检验和治疗鼻咽癌的物质和方法技术

本发明专利技术有关基于细胞中差异基因表达的鼻咽癌（ＮＰＣ）的检测和治疗。特别是，本发明专利技术提供了ＮＰＣ中差异表达的基因的细节，用来检测该疾病及其临床类型的存在或风险。本发明专利技术也提供了与化疗或放疗联合治疗ＮＰＣ的方法。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基于癌细胞中的差异基因表达治疗癌症的物质和方法。尤其是，但不仅仅是，本专利技术提供了诊断和治疗鼻咽癌的物质和方法。人鼻咽癌(NPC)出现于后鼻咽部的表面上皮，并且并发高频率的颈部和远处转移。NPC在中国东南部、亚洲东南部、台湾、非洲东部和阿拉斯加州的某些区域发生率高(Marks等，1998)。NPC的高峰发生率发生在生命的第四十至五十年。在新加坡，NPC是中国血统的男性中第五个最流行的癌症，具有每100,000中14.3的年发生率(Chia等，2000)。在临床上，最常用离子放射治疗NPC(Lee等，1992；Marks等，1998)。世界卫生组织(WHO)已根据分化程度将NPC分为三类(Marks等，1998)。I型是指鳞状细胞癌，它们高度分化，具有特征性的上皮生长方式和细胞内和细胞外角蛋白丝。无角质化WHO II型癌保留上皮细胞性状和生长方式。另一方面，WHO III型未分化癌不产生角蛋白并且不产生独特的生长方式。WHO-I角质化鳞状细胞癌包括75％美国鼻咽癌病例并且在美国出生的、非西班牙白种人中发现最多。WHO-II无角质化和WHO-III未分化鼻咽癌包括剩余25％的NPC并且更常见于亚洲人。在临床上，报道了亚洲人具有最高比例的放射反应性WHO-II无角质化和WHO-III未分化鼻咽癌并且与具有更大数量低放射反应性的角质化鳞状细胞鼻咽癌的非洲人-美洲人和西班牙人和非西班牙白种人相比能更好地存活。报道了无角质化和未分化鼻咽癌的5年相对存活率是65％，和角质化变种是37％(Marks等，1998)。已经证明EB病毒(EBV)与NPC密切相关(Mutirangura等，1998；Chen等，1998)。已报到WHOII和III型NPC与EBV感染相关。WHO-II和III型NPC患者中，他们针对EBV病毒壳体抗原(VCA)以及早期抗原传播成分的IgG和IgA水平升高(Zong等，1992；Sigel等，1994)。相比之下，WHO I型分化很好的癌症患者具有与对照人群类似的EBV血清学特征且看来与EBV感染没有特殊相关。此外，分子研究表明在所有三个WHO型NPC的恶性上皮肿瘤细胞中都可清楚证明EBV基因组。Northern印迹分析也证明了从NPC患者获得的活检组织中潜伏期和溶解周期中包括的EBV基因产物的表达(Busson等，1992)。然而，表明EBV是NPC病因物质的直接证据很困难且尚未建立。NPC的另一个重要特征是NPC肿瘤的病理组织学特征是非恶性淋巴细胞重度浸润。已经表明显著比例的这些肿瘤浸润的淋巴细胞(TIL)是T细胞(Huang等，1999)。这些TIL产生的某些细胞因子可能有助于NPC发展过程中肿瘤的生长(Huang等，1999 Tang等，2001)。NPC癌发生可能反映了多种遗传、饮食和病毒相关事件的累积，它改变了癌基因和肿瘤抑制基因的正常功能(Gray and Collins，2000；Williams，2000)。广泛的分子分析包括核型和比较基因组杂交(CGH)研究(Chien等，2001；Fang等，2001)提示NPC因多步骤过程出现。等位基因分型和CGH的基因组宽泛研究检测到NPC中染色体3p、9p、11q、12q、13q和14q上高频率的基因异常。这个数据提示在RASSF1A基因定位的3p21.3的区域存在潜在NPC相关肿瘤抑制基因(Lo等，2001)。近来报道了NPC细胞中启动子过度甲基化与RASSF1A基因表达丧失的相关性(Lo等，2001)。发现饮食接触在发生NPC特殊组织学亚组的整体改变风险中起作用。在含高水平N-亚硝基化合物的防腐肉的频繁消费者中无角质化和未分化鼻咽癌肿瘤的风险增加(Farrow等，1998)。