模拟移动床色谱分离提纯银杏内酯B的方法技术

一种模拟移动床色谱分离提纯银杏内酯Ｂ的方法，其特征在于该分离提纯方法包括以下步骤：　　　　一、取水煮法获得的银杏浸膏，总黄酮２４％、总内酯６％；　　　　二、每克银杏浸膏粉原料加入０．８－１．２Ｌ乙酸乙酯，在３０－３５℃下进行固液萃取８－１０小时，过滤，滤液减压蒸干得银杏内酯粗提物；　　　　三、模拟移动床纯化　　　　（１）设备及条件选择　　　　采用模拟移动床色谱系统，该系统包括洗脱泵、进样泵、萃取泵、流量计、色谱柱、电磁阀、单向阀和ＰＬＣ系统控制器及计算机组成，洗脱泵流量０－１０００ｍＬ／ｍｉｎ，压力０－１０Ｍｐａ；进样泵流量０－３０ｍＬ／ｍｉｎ，压力０－８Ｍｐａ；萃取泵流量０－１００ｍＬ／ｍｉｎ，压力０－１０ＭＰａ；工作温度２０－２５℃；　　　　（２）色谱柱填料及流动相选择　　　　填料为反相硅胶ＯＤＳ，填料粒度３０－４０ｕｍ，流动相为乙醇与水的混合物；　　　　（３）分离步骤　　　　ａ、样液的配制：以经过萃取所得银杏内酯粗提物为原料溶于乙醇中，沉降、０．４５μｍ滤膜过滤，滤液浓度１－１０ｇ／ｍＬ；　　　　ｂ、流动相的配制：乙醇∶水（Ｖ／Ｖ）＝５∶５；　　　　ｃ、模拟移动床色谱参数：解吸段３根柱、精制段３根柱、吸附段２根柱，进样流速Ｕ↓［ｆ］＝８－１２ｍＬ／ｍｉｎ，洗脱泵流速Ｕ↓［ｄ］＝３４０－３８０ｍＬ／ｍｉｎ，萃取液流速Ｕｅ＝２３０－２５０ｍＬ／ｍｉｎ，残余液流速Ｕｒ＝１１８－１４２ｍＬ／ｍｉｎ，切换时间ｔ↓［ｓ］＝１４－１８ｍｉｎ；　　　　ｄ、浓缩：残余液用薄膜旋转蒸发器浓缩至无水，用乙醇洗出后在真空干燥箱轰干，成为恒重的混合物；　　　　四、重结晶　　　　（１）乙醇重结晶　　　　所得恒重的混合物用０．８－１．５ｇ／ｍＬ浓度乙醇溶解，冰箱冷冻放置，过４－８分钟后有白色沉淀析出，白色沉淀析出后再加４－７倍乙醇体积的水，静置１．８－２．５小时过滤，沉淀用水淋洗，白色沉淀真空烘干至恒重，得银杏总内酯；　　　　（２）甲醇重结晶　　　　用甲醇溶解乙醇结晶所得银杏总内酯，１ｇ银杏总内酯用３０－４０ｍＬ甲醇溶解，超声使其完全溶解，室温下滴加４－５ｍＬ水，静置一小时后逐渐降温至零下１０－１８℃，结晶４－６小时，过滤，水洗晶体，结晶两次，白色沉淀真空烘干至恒重，得银杏内酯Ｂ产品；　　　　五、成品ＨＰＬＣ法检测　　　　岛津ＳＰＤ－１０ＡＶＰ紫外检测器，Ｄｉａｍａｎｄｓｉｌ　　ＯＤＳ　　４．６ｍｍ×２５０ｍｍ分析柱，流动相Ｖ（甲醇）∶Ｖ（水）＝６５∶３５，检测波长２２０ｎｍ，流速１ｍＬ／ｍｉｎ，检测灵敏度０．０８００ＡＵＦＳ，进样量２０μＬ，检测温度∶室温，由银杏内酯Ｂ、Ａ、Ｃ对照品来确定产品中的组分并由标准工作曲线法标定银杏内酯Ｂ的纯度为９０－９５％。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及天然药物的分离提纯方法，特别是用模拟移动床色谱分离提纯银杏内酯B的方法。
技术介绍
