一种地毯草黄单胞菌噬菌体及其组合物、试剂盒和应用制造技术

本发明专利技术属于地毯草黄单胞菌的技术领域，具体涉及一种地毯草黄单胞菌噬菌体的应用。噬菌体为地毯草黄单胞菌噬菌体YHC5（

【技术实现步骤摘要】
一种地毯草黄单胞菌噬菌体及其组合物、试剂盒和应用
本专利技术属于地毯草黄单胞菌的研发
，具体涉及一株耐酸耐碱、稳定性高的地毯草黄单胞菌噬菌体及其应用。
技术介绍
地毯草黄单胞菌，黄单胞菌属，革兰氏阴性细菌，菌体短杆状，两端钝圆，大小0.5～0.7×1.5～2.0μm，单个排列，鞭毛单根极生，不产生芽孢，有荚膜，氧化酶阴性，接触酶阳性。地毯草黄单胞菌在YDC培养基上呈表面光滑的黄色圆形菌落，边缘整齐，粘稠，并稍隆起。该细菌生长适宜温度为20～30℃，最低5～10℃，最高35℃，致死温度为55℃10分钟，最适pH值为6.6。地毯草黄单胞菌是导致柑橘溃疡病的致病菌。柑橘溃疡病在我国柑橘产区均有发生，在湖南、浙江、福建、云南、江西、广西、广东、贵州等南方柑橘种植省份(区)发生较为普遍、在四川、重庆、湖北等省份(区)有局部零星分布。柑橘感染溃疡病之后，在叶、枝、果实上形成过山口状的病斑，后期可造成落叶、落果，严重影响柑橘果实的产量和品质。(林文力,肖伏莲.柑橘溃疡病菌检测方法及防治技术研究进展[J].现代农业科技,2012(22):112-114.)。噬菌体是专门裂解细菌的一类病毒，主要化学成分由蛋白质和核酸组成，广泛存在于土壤、空气、水及生物体中，具有较强的专一性，其通过与细菌细胞表面特异位点结合后杀灭特异性细菌的病毒。自从FrederikTword于1915年首次发现噬菌体以来，越来越多的研究证明了噬菌体具有较高的抗菌活性和专一性，可防治耐药性细菌并防止损伤微生物群落。与抗生素治疗相比，其副作用极低且更加快速有效，不会抑制机体的自然免疫或引起变态反应，同时对人类、其他哺乳动物以及植物不具有侵染性及毒性。然而目前对噬菌体的研究仅集中于筛选及生物特性的探讨，对其应用方面鲜有报道。因此，筛选并应用合适的烈性噬菌体，是研发新型抗菌制剂的一条有效途径。目前，关于地毯草黄单胞菌噬菌体的研究几乎还是空白，噬菌体疗法用于控制由地毯草黄单胞菌引起的柑橘溃疡病也一直没有相关研究和报道。因此，对于开发地毯草黄单胞菌噬菌体，用于相关病原菌的防治，具有积极的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的一在于提供一株地毯草黄单胞菌噬菌体，其在酸碱环境下具备良好的稳定性，是潜在的、优良的柑橘溃疡病防治生物类制剂。本专利技术的上述专利技术目的一是通过以下技术方案得以实现的：采用的一株地毯草黄单胞菌噬菌体，所述地毯草黄单胞菌噬菌体为地毯草黄单胞菌噬菌体YHC5(XanthomonasaxonopodisphageYHC5)，保藏编号为CCTCCNO:M2018579。进一步的，所述地毯草黄单胞菌噬菌体YHC5(XanthomonasaxonopodisphageYHC5)具有SEQIDNo.1所示的核苷酸序列。进一步的，所述地毯草黄单胞菌噬菌体YHC5(XanthomonasaxonopodisphageYHC5)为烈性噬菌体，有一呈多面体对称的头部和可伸缩的尾部,属于有尾噬菌体目短尾噬菌体科噬菌体，基因组大小为43457bp。进一步的，所述地毯草黄单胞菌噬菌体YHC5(XanthomonasaxonopodisphageYHC5)在4～40℃条件下，在7天内效价降低不超过一个数量级；在pH3～pH11环境下，在7天内效价降低不超过一个数量级。进一步的，所述地毯草黄单胞菌噬菌体YHC5(XanthomonasaxonopodisphageYHC5)在发酵参数为MOI＝0.001条件下，发酵12h，其效价达到5.0×109PFU/mL以上。本专利技术的目的二在于提供一种含有上述地毯草黄单胞菌噬菌体的组合物，组合物中至少含有一株地毯草黄单胞菌噬菌体YHC5(XanthomonasaxonopodisphageYHC5)。进一步的，组合物包括组合物包括化学性杀菌剂。作为本专利技术实施方案之一，将所述的地毯草黄单胞菌噬菌体YHC5(XanthomonasaxonopodisphageYHC5)和化学性杀菌剂(例如代森铵700倍液)作为组合物联合使用。作为示例性的说明，地毯草黄单胞菌噬菌体YHC5与代森铵700倍液之间的比例关系可以由本领域技术人员结合本专利技术以及实际的应用领域以及本领域常识进行确定。本专利技术的目的三在于提供一种含有上述地毯草黄单胞菌噬菌体组合物的试剂盒，本专利技术的上述专利技术目的三是通过以下技术方案得以实现的：试剂盒中带有所述地毯草黄单胞菌噬菌体YHC5(XanthomonasaxonopodisphageYHC5)或地毯草黄单胞菌噬菌体YHC5(XanthomonasaxonopodisphageYHC5)的组合物。本专利技术的目的四在于提供一株地毯草黄单胞菌噬菌体的应用：上述的地毯草黄单胞菌噬菌体YHC5(XanthomonasaxonopodisphageYHC5)可用于但不限于杀死地毯草黄单胞菌，当其工作浓度≥106PFU/mL时，其杀菌效果较强，可作为生物类消毒剂或生物类农药的有效成分，治疗但不限于由地毯草黄单胞菌引起的各类细菌性疾病。本专利技术的目的五在于提供一种地毯草黄单胞菌噬菌体组合物的应用，上述的地毯草黄单胞菌噬菌体YHC5的组合物，用作为生物类消毒剂或生物类农药的有效成分，防治但不限于由地毯草黄单胞菌引起的各类细菌性疾病。通过采用本专利技术技术方案，地毯草黄单胞菌噬菌体YHC5(XanthomonasaxonopodisphageYHC5)及其组合物可以用于治疗和预防因地毯草黄单胞菌引起的细菌感染。本专利技术所述地毯草黄单胞菌噬菌体YHC5(XanthomonasaxonopodisphageYHC5)在噬菌体效价、最佳感染复数(MOI)、pH稳定性、温度对噬菌体存活稳定性的影响等方面具有如下的生理特性和有益效果：(1)地毯草黄单胞菌噬菌体YHC5(XanthomonasaxonopodisphageYHC5)是从自然界中分离的烈性噬菌体，供试噬菌体不含毒力基因或不良基因，其DNA无法编码可能引起潜在健康风险的蛋白，不存在携带溶源基因的可能；本专利技术未对供试噬菌体进行任何遗传修饰。(2)地毯草黄单胞菌噬菌体YHC5具有较高的发酵效价，其在发酵时，感染宿主地毯草黄单胞菌的最佳MOI为0.001；是具有高度亲和性及裂解能力的烈性噬菌体，可在发酵12h内达到109PFU/mL以上的效价。地毯草黄单胞菌噬菌体YHC5可以特异性地部分或完全灭活地毯草黄单胞菌，仅需少量初始噬菌体即可完成大量增殖，为工业化生产噬菌体杀菌剂提供优质噬菌体株来源；本领域技术人员可以根据本专利技术的记载及本领域常识将本专利技术所述地毯草黄单胞菌噬菌体YHC5或其组合物制备成应用于检测、消毒及植物防护等方面的各种产品并加以工业应用。(3)本专利技术地毯草黄单胞菌噬菌体YHC5为严格的烈性噬菌体且对宿主菌具有高度专一性和裂解性并且具有较广的宿主范围，对128株地毯草黄单胞菌的裂解率高达96.9％。地毯草黄单胞菌噬菌体YHC5可作为应用于环境消毒的各种产品的有效成分，例如包括但不限于以液体浸泡、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种地毯草黄单胞菌噬菌体，其特征在于，所述地毯草黄单胞菌噬菌体为地毯草黄单胞菌噬菌体YHC5（

