮中生物因子的方法”教导使用者刮擦皮肤或用胶带粘下皮肤，然后分析特定的多核苷酸/细胞因子。尽管这些方法采用了人体模型，但在其过程中都涉及到超常的使用条件或较高的侵入程度，从而限制了它们作为临床评估手段的用途。这在评价亚临床刺激时特别有影响。最近几年中，Robinson等公开了一种非侵入性方法，其采用涂有粘合剂的微孔塑料膜的Sebutape(Cuderm Corporation，Dallas，Texas)来吸收发炎前的细胞因子作为炎症的标记物。1997年，证明该方法能用于检测不同人体部位，以及不同年龄的个体的刺激(Perkins等，毒理学会年会，1997，“评价人体皮肤刺激的非侵入性方法的发展”)。随后的开发表明，这些发炎标记物可能与皮肤病相关。该方法的应用实例包括白介素-1受体拮抗剂(IL-lra)与尿疹(diaper rash)严重程度相关(Perkins等，毒理学会年会，1998，“评价人体皮肤刺激的非侵入性方法的进一步发展”)，IL-1α与涂抹月桂基硫酸钠(SLS)导致的亚临床刺激(没有可见的红斑)相关(Perkins等，研究皮肤病学会年会，1999，“评价化学处理之人体皮肤的炎症变化的非侵入性方法”)，以及用于评估发炎的头皮病症的严重性(Cardin等，毒理学会年会，2001，“回收正常和受损头皮状况的分子标记的非侵入性方法的建立”)。利用白介素或其他蛋白质作为发炎的标记物时，可能引起的潜在问题之一是它们与被检测护肤品潜在的相互作用。例如，这些蛋白质与某些护肤产品中的阴离子表面活性剂的相互作用被认为可能导致蛋白质变性，这可能影响蛋白质在分析中的表观含量。因此，优选的是开发一种在各种护肤产品或其他受测化合物存在的情况下保持稳定，并能克服上述与使用诸如白介素等蛋白质作为发炎/刺激标记物相关的困难的脂基标记物。此外，该方法应不仅能检测外用皮肤护理产品对皮肤的影响，还能检测皮肤暴露在以上提及的外部侵害下受到的影响。专利技术概述一个实施方案中，本专利技术涉及这样一种方法，即通过收集和测定皮肤表面存在的类二十烷酸，优选前列腺素，更优选前列腺素E2(PGE2)来检测哺乳动物(动物或人)皮肤的亚临床或临床发炎或刺激的标记物。本专利技术的方法包括以下步骤(a)用非侵入性收集方法收集皮肤表面的分泌物，所述非侵入性收集方法利用非侵入性收集装置；和(b)分析由所述装置从皮肤表面收集的分泌物中的至少一种类二十烷酸的含量。类二十烷酸的检测提供了区分非常温和的护肤产品或者暴露于外部侵害之间所必需的灵敏度，却消除了现有技术的方法引起蛋白质变性的担心。本专利技术的另一个实施方案涉及检测由于哺乳动物皮肤暴露于外用皮肤护理产品、外部侵害或者二者的结合所产生的亚临床或临床的皮肤发炎或刺激的方法。本专利技术所述方法的这个实施方案包括以下步骤(a)用包括非侵入性收集装置的非侵入性收集方法收集所述皮肤表面的分泌物；(b)检测从所述皮肤表面收集的分泌物中类二十烷酸的基础水平；(c)将所述皮肤暴露在至少一种外用皮肤护理产品、至少一种外部侵害或二者的结合之下；(d)在步骤(c)后用包括非侵入性收集装置的非侵入性收集方法收集所述皮肤表面的分泌物；(e)在步骤(c)后检测从所述皮肤表面收集的分泌物中类二十烷酸的含量；和(f)比较步骤(e)中确定的类二十烷酸含量与步骤(b)中确定的类二十烷酸含量。优选，所述类二十烷酸是前列腺素，更优选的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定哺乳动物皮肤临床或亚临床发炎或刺激的标记物的方法，其特征在于，该方法包括步骤：（ａ）采用非侵入性收集程序从皮肤表面收集分泌物，所述非侵入性收集程序中利用了非侵入性收集装置；和（ｂ）分析由所述装置收集到的皮肤表面分泌物中的至少 一种类二十烷酸的含量。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：K黄，N蒂尔尼，B威甘德，
申请(专利权)人：强生消费者公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]