分析药物效果的方法技术

本发明专利技术提供一种分析药物效果的方法，更具体地讲提供一种分析药物对人免疫系统效果的离体方法。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

技术介绍
草药例如人参被认为是补品，研究显示人参能够提高人的免疫功能。人参包括红参、Panax人参(又称美国人参)的提取物被报告在动物模型和人中具有抗肿瘤的效果。此外，临床试验显示人参提取物对老年人呼吸道感染有预防效果。关于人参是如何增强免疫系统来对抗呼吸道感染的机制，目前还不知道。通过更深入地理解草药等的作用机制，以及了解如何筛选具有保健价值的草药，可以更迅速地缓解诸如流行性感冒等细菌和病毒感染。流感感染是严重的公共健康问题。对已知免疫功能减弱的高龄人群，流感是灾难性的。可以增强免疫功能预防流感感染并且帮助患者从流感中恢复的草药，能够给人们提供许多帮助。对病毒感染的免疫应答可以被分为两个阶段初期的固有免疫应答和随后的适应性免疫应答。作用于抗病毒感染前沿的固有免疫反应包括巨噬细胞(在人类又叫单核细胞)和自然杀伤(NK)细胞的活化，分泌细胞因子和趋化因子。这些细胞分泌的细胞因子/趋化因子可以具有直接的抗病毒功能，并且起到激活适应性免疫应答的作用。适应性免疫应答是抗原特异性的，因此也更复杂，可以进一步分为体液(抗体)和细胞介导的免疫应答。细胞所介导免疫应答的主要参与者包括1型CD4阳性T辅助细胞(Th1)和CD8阳性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。在某种程度上Th1促进CTL的增值，CTL可以通过识别病毒抗原直接杀死病毒感染的细胞。专利技术简述本专利技术提供一种，更具体地，提供一种分析药物对人免疫系统效果的离体方法。药物如何影响细胞和/或刺激免疫系统在很大程度上还不为人所知。为了分析药物的潜在益处，在此提供了一种。该方法通过使药物与细胞接触、并识别细胞对药物的反应来完成的。可以通过将药物与细胞共孵育或者通过其他本领域已知方法实现接触。可以通过表型标志和/或化学标志的探测物来识别细胞反应。表型标志可以用来确定受药物影响的细胞类型，而化学标志可以用来识别细胞产生的分子。改变表型标志和化学标志，可以识别各种细胞和/或分子。一方面，在此提供了一种检测药物对免疫应答的效果的方法。该方法通过使药物接触免疫应答细胞形成药物-细胞混合物，并且向药物-细胞混合物提供至少一种探测物检测细胞活化来实现。在这里，“免疫应答细胞”指被细胞结合的或不结合的抗原直接或间接活化的任何种类细胞。探测物可以包括细胞表面抗原抗体、分泌型抗原抗体和/或细胞内抗原的抗体。细胞表面抗原的实例包括免疫应答细胞的表面蛋白或细胞膜蛋白，或者本领域已知用于识别细胞种类的任何其它种类细胞表面抗原。细胞内抗原和/或分泌型抗原/分子的实例包括多肽，例如趋化因子和/或细胞因子。在此还提供一种通过使药物与免疫应答细胞接触形成药物-细胞混合物，并且检测药物-细胞混合物中至少两种表型标志的存在来检测细胞对药物反应的方法。每个表型标志被用来识别特定种类的活化免疫应答细胞。免疫应答细胞种类的实例包括T细胞、B细胞、自然杀伤细胞和单核细胞。此外，至少一种化学标志的探测物可以与药物-细胞混合物接触。每个化学标志探测物通常识别由免疫应答细胞产生的一种特定的蛋白质或一类蛋白质。免疫应答细胞产生的蛋白质的实例包括细胞因子和趋化因子，其它细胞蛋白质也可以被识别。这些蛋白质可以是单一种类细胞产生的，也可以是一种以上细胞产生的。可以以各种时间间隔筛查药物-细胞混合物，通过分析表型标志和/或化学标志来检测药物的效果。此外，筛查药物-细胞混合物以检测活化免疫应答细胞是否存在之前，可以向混合物中加入细菌或病毒。根据所需参数和所用标志，可以在为特定实验所选的时间间隔进行筛查，包括按分钟、小时和/或天进行筛查。其它种标志的探测物也可以被加入药物-细胞混合物中，包括活化标志的探测物。