【技术特征摘要】
1.一种地毯草黄单胞菌噬菌体，其特征在于，所述地毯草黄单胞菌噬菌体为地毯草黄单胞菌噬菌体YHC5（XanthomonasaxonopodisphageYHC5），保藏编号为CCTCCNO:M2018579。


2.根据权利要求1所述地毯草黄单胞菌噬菌体，其特征在于，所述地毯草黄单胞菌噬菌体YHC5（XanthomonasaxonopodisphageYHC5）具有SEQIDNo.1所示的核苷酸序列。


3.根据权利要求1所述地毯草黄单胞菌噬菌体，其特征在于，所述地毯草黄单胞菌噬菌体YHC5（XanthomonasaxonopodisphageYHC5）为烈性噬菌体，有一呈多面体对称的头部和可伸缩的尾部,属于有尾噬菌体目短尾噬菌体科噬菌体，基因组大小为43457bp。


4.根据权利要求1所述地毯草黄单胞菌噬菌体，其特征在于，所述地毯草黄单胞菌噬菌体YHC5（XanthomonasaxonopodisphageYHC5）在4～40℃条件下，在7天内效价降低不超过一个数量级；在pH3～pH11环境下，在7天内效价降低不超过一个数量级。


5.根据权利要求1所述地毯草黄单胞菌噬菌体，其特征在于，所述地毯草黄单胞菌噬菌体YHC5（XanthomonasaxonopodisphageYHC5）在发酵参数为MOI=0.001条件下，发酵12h，其效价达到5.0×1...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖逍，丁良，丛郁，徐旭凌，徐天舜，乔欢，何四龙，
申请(专利权)人：菲吉乐科南京生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32