一种抗皮肤衰老的鹿茸干细胞条件培养液的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种抗皮肤衰老的鹿茸干细胞条件培养液的制备方法，属于组织工程技术领域。本发明专利技术解决了现有鹿茸干细胞具有储存和运输不便，且存在免疫排斥反应和促进肿瘤细胞转移和刺激上皮‑间质细胞转化的问题。本发明专利技术包括鹿茸干细胞的原代分离培养、传代培养、条件培养液的收集、保存、处理、冻干等步骤。本发明专利技术的方法获得的鹿茸干细胞条件培养液中含有大量的细胞因子、生长因子、miRNA、mRNAs等多种成分，这些因子可短期或长期参与细胞交流、细胞信号转导、细胞或组织代谢改变等生理过程，能够清除DPPH自由基，清除率可达74.63％‑82.45％，且对于人角质形成细胞和真皮成纤维细胞增殖具有促进作用。

【技术实现步骤摘要】
一种抗皮肤衰老的鹿茸干细胞条件培养液的制备方法
本专利技术涉及一种抗皮肤衰老的鹿茸干细胞条件培养液的制备方法，属于组织工程

技术介绍
鹿茸是目前所知的唯一能够完全再生的哺乳动物器官，且其生长速度可达2cm/d。鹿茸完全再生和快速生长能力主要由于鹿茸干细胞的存在。经鉴定，鹿茸干细胞为介于胚胎干细胞和间充质干细胞之间的一种特殊的干细胞类型。与目前所常用的骨髓间充质干细胞、脐带间充质干细胞等干细胞相比，鹿茸干细胞更易于获取，增殖速度快，分泌大量的细胞因子和生物活性因子。近年来，利用干细胞移植补充人体干细胞来抗衰老被认为是一项新的有效的措施。骨髓间充质干细胞、脂肪干细胞、脐带间充质干细胞等多种干细胞已被证明可以改善机体衰老。然而，直接使用干细胞具有储存和运输不便以及免疫排斥方面的缺点。另外，干细胞容易分化成其它基质细胞，可能会促进肿瘤细胞转移和刺激上皮-间质细胞转化，存在安全隐患。因此，提供一种能够将鹿茸干细胞应用于抗皮肤衰老的方法是十分必要的。
技术实现思路
本专利技术为了解决现有鹿茸干细胞具有储存和运输不便，且本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗皮肤衰老的鹿茸干细胞条件培养液的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：/n步骤一，鹿茸干细胞的分离培养；/n鹿茸干细胞来源于鹿生茸区骨膜组织、鹿角柄骨膜组织和鹿茸间充质组织，采集鹿生茸区骨膜组织、鹿角柄骨膜组织和鹿茸间充质组织后置于运输液中；/n步骤二，鹿茸干细胞的原代培养；/n(1)将步骤一采集的鹿生茸区骨膜组织、鹿角柄骨膜组织和鹿茸间充质组织从运输液中取出，使用PBS溶液反复清洗直至完全取出血污，然后在一次性无菌平皿中，使用小刀将鹿生茸区骨膜组织、鹿角柄骨膜组织和鹿茸间充质组织成切割为0.7mm

【技术特征摘要】
1.一种抗皮肤衰老的鹿茸干细胞条件培养液的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
步骤一，鹿茸干细胞的分离培养；
鹿茸干细胞来源于鹿生茸区骨膜组织、鹿角柄骨膜组织和鹿茸间充质组织，采集鹿生茸区骨膜组织、鹿角柄骨膜组织和鹿茸间充质组织后置于运输液中；
步骤二，鹿茸干细胞的原代培养；
(1)将步骤一采集的鹿生茸区骨膜组织、鹿角柄骨膜组织和鹿茸间充质组织从运输液中取出，使用PBS溶液反复清洗直至完全取出血污，然后在一次性无菌平皿中，使用小刀将鹿生茸区骨膜组织、鹿角柄骨膜组织和鹿茸间充质组织成切割为0.7mm3的碎块；
(2)取2-4g碎块，使用洗涤液洗涤碎块，然后转入50mL离心管中，在100rpm的条件下离心5min，弃上清液，收集沉淀；
(3)向(2)获得的沉淀2-4g中加入20mL消化液，在37℃条件下震荡进行消化，每间隔10min在显微镜下观察消化情况，在碎块边缘出现毛刷样毛边时，停止消化，在1000rpm的条件下离心5min，弃上清液，使用DMEA完全培养液洗涤，然后在1000rpm的条件下离心5min，弃上清液，收集沉淀；
(4)取(3)获得的沉淀0.5-1g，均匀涂在细胞培养瓶底部，倒置培养瓶并加入1-2mL的原代培养液，置于37℃，5％CO2的细胞培养箱中培养2-4h，然后加入2mL的原代培养液，正置培养瓶继续静置培养，2-3天后，开始在显微镜下观察组织块的贴壁及细胞发散情况，5-7后细胞达到70％汇合，将细胞进行胰蛋白酶消化，冻存，获得原代鹿茸干细胞；
步骤三，鹿茸干细胞的传代培养；
将步骤二获得的原代鹿茸干细胞在传代培养基上进行传代培养，传至3-5代，鹿茸干细胞生长至70-80％汇合，转至无血清培养基培养48h，收集细胞培养上清液，在1000rpm条件下离心，收集上清液，获得鹿茸干细胞条件培养液，将培养液进行真空冷冻干燥，得到鹿茸干细胞条件培养液的活性物...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙红梅，巴恒星，赵海平，王大涛，刘振，
申请(专利权)人：中国农业科学院特产研究所，
类型：发明
国别省市：吉林;22