一种罗氏假单胞菌及其在烟草上的应用制造技术

本发明专利技术提供一种罗氏假单胞菌（Pseudomona rhodesiae）菌株45‑1，保藏编号为CGMCC No.9790，该种罗氏假单胞菌可用于促进农作物生长，还可用于农业生物防治，该菌株处理烟草幼苗后，幼苗的株高、鲜重、叶绿素含量等均有明显提高；同时，该菌株还可以高效防治烟草黑胫病，将罗氏假单胞菌应用于烟草作物上是当前烟草生物防治的一个重要方向。

【技术实现步骤摘要】
一种罗氏假单胞菌及其在烟草上的应用
本专利技术属于微生物
，具体涉及一种罗氏假单胞菌及其在烟草上的应用。
技术介绍
烟草黑胫病是世界烟草生产中危害最严重的一种土传根茎病害，一旦被侵染，后果将是毁灭性的，该种病害在我国烟草生产上造成的经济损失极其惨重，是我国烟草生产上第二大病害，仅次于烟草病毒病。黑胫病的防控主要集中在培育抗病品种、农业防治、化学防治和生物防治四方面。其中，生物防治烟草黑胫病是利用菌株产生的抗菌素来溶解烟草黑胫病菌菌丝，从而达到抑制病原菌生长的目的，减少病害的发生。烟草黑胫病菌的拮抗细菌有假单胞杆菌、芽孢杆菌和农杆菌等。罗氏假单胞菌（Pseudomonarhodesiae）不仅具有促进植株生长的能力，而且还具有显著的生防潜力。该细菌能够产生IAA(吲哚乙酸)、解磷等促进植物生长；同时该类细菌可通过抑制病原菌生长、产生抗菌物质等方式用于病害生物防治。因此选择高效抑菌的罗氏假单胞菌是当前烟草生物防治的一个重要方向。其作用机制是菌株产生的抗菌素有溶解烟草黑胫病菌菌丝的功能，表现为土壤中的铁离子被菌株分泌的嗜铁素鳌合，使得病原菌的生长缺少铁营养，从而达到抑制病原菌生长的目的，起到防治烟草黑胫病的效果，提高烟叶产质和效益。
技术实现思路
为解决现有技术存在的问题，对现有工艺进行进一步优化，本专利技术提供一种罗氏假单胞菌及其在烟草上的应用，以实现以下专利技术目的：1、用于烟草的生物防治；2、促进烟草的生长；为解决以上技术问题，本专利技术采用以下技术方案：本专利技术提供一种罗氏假单胞菌（Pseudomonarhodesiae）菌株45-1，保藏编号为CGMCCNo.9790；生物样品保藏信息如下：罗氏假单胞菌（Pseudomonarhodesiae）菌株45-1，分类命名为：伯克霍尔德氏菌Burkholderiasp.；于2014年10月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中科院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNo.9790，保藏单位出具了存活证明；所述菌株可用于农业生物防治；优选地，所述菌株可用于防治烟草黑胫病；所述菌株可用于促进农作物生长；优选地，所述菌株可用于促进烟草植株生长；所述罗氏假单胞菌菌株在烟草上的应用，是将菌株45-1悬液用无菌水稀释至浓度1-5×108CFU.mL-1后处理烟苗，每棵烟苗用量50-60mL，连续处理3次，每次间隔7d。采用上述技术方案，本专利技术的有益效果为：1、本专利技术提供的罗氏假单胞菌可以高效用于烟草病害的生物防治，菌株45-1对烟草黑胫病防效达45.5%，与CK相比有显著的防效，处理后发病率、病情指数大大降低；2、本专利技术提供的罗氏假单胞菌可以明显促进烟草生长，室内促生效果测定表明，菌株45-1对烟草苗期促生效果明显，与对照CK相比烟草最大叶长、最大叶宽、株高、叶片数、叶绿素、地上部鲜重和地下部鲜重等指标分别增加了0.29%、5.97%、23.74%、4.64%、15.67%、11.83%和10.21%，菌株45-1具有促生效果。附图说明：图1为菌株45-1在无机磷培养基上的解磷效果图；图2为菌株45-1对烟草黑胫病菌的抑菌效果图；图3为菌株45-1生长曲线图；图4为菌株45-1和CK处理后烟苗的生长状况对比图；具体实施方式：下面结合具体的实施例，进一步阐述本专利技术。