银杏内酯B作为血小板活化因子拮抗剂是由银杏叶浸提而来。银杏叶中含有银杏内酯B、A、C，银杏黄酮和其他杂质等多种组分。在银杏内酯B的生产过程中，最关键的步骤是分离提纯。实际上银杏内酯B产品必须经过多步分离才能得到纯度较高的产品。这些分离过程包括浸提、过滤、萃取、沉淀等粗提过程。在粗提物中仍有不少杂质。目前采用的精提方法是树脂柱层析，三氧化二铝柱层析法。树脂柱层析是药物与食品工业中常采用的精制手段，这种设备简单，设备一次投资低。这种方法的不足之处在于分离的效率较低，流动相和固定相的利用率较低，成本高，产量低。产品纯度和收率之间的矛盾在柱层析中得不到解决。要保持纯度，只有牺牲收率，这种低收率必将导致高成本。利用模拟移动床色谱分离药物技术近年来得到了迅速的发展。美国的一些专利文献报道了模拟移动床色谱法用于手性药物如光学异构体、外消旋物质和对映体，以及石油化学品的分离。其中US5,518,625专利文献涉及了心得安，氨酰心安和3-氯-苯-1-丙醇的手性分离。在中国的专利申请有德国德雷斯顿药品工业有限公司用模拟移动床色谱分离法制取高纯环苞菌素，还有日本代科化学株式会社和日产化学工业株式会社用模拟移动床法分离甲羟戊酸内酯类化合物技术。本专利技术的申请人也就用模拟移动床法分离手性药物—卡波前列素甲酯、生物药物—替考拉宁申请了中国专利。但是，对于银杏内酯B的模拟移动床色谱分离方法仍未见公开报道。
技术实现思路
本专利技术提供了一种银杏内酯B的分离提纯方法—萃取、模拟移动床色谱和重结晶有机结合的方法，以提高产品纯度和收率。本专利技术提供的银杏内酯B的分离提纯方法包括以下步骤一、取水煮法获得的银杏浸膏，总黄酮24％、总内酯6％。二、每克银杏浸膏粉原料加入0.8-1.2L乙酸乙酯，在30-35℃下进行固液萃取8-10小时，过滤，滤液减压蒸干得银杏内酯粗提物。三、模拟移动床纯化(1)设备及条件选择采用模拟移动床色谱(简称SMBC)系统，该系统包括洗脱泵、进样泵、萃取泵、流量计、色谱柱、电磁阀、单向阀和PLC系统控制器及计算机组成。洗脱泵流量0-1000mL/min，压力0-10Mpa；进样泵流量0-30mL/min，压力0-8Mpa；萃取泵流量0-100mL/min，压力0-10MPa；工作温度20-25℃。(2)色谱柱填料及流动相选择填料为反相硅胶ODS，填料粒度30-40um，流动相(溶剂)为乙醇与水的混合物。(3)分离步骤a、样液的配制以经过萃取所得银杏内酯粗提物为原料溶于乙醇中，沉降、0.45μm滤膜过滤，滤液浓度1-10g/mL。此过程去除部分不可逆吸附的杂质，从而防止大量杂质尤其是不可逆吸附杂质对SMBC系统中色谱柱污染，提高色谱柱的使用寿命。b、流动相的配制乙醇∶水(V/V)＝5∶5。c、模拟移动床色谱参数解吸段3根柱、精制段3根柱、吸附段2根柱。进样流速Uf＝8-12mL/min，洗脱泵流速Ud＝340-380mL/min，萃取液流速Ue＝230-250mL/min，残余液流速Ur＝118-142mL/min，切换时间ts＝14-18min。d、浓缩残余液用薄膜旋转蒸发器浓缩至无水，用乙醇洗出后在真空干燥箱轰干，成为恒重的混合物。四、重结晶(1)乙醇重结晶所得恒重的混合物用0.8-1.5g/mL浓度乙醇溶解，冰箱冷冻放置。现象过4-8分钟后有白色沉淀析出，白色沉淀析出后再加4-7倍乙醇体积的水，静置1.8-2.5小时过滤，沉淀用水淋洗，白色沉淀真空烘干至恒重，得银杏总内酯。(2)甲醇重结晶用甲醇溶解乙醇结晶所得银杏总内酯，1g银杏总内酯用30-40mL甲醇溶解，超声使其完全溶解，室温下滴加4-5mL水，静置一小时后逐渐降温至零下10-18℃，结晶4-6小时，过滤，水洗晶体。结晶两次。白色沉淀真空烘干至恒重，得银杏内酯B产品。