在摄入维生素C的个体中分化鳞状细胞癌的风险降低，不是其它组织学类型(Farrow等，1998)。这个关系在不吸烟者和以前吸烟者比当前吸烟者明显增强(Farrow等，1998)。此外，发现无角质化和未分化鼻咽癌的患者中针对早期抗原和病毒壳体抗原的EBV抗体的效价升高，而这些抗体的效价在对照和角质化变种患者之间相当(Neel，1985和1986)。然而，角质化鳞状细胞鼻咽癌和放射反应性相对更高的无角质化和未分化鼻咽癌之间的分子基础尚未系统地研究。为了试图理解角质化鳞状细胞鼻咽癌与无角质化和未分化鼻咽癌之间的分子差异，本专利技术人采用cDNA微阵列来鉴定人NPC癌形成中可能潜在包括的基因。专利技术人确定了在未分化和分化人NPC中差异表达的少量基因。特别是，专利技术人发现了在未分化CNE-2 NPC细胞中十五个基因差异性上调，而在分化很好的HK1细胞中六个基因特异性上调。鉴定的未分化人NPC细胞系CNE-2中特异性上调的基因之一是人印记基因H19。有趣的是，H19不在分化很好的人HK1 NPC细胞中表达。Northern印迹和原位杂交分析也证实了H19在未分化CNE-2人NPC细胞系中强烈表达，但不在分化很好的HK1人NPC细胞系中表达。而且，专利技术人证明了H19启动子区域CpG位点的甲基化不足可诱导H19基因表达在分化很好的人HK1 NPC细胞中去调节。专利技术人相信启动子区域基因的甲基化过度因此可能是在人NPC细胞分化和印记基因转录沉默中起作用的重要后生事件。因此，最基本，本专利技术提供了诊断和治疗鼻咽癌(NPC)的物质和方法。本专利技术进一步提供了筛选可以用于鼻咽癌治疗或诊断的试剂或治疗目标的方法。在不同类型NPC中某些基因的差异表达知识首次提供了诊断NPC或NPC风险的工具。这种诊断可以不依赖组织学研究或可以用于补充组织学研究。更加和非常重要的是，差异基因表达知识能够诊断NPC类型，因此确保得到适当治疗。在本专利技术的第一个方面，提供了确定患者NPC的存在或风险的方法，包括步骤(a)获得从怀疑具有NPC或具有NPC风险的患者得到的鼻咽细胞的表达产物；(b)所述表达产物接触能够结合对应于表1中鉴定的一种或多种基因的表达产物的结合成员；和(c)基于来自所述鼻咽细胞的表达产物与一种或多种结合成员的结合来确定所述患者NPC的存在或风险。表达产物的存在或上调可以通过将从测试下细胞得到的表达产物的存在或水平与适当对照细胞得到的进行比较来确定。理想地，对照细胞将是“正常的”，即来自鼻咽的非癌上皮细胞。这些细胞也可以从检测下的患者得到。也可以使用来自其它身体部分的正常上皮细胞。分析对照细胞的可供选择方法是可以用作对照的表达产物标准与测试下细胞的表达水平或模式进行比较。这种标准可以通过分析样品收集物确定正常细胞中一种或多种产物“标准”表达水平或模式来产生。这在下面更详细讨论。如上提及，根据本专利技术第一个方面的方法不仅特别适合于将鼻咽样品分类为正常或恶性，而且适合于对特定类型NPC进行分类。因此，在一个实施方案中，本专利技术提供了通过检测表1中鉴定的至少一种基因的差异上调表达来确定NPC类型的方法，如分化或未分化。该表达产物可以是转录核酸序列或表达的多肽。该转录核酸序列可以是RNA、mRNA或mRNA产生的cDNA。结合成员可以是在适合杂交条件下能够特异性结合转录核酸的互补核酸序列。当表达产物是表达蛋白的情况下，优选结合成员是所述表达多肽特异性的抗体或包含抗体结合结构域的分子。为了本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种确定个体中鼻咽癌（ＮＰＣ）的存在或风险的方法，包括步骤（ａ）获得从怀疑具有ＮＰＣ或具有ＮＰＣ风险的人体得到的鼻咽细胞的表达产物；（ｂ）将所述表达产物接触一种或多种能够结合表１中鉴定的一种或多种基因的表达产物的结合成员；和（ｃ）基于来自所述鼻咽细胞的表达产物与一种或多种结合成员的结合来确定所述患者中ＮＰＣ的存在或风险。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：吴俊贤，唐精萍，许锦文，吴福庆，
申请(专利权)人：许锦文，吴福庆，
类型：发明
国别省市：SG[新加坡]