采用生物化学标记物诊断纤维化疾病的方法技术

本发明专利技术涉及通过采用可容易地检测的生物学标记物的血清浓度来检测患者，特别是肝纤维化，特别是感染丙型肝炎病毒的患者，炎症、纤维化或癌性疾病程度的一种新诊断方法。本发明专利技术也涉及实现本方法的诊断试剂盒。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及通过采用可容易地检测的生物学标记物的血清浓度来检测患者，特别是肝纤维化，特别是感染丙型肝炎病毒的患者，炎症、纤维化或癌性疾病程度的一种新诊断方法。本专利技术还涉及实现本方法的诊断试剂盒。为了改善患者的治疗和随访疾病，能够在肝脏病理进展过程中检测这些早期阶段仍然是重要的。由于肝活检仍然是侵入性的方法，具有一种快速和易于进行的、可对患者的纤维化水平给出较好预测值的检测是有利的。在感染丙型肝炎病毒后，疾病的进展可导致纤维化，以后成为肝硬化。肝活检可以确定纤维化的阶段，以及肝脏坏死性炎性病变的存在。这些病灶的密度和活动度，补充了纤维化的程度，被医生们确认为是疾病诊断和进展预后的重要因素，并为了确定要给与的治疗类型。因此，需要开发一种诊断方法，可以对患者中纤维化和/或病变的存在(或不存在)给予很好的预测值，它应是可靠的，足以减少肝活检的需要。图2根据纤维化分期，六个标记物纤维化计分值(从0.00至1.00)的散点图。图3包含了5个(α2-巨球蛋白、触珠蛋白、总胆红素、Apo A1和GGT)、六个(α2-巨球蛋白、α2-微球蛋白、总胆红素、γ球蛋白、apo A1和GGT)或十个生物化学因子(上述加上白蛋白、α1-微球蛋白、β球蛋白和ALT)和年龄和性别的纤维化标记物函数的ROC曲线。曲线下面积没有显著差异分别为0.837±0.02、0.847±0.02和0.851±0.02。图4根据纤维化分期的纤维化计分值图4a6个标记物函数F0 n＝56中位数＝0.10；F1 n＝145中位数＝0.22；F2 n＝68中位数＝0.41；F3 n＝28中位数＝0.66；F4 n＝42中位数＝0.89。图4b5个标记物函数F0 n＝55中位数＝0.14；F1 n＝139中位数＝0.21；F2 n＝64中位数＝0.43；F3 n＝26中位数＝0.73；F4 n＝41中位数＝0.85。框的顶端和底端是第25和第75百分点。因此，框的长度是四分位数之间的范围。也就是，该框代表中间50％的数据。一条直线在中间点(第50百分点)的位置划过框的中央。上面毗邻的数值是最大观察值，即小于或等于第75百分点加上1.5倍四分位数间的范围。下面毗邻的数值是最小观察值，即大于或等于第25百分点减去1.5倍四分位数间的范围。方差分析显示在所有分期间具有显著差异。(Bonferroni全部配对多重比较检验；p＜0.001)。图5根据纤维化分期的α2球蛋白、α2巨球蛋白和触珠蛋白。图5a对于α2球蛋白值，仅在4期对比1和3期之间有显著差异。(Bonferroni全部配对多重比较检验；p＝0.01)。图5b对于α2巨球蛋白，0和1期值显著低于2、3和4期。(Bonferroni全部配对多重比较检验；p＜0.001)。2期值低于3和4期值。(Bonferroni全部配对多重比较检验；p＜0.001)。在0和1期之间和3和4期之间没有显著差异。图5c对于触珠蛋白，1期数值显著高于2、3和4期。(Bonferroni全部配对多重比较检验；p＜0.001)。4期数值低于0、1和2期的数值。(Bonferroni全部配对多重比较检验；p＜0.001)。在0和1期之间和3和4期之间没有显著差异。优选实施例的描述本专利技术因此涉及一种诊断患者炎症性、纤维化或癌性疾病的方法，包括以下步骤a)测定所述患者血清中生物化学标记物的数值，b)通过包含所述标记物的逻辑(logistic)函数结合所述的数值，c)分析所述逻辑函数的最终数值以确定所述患者中存在肝纤维化和/或肝坏死性炎性病变。生物化学标记物也可在患者的血浆中测定，当不使用任选的第一个步骤(收集患者的血清或血浆)时，该方法可认为是体外的方法。