本发明专利技术涉及单价和多价的，单特异性结合蛋白和涉及多价的，多特异性结合蛋白。这些结合蛋白的一个实施方案含有一个或多个结合位点，其中每个结合位点与靶抗原或靶抗原上的表位结合。这些结合蛋白的另一实施方案含有两个或多个结合位点，其中每个结合位点具有对靶抗原上不同表位的亲和性或具有对靶抗原或半抗原的亲和性。本发明专利技术还涉及用于在宿主中表达这些功能性结合蛋白的重组载体。更具体地，本发明专利技术涉及名为ＲＳ７的肿瘤相关抗原结合蛋白和其它ＥＧＰ－１结合蛋白。本发明专利技术还涉及人源化，人和嵌合ＲＳ７抗原结合蛋白，以及该结合蛋白在诊断和治疗中的用途。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】1.专利
本专利技术涉及单价和多价的，单特异性结合蛋白和涉及多价的，多特异性结合蛋白。这些结合蛋白的一个实施方案含有一个或多个结合位点，其中每个结合位点与靶抗原或靶抗原上的表位结合。这些结合蛋白的另一实施方案含有两个或多个结合位点，其中每个结合位点具有对靶抗原上不同表位的亲和性或具有对靶抗原或半抗原的亲和性。本专利技术还涉及用于在宿主中表达这些功能性结合蛋白的重组载体。更具体地，本专利技术涉及名为RS7的肿瘤相关抗原结合蛋白。本专利技术还涉及人源化RS7抗原结合蛋白，以及该结合蛋白在诊断和治疗中的用途。2.专利技术背景人造结合蛋白，尤其是单克隆抗体和工程化处理抗体或抗体片段已经得到广泛测试并显示出在多种人类疾病，包括癌症、自身免疫病、感染性疾病、炎症疾病和心血管疾病的检测和治疗中的价值(Filpula和McGuire，Exp.Opin.Ther.Patents(1999)9231-245)。例如放射性同位素标记的抗体已经检测可用于在使用本领域可用的检测剂注射患者后使肿瘤可视化。抗体或抗体来源的试剂的临床应用主要依赖于其与特异性靶抗原的结合能力。选择能力对于在人疾病的检测和治疗期间将诊断剂或治疗剂，如同位素、药物、毒素、细胞因子、激素、生长因子、酶、缀合物、放射性核素或金属递送至靶位，特别是如果诊断剂或治疗剂对体内的正常组织有毒性的情况下是有用的。Goldenberg，The American Journal of Medicine(1993)94298-299中公开了抗体系统的潜在局限性。检测和治疗技术中的重要参数是注射剂量特别是靶细胞存在位点的剂量的量和摄取率，即特异性结合的抗体的浓度与周围正常组织中存在的放射性的比率。当将抗体注射至血流中时，其要通过多个区室而被代谢和排泄。抗体在通过身体的其它部分时，必须能够定位和结合靶细胞抗原。控制抗原靶向的因素包括位置，大小，抗原密度，抗原可达性，病理组织的细胞组成和靶向抗体的药代动力学。其它能特别影响抗体对肿瘤靶向的因素包括靶抗原在肿瘤和其它组织中的表达和由放射性标记的抗体的缓慢血液清除率所导致的骨髓毒性。附着于被靶定的肿瘤细胞的靶向抗体的量收到血管化和肿瘤抗体透过屏障，以及瘤内压力的影响。非靶器官如肝、肾或骨髓的非特异性的摄取是该技术，特别是用于发射免疫治疗时的另一个潜在的局限性，其中骨髓的照射通常会导致剂量限制性毒性。一个建议的方法，指直接靶向，是为用携带诊断性或治疗性放射性同位素的抗体靶向抗原而设计的技术。在肿瘤领域中，直接靶向方法使用通过其抗原识别肿瘤的发射性标记的抗-肿瘤单特异性抗体。该技术包括将标记的单特异性抗体注射给患者然后使得抗体定位于靶肿瘤从而获得诊断性或治疗性效果。未结合的抗体被身体清除。该方法可用于诊断或治疗另外的哺乳动物疾病。另一种建议的溶液，指特别为克服携带诊断性或治疗性放射性同位素的抗体靶向肿瘤的缺陷而设计的“亲和力增强系统”(AES)，(US-5,256,395(1993)，Barbet等，Cancer Biotherapy &Radiopharmaceuticals(1999)14153-166)。AES采用放射性标记的半抗原和识别靶肿瘤和放射性半抗原的抗-肿瘤/抗-半抗原双特异性结合蛋白。具有较高效价的半抗原和具有较高特异性的结合蛋白也可用于该方法。该方法包括将将结合蛋白注射给患者然后使其定位于靶肿瘤。在经过足够长的未结合的结合蛋白被从血流中清除的时间后，给予放射性标记的半抗原。