五、成品HPLC法检测岛津SPD-10AVP紫外检测器，Diamandsil ODS 4.6mm×250mm分析柱，流动相V(甲醇)∶V(水)＝65∶35，检测波长220nm，流速1mL/min，检测灵敏度0.0800AUFS，进样量20μL，检测温度室温。由银杏内酯B、A、C对照品来确定产品中的组分并由标准工作曲线法标定银杏内酯B的纯度为90-95％。本专利技术与目前精提银杏内酯B的柱层析法比较，收率高，达64％、产量大，提纯所得银杏内酯B纯度大于90％。另外模拟移动床过程是连续过程，层析方法是间歇的，因此模拟移动床技术的引入提高了生产的自动化水平和生产效率，并使生产环境得到极大的改善，真正实现了清洁生产。萃取、模拟移动床色谱、重结晶都是规模化纯化工艺，三者的有机结合是本专利技术的突出特点，是规模化精细分离的保证。具体实施例方式一、样液的预处理取水煮法获得的银杏浸膏，总黄酮24％、总内酯6％。每克银杏浸膏粉原料加入0.8-1.2L乙酸乙酯，在30-35℃下进行固液萃取8-10小时，过滤，滤液减压蒸干得银杏内酯粗提物。将经过萃取所得银杏内酯粗提物为原料溶于乙醇中，沉降、0.45um滤膜过滤，滤液浓度1-10g/mL。此过程去除部分不可逆吸附的杂质，从而防止大量杂质尤其是不可逆吸附杂质对SMBC系统中色谱柱污染，提高色谱柱的使用寿命。二、流动相的配制乙醇∶水(V/V)＝5∶5。三、模拟移动床色谱参数解吸段3根柱、精制段3根柱、吸附段2根柱。进样流速Uf＝10mL/min，洗脱泵流速Ud＝360mL/min，萃取液流速Ue＝240mL/min，残余液流速Ur＝120mL/min，切换时间ts＝16min，残余液为SMBC产品。四、浓缩产品液和残余液分别用薄膜旋转蒸发器浓缩至无水，用乙醇洗出后在真空干燥箱烘干至恒重。五、重结晶(1)乙醇重结晶所得恒重的混合物用0.8-1.5g/mL浓度乙醇溶解，冰箱冷冻放置。现象过4-8分钟后有白色沉淀析出，白色沉淀析出后再加4-7倍乙醇体积的水，静置1.8-2.5小时过滤，沉淀用水淋洗，白色沉淀真空烘干至恒重，得银杏总内酯。(2)甲醇重结晶用甲醇溶解乙醇结晶所得银杏总内酯，1g银杏总内酯用30-40mL甲醇溶解，超声使其完全溶解，室温下滴加4-5mL水，静置一小时后逐渐降温至零下10-18℃，结晶4-6小时，过滤，水洗晶体。结晶两次。白色沉淀真空烘干至恒重，得银杏内酯B产品。六、成品HPLC法检测岛津SPD-10AVP紫外检测器，Diamandsil ODS 4.6mm×250mm分析柱，流动相V(甲醇)∶V(水)＝65∶35，检测波长220nm，流速1mL/min，检测灵敏度0.0800AUFS，进样量20μL，检测温度室温。由银杏内酯B、A、C对照品来确定产品中的组分并由标准工作曲线法标定银杏内酯B的纯度为93％。权利要求1.一种模拟移动床色谱分离提纯银杏内酯B的方法，其特征在于该分离提纯方法包括以下步骤一、取水煮法获得的银杏浸膏，总黄酮24％、总内酯6％；二、每克银杏浸膏粉原料加入0.8-1.2L乙酸乙酯，在30-35℃下进行固液萃取8-10小时，过滤，滤液减压蒸干得银杏内酯粗提物；三、模拟移动床纯化(1)设备及条件选择采用模拟移动床色谱系统，该系统包括洗脱泵、进样泵、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：林柄昌，高丽娟，兰绍鹏，张伟，郭威，全艳玲，
申请(专利权)人：鞍山科技大学，
类型：发明
国别省市：