一步法检测犬腹泻病毒的引物对、TaqMan探针及方法与应用技术

本申请公开一步法检测犬腹泻病毒的引物对、TaqMan探针及方法与应用，从引物探针的特异性、反应体系的关键因子、质控构建等多个方面对多重荧光PCR进行了探索研究，以待检样品的核酸或反转录产物扩增检测片段并连接pMD18‑T载体，成功构建质粒作为模板，建立了犬细小病毒，犬冠状病毒，犬星状病毒，犬库布病毒多重实时荧光定量PCR方法，该专利允许在一个反应管中最多同时检测出4种能够导致犬腹泻的病毒，其检测灵敏度达到1×10

【技术实现步骤摘要】
一步法检测犬腹泻病毒的引物对、TaqMan探针及方法与应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一步法检测犬腹泻病毒的引物对、TaqMan探针及方法与应用。
技术介绍
犬细小病毒(CanineParvovirus,CPV)、犬冠状病毒(CanineCoronavirus,CCoV)、犬星状病毒(CanineAstrovirus,CAstV)和犬库布病毒(CanineKobuviruses,CaKoV)在我国宠物乃至全球宠物犬中引起的发病率和死亡率居高不下，是主要的几种犬腹泻病毒病，常常会造成较严重的经济和养主精神损失。尤其是CPV可造成幼犬70％的死亡率，并引起犬出血性肠炎；CCV主要引起肠胃炎；而CAstV临床表现形式及其流行规律，目前尚未清楚，主要与CPV伴发感染；CaKoV被认为与犬病毒性腹泻存在一定相关，该病毒第一次在美国从患急性胃肠炎的犬中检测出。这四种传染病的临床特征及病理变化都十分相似，临床上很难辨别，且多有共感染情况。但使用常规的病原学检测方法，不但耗时长，而且过程繁琐，目前还没有对CPV、CCoV、CAstV和CaKoV同时进本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一步法检测犬腹泻病毒的引物对和TaqMan探针，其特征在于，所述犬腹泻病毒为犬细小病毒、犬冠状病毒、犬库布病毒或犬星状病毒；/n当犬腹泻病毒为犬细小病毒时，引物对的核苷酸序列为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2，TaqMan探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：3；/n当犬腹泻病毒为犬冠状病毒时，引物对的核苷酸序列为SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5，TaqMan探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：6；/n当犬腹泻病毒为犬库布病毒时，引物对的核苷酸序列为SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8，TaqMan探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：9；/n当犬腹...

【技术特征摘要】
1.一步法检测犬腹泻病毒的引物对和TaqMan探针，其特征在于，所述犬腹泻病毒为犬细小病毒、犬冠状病毒、犬库布病毒或犬星状病毒；
当犬腹泻病毒为犬细小病毒时，引物对的核苷酸序列为SEQIDNO：1和SEQIDNO：2，TaqMan探针的核苷酸序列如SEQIDNO：3；
当犬腹泻病毒为犬冠状病毒时，引物对的核苷酸序列为SEQIDNO：4和SEQIDNO：5，TaqMan探针的核苷酸序列如SEQIDNO：6；
当犬腹泻病毒为犬库布病毒时，引物对的核苷酸序列为SEQIDNO：7和SEQIDNO：8，TaqMan探针的核苷酸序列如SEQIDNO：9；
当犬腹泻病毒为犬星状病毒时，引物对的核苷酸序列为SEQIDNO：10和SEQIDNO：11，TaqMan探针的核苷酸序列如SEQIDNO：12。


2.基于权利要求1所述的引物对和TaqMan探针对犬腹泻病毒检测的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1，使用天隆科技试剂盒抽提病料中所含的RNA和DNA混合模板，并进行反转录，其反应总体系为20μL，包括：1μLRandomHexamerPrimer,1μLOligo(dT)18Primer,5μLnuclease-freeWater,5μL混合模板，混匀后65℃孵育5min，冰浴2min，继续加入：4μL5×ReactionBuffer、2μL10×dNTP预混液、1μLRevertAidM-MuLVReversetranscriptase(RT)和1μLRiboLockRNaseInhibitor(RI)，搅拌均匀后，在普通PCR反应体系中进行反应，反应结束获得DNA和cDNA混合模板；
步骤2，利用引物对SEQIDNO：1和SEQIDNO：2，SEQIDNO：4和SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：粟硕，王茹怡，张文艳，潘中洲，李改茹，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32