活化标志在细胞被活化时产生，在不同物质存在下通常抑制或加强特定肽的转录。活化标志的说明性实例包括CD69(对应于T细胞和单核细胞)和MHC II类(也称HLA-DR，对应于B细胞)。活化标志也可以帮助检测药物对各种类型细胞的效果。在此还提供了一种在植物材料存在下，通过温育外周血单个核细胞、使温育的外周血单个核细胞接触一组探测物形成互补的探测物-细胞复合体来检测细胞反应的方法。每种探测物都能够与一种免疫应答细胞的特定表型标志形成复合体。然后检测并分析探测物-细胞复合体。也可以使用化学和/或活化标志的探测物，并且也可以检测这些探测物-标志复合体。附图简述附图说明图1Panax人参提取物对CD14+单核细胞的剂量依赖性活化。图2A流感病毒存在下，Panax人参提取物对NK细胞的特异性活化。图2B人参提取物对NK细胞的剂量依赖性活化。图3不同Panax人参提取物使NK细胞活化分泌IFN-g的效果比较。图4Panax人参提取物对Th1CD4阳性T细胞和CD8阳性CTL增殖的效果。图5Panax人参提取物(CVT 2001 009)对灭活流感病毒刺激的CLT培养物中NK细胞生长的效果。专利技术详述开发了一种。药物可以包括天然来源和合成制备的药物。天然来源药物的实例包括植物材料，例如草药。对植物材料没有限制，可以包括叶、根、茎皮、树液、桨果和/或它们的提取物或组合。此外，植物材料可以被研磨、干燥、分馏、渗出，或整体保留。在一个实施方案中，药物与外周血单个核细胞(PBMC)接触。外周血单个核细胞是包括免疫应答细胞例如Th1、CTL、NK、B细胞和单核细胞(也称为巨噬细胞)在内的多种细胞混合物。每种这些免疫应答细胞具有至少一种表型标志，例如能够被检测的表面抗原。例如，CD4、CD8、CD56、CD19和CD14分别是Th1、CTL、NK、B细胞和单核细胞的表型标志。Th1和CTL细胞还具有抗原CD3。NK细胞还具有抗原CD16。每个表面抗原(表型标志)可以被探测物识别。探测物通常是这些表面抗原的抗体，但也可以是任何其它能够用来识别表面抗原的探测物。探测物可以用放射性、荧光、颜色标签以及其它本领域已知的标记进行标记。当免疫应答细胞被活化时，通常产生不同的化学标志，例如肽和/或其它因子。许多这些化学标志被称为细胞因子和趋化因子。细胞因子包括白细胞介素，例如IL-2、IL-4、IL-6、IL-10和IL-12。其它细胞因子包括干扰素-γ(ifn-γ)和肿瘤坏死因子-α(tnf-α)，以及其它由免疫应答细胞产生的细胞因子。适宜检测的趋化因子(趋化吸引不同白细胞的低分子量多肽)的实例包括巨噬细胞趋化和活化因子(MCAF)、巨噬细胞炎性蛋白-1a(MIF-1a)、巨噬细胞炎性蛋白-1b(MIF-1b)、RANTES和白细胞介素8(IL-8)。这些化学标志也可以用探测物来识别。这些探测物通常是针对每一个这些肽和/或因子的抗体，也可以是任何识别由免疫应答细胞产生的特异性分泌型或细胞内肽或因子的探测物。为了检测细胞反应，在药物例如草药存在下温育PBMC。然后使温育的PBMC与一组探测物接触，检测至少针对两种特定免疫应答细胞种类(例如，Th1细胞和B细胞)的两种表型标志。每种探测物特异性地识别一种特定的表型标志。当表型标志在温育细胞内存在、并且与其特异性探测物接触时，形成探测物-标志复合体。然后通过本领域技术人员已知的方法和实验来检测并分析该探测物-标志复合体。可以向温育的PBMC中加入另外的成分，提供关于药物效果的更多信息。例如，特定化学标志如细胞因子和趋本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测药物对免疫应答的效果的方法，包括：使药物与免疫应答细胞接触，形成药物－细胞混合物；和用探测物检测药物－细胞混合物中的细胞活化。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：邓玉萍，
申请(专利权)人：东弗吉尼亚医学院，
类型：发明
国别省市：US[美国]