半抗原于位于靶细胞位点的抗体-抗原复合物结合从而获得诊断性或治疗性效果。未结合的半抗原被身体清除。Barbet描述了二价半抗原可与双特异性抗体在后者结合在肿瘤表面上时发生交联的可能性，。结果，放射性标记的复合物更稳定且在肿瘤中保持更长的时间。该系统可用于诊断或治疗哺乳动物疾病。本领域中仍需要制备可用于直接靶向系统中的多价，单特异性结合蛋白和制备可用于亲和力增强系统中的多价，多特异性结合蛋白。特别是，仍需要表现出定向抗原处的增强的摄取，血浓度降低，和能最佳保护正常组织和细胞免受毒性药物损害的结合蛋白。专利技术概述因此，本专利技术的一个目的是提供识别肿瘤相关抗原，由抗人非小细胞肺癌的鼠MAb RS7-3G11所限定的上皮糖蛋白-1(EGP-1)的单特异性单克隆抗体及其片段。根据第三届国际肺癌研究协会(IASLC)研讨会对肿瘤和分化抗原的建议，已将RS7抗原命名为EGP-1(上皮糖蛋白-1)。至少一种与EGP-1相关的表位在文献中也称为TROP2。在一个优选的实施方案中，本专利技术的抗体或抗体片段结合的表位与Stein(如下)和其它在先研究所披露的鼠RS7抗体结合的表位相同。或者，抗体或片段结合的表位可与Stein所披露的鼠RS7抗体结合的表位不同。在一个优选的实施方案中，抗-EGP-1或抗-TROP2抗体或其片段是嵌合、人源化或完整人RS7抗体或其片段。例如本专利技术中涉及了人源化抗体或其片段，其中人源化RS7 MAb的轻链可变区的互补决定区(CDR)包括含有KASQDVSIAVA氨基酸序列的CDR1；含有SASYRYT氨基酸序列的CDR2；和含有QQHYITPLT氨基酸序列的CDR3。本专利技术的另一实施方案是人源化抗体或其片段，其中人源化RS7 MAb的重链可变区的CDR包括含有NYGMN氨基酸序列的CDR1；含有WINTYTGEPTYTDDFKG氨基酸序列的CDR2和含有GGFGSSYWYFDV氨基酸序列的CDR3。而且优选，人源化抗体或其片段包括鼠RS7 MAb的CDR和人抗体的轻链和重链可变区的构架区(FR)，其中人源化RS7 MAb的轻链可变区的CDR包括含有KASQDVSIAVA氨基酸序列的CDR1；含有SASYRYT氨基酸序列的CDR2；和含有QQHYITPLT氨基酸序列的CDR3；和人源化RS7 MAb的重链可变区的CDR包括含有NYGMN氨基酸序列的CDR1；含有WINTYTGEPTYTDDFKG氨基酸序列的CDR2和含有GGFGSSYWYFDV氨基酸序列的CDR3。还优选，人源化抗体或其片段还包括人抗体的轻链和重链恒定区的FR。在一个优选的实施方案中，人源化RS7抗体或片段包括含有至少一个被在鼠RS7抗体中相应位置上发现的氨基酸残基所替换的氨基酸的轻链和/或重链的FR。例如其中至少一个被替换的氨基酸残基优选位于选自图.3B的鼠重链可变区的氨基酸残基38、46、68和91的位置和/或至少一个被替换的氨基酸残基优选位于选自图.3A的鼠轻链可变区的氨基酸残基20，85和100的位置。本专利技术还描述了一种包括至少两种抗-EGP-1 MAb或其片段的抗体融合蛋白或其片段，其中MAb或其片段选自本专利技术的抗-EGP-1 MAb或其片段。在相关静脉中，抗体融合蛋白或其片段包括至少一种任何本专利技术的抗-EGP-1抗体的第一抗-EGP-1 MAb或其片段和至少一种本专利技术的抗-EGP抗体以外的第二MAb或其片段。例如第二抗体或其片段可以是癌-相关抗体或其片段。另一优选的实施方案是包括两个不同表位结合性抗-EGP-1抗体或其片段的融合蛋白或其片段。本专利技术的一个目的是提供识别多于一个RS7抗原上的表位的或具有对RS7抗原和对半抗原分子亲和力的多特异性抗体及其片段。后一本文档来自技高网...
【技术保护点】
结合ＥＧＰ－１糖蛋白的抗体或其片段。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：S戈文丹，Z屈，HJ汉森，DM戈登伯格，
申请(专利权)人：免疫医疗公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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