特别的是，本专利技术的方法完全适合诊断所述患者中存在肝纤维化和/或肝坏死性炎性病变。也可用来在患者的肺或肾脏中诊断炎症性和/或纤维化疾病。也适合在例如肺、乳腺、膀胱、结肠中进行癌性病变的诊断。逻辑函数可通过下面的方法获得i)根据患者的疾病程度将其分成不同组；ii)通过线性分析确定在这些组间显著不同的因子；iii)逻辑回归分析标记物的独立判别值以诊断纤维化和/或肝坏死性炎性病变； iv)合并这些已确定的独立因子，构建逻辑函数(一种指数的构建)。从定义上，根据判别得到的最佳指数(“纤维化计分值”)是合并独立因子的逻辑回归函数。逻辑函数是通过结合每个参数的相对权重和负号而获得的，前者如在逻辑回归中单独确定的那样，后者是当标记物与纤维化分期呈负相关时。对于数值范围非常大的标记物使用对数。逻辑函数的品质在ROC曲线的辅助下进行分析，后者是根据诊断需要的阈值来获得的。获得ROC曲线的方法在实施例中进行描述。在本专利技术中，患者的分类是纤维化的出现，起始于很少纤维间隔，但如果准备仅以大量纤维间隔或肝硬化来诊断患者，也是可以改变的。如在实施例中所描述的那样，这样产生了另一个ROC曲线。在患者中诊断肝纤维化和/或肝坏死性炎性病变的存在可进一步通过人群中肝纤维化预期发病率的数据进行精确化。优选地，在根据本专利技术方法的步骤a)中定量的生物化学标记物是“简单的”生物化学标记物，意味着它们容易地用本领域中已知的方法被定量(色谱、电泳、ELISA测定…)。因此，优选地适合本专利技术方法的标记物包括α2-巨球蛋白、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、γ谷氨酰转肽酶(GGT)、γ-球蛋白、总胆红素、白蛋白、α1-球蛋白，α2-球蛋白、触珠蛋白、β-球蛋白、载脂蛋白A1(apoA1)、IL10、TGF-β1、apoA2、apoB。根据所研究的疾病，还可以使用其他细胞因子，或本领域专业技术人员已知的特殊标记物。对于肾脏或膀胱疾病的分析，可在患者的尿液标本上很容易地进行一些测定。在本专利技术方法中的一个特殊实施例中，可研究至少4个，更优选地5或6个、7或10个生物化学标记物，并在本方法的步骤a)中进行测定。优选地，当打算诊断肝纤维化时，这些标记物是α2-巨球蛋白、GGT、γ-球蛋白、总胆红素、(α2-球蛋白或触珠蛋白)和apoA1。触珠蛋白可用来代替α2-球蛋白，因为α2-球蛋白是α2-巨球蛋白和α2-微球蛋白的总和，后者主要由触珠蛋白组成。因而α2-微球蛋白和触珠蛋白的相对权重可能在逻辑函数中被调整。当要诊断肝坏死性炎性病变的存在时，当测定的标记物包括α2-巨球蛋白、GGT、γ-球蛋白、(ALT或AST)和apoA1时是最佳的。由于本申请中所报告的数据显示这些标记物是相关的，AST或ALT的应用不太重要。因此，考虑到相关因子，用另一个标记物代替一个标记物仅引起逻辑函数中系数的平衡。逻辑函数也可使用其他的标记物如患者的年龄和性别。在逻辑函数中对不同标记物获得的数值使用的不同系数可通过统计学分析来计算，如在实施例中所描述的。特别的是，可用来实现本专利技术方法的合适的逻辑函数如下采用6个标记物f1＝a1×Log-a2×+a3×Log+a4×+a5×+a6×Log-a7×+a8×-a9，其中a1包含在6.5和6.9之间，a2包含在0.450和0.485之间，a3包含在1.100和1.300之间，a4包含在0.0700和0.0750之间，a5包含在0.0265和0.0300之间，a6包含在1.400和1.700之间，本文档来自技高网...

【技术保护点】
在患者中诊断炎症、纤维性或癌性疾病的方法，包括下列步骤：ａ）测定所述患者血清或血浆中生物化学标记物的数值，ｂ）通过包含所述标记物的逻辑函数合并所述的数值和，ｃ）分析所述逻辑函数的最终值以确定所述患者中肝纤维化和／或肝坏死性炎性病 变的存在。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：T波伊纳德，
申请(专利权)人：法国公立援助医院，
类型：发明
国别省市：FR[法国]