实施例1拮抗细菌的分离和鉴定从烟草根围土壤筛选出拮抗细菌，后采用分子生物学方法对筛选得到的拮抗细菌分别进行鉴定；菌株45-1的筛选过程：采用梯度稀释培养法，将土壤稀释液均匀涂于PVK无机磷培养基平板上，将平板倒置于28℃恒温培养箱中培养3-5天，观察菌落生长情况及解磷圈的大小；根据溶磷圈直径（D）与菌落直径（d）的比值(D/d)的大小初步确定各个菌株溶磷能力的大小；选取周围出现明显的、透明圈的菌落，在NA培养基上进行划线培养，得到纯化的目的菌株45-1。所述PVK无机磷培养基为：每1L培养基中包含葡萄糖10g，硫酸铵0.5g，氯化钠0.2g，硫酸镁0.1g，磷酸三钙5g，氯化钾0.2g，酵母粉0.5g，硫酸锰0.002g，硫酸亚铁0.002g，0.4%溴酚蓝（PH6.7）6mL，琼脂粉18g，用去离子水补齐至1L，121℃湿热灭菌25min。注：由于磷酸三钙难溶于水，故配制培养基时将其单独分装灭菌，倒板之前加入。如说明书附图1所示，菌株45-1解磷圈直径平均为26.3毫米，菌落直径平均为7.0毫米，D/d比值为2.26，说明菌株45-1具有较好的解磷能力。对菌株的16SrDNA全序列进行测定与分析；采用CTAB法（十六烷基三甲基溴化铵cetyltrimethylammoniumAmmoniumBromide）提取菌株DNA，进行PCR扩增，将所得片段进行测序，并对所得序列与NCBI网站的GenBank已经提交的序列比对结果显示，菌株45-1与Pseudomonarhodesiae的同源性最高，表明为罗氏假单胞菌（Pseudomonarhodesiae）。实施例2烟草黑胫病菌抑菌效果实验实验观察菌株45-1对烟草黑胫病菌的抑制效果，证明抑制作用确切，菌株45-1对烟草黑胫病菌的良好的拮抗作用，对烟草黑胫病具有良好的防治效果；采用平板对峙法，测试罗氏假单胞菌菌株45-1对烟草黑胫病菌拮抗效果，在PDA（马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称）板的中央接菌株45-1，左右距离为2.5cm处接种病原菌菌丝块，每菌株重复3个平板，28℃光照培养箱培养5d，观察菌株对黑胫病菌的抑制效果；如说明书附图2所示，菌株45-1能够抑制烟草黑胫病原菌菌丝生长，说明该菌株对烟草黑胫病原菌有明显的抑制作用。实施例3菌株45-1分泌IAA(吲哚乙酸)量的测定1）IAA标准曲线的建立标准曲线由100μg/mL的分析纯的IAA标准液梯度稀释制备而成；经计算得回归方程为Y=0.041X+0.097，其中R2=0.991；2）菌株45-1分泌IAA能力的测定菌株45-1在含有L-色氨酸(1000mg/L)的LB液体培养基中培养96h，离心取上清液，然后参照上述方法，测定吸光度，平行测定3次，根据标准曲线得到3个样品的IAA含量，计算平均值，计算出菌株45-1产IAA的量为109.5mg/L；实验证明，菌株45-1可以产生IAA，产IAA的量为109.5mg/L。实施例4菌株45-1生长曲线的测定挑取NA固体平板上重新培养、划线的45-1菌株的单菌落，分别接种于10mLNB液体培养基中28℃，200rpm振荡培养42h；每2h取5µL菌液，测定OD600值，绘制45-1菌株生长曲线。如说明书附图3所示，45-1菌株在NB液体培养基中，菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种罗氏假单胞菌（Pseudomona rhodesiae）菌株45-1，其特征在于，保藏编号为CGMCC No. 9790。/n

【技术特征摘要】
1.一种罗氏假单胞菌（Pseudomonarhodesiae）菌株45-1，其特征在于，保藏编号为CGMCCNo.9790。


2.根据权利要求1所述的罗氏假单胞菌菌株45-1，其特征在于，所述菌株可用于农业生物防治。


3.根据权利要求2所述的罗氏假单胞菌菌株45-1，其特征在于，所述菌株可用于防治烟草黑胫病。


4.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘春菊，梁子敬，席元肖，杜传印，李斐，高政绪，古明光，王德权，方敏，王玉华，
申请(专利权)人：山东潍坊烟草有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37