人源化单克隆抗体ｈＰＡＭ４制造技术

本发明专利技术涉及单价和多价单特异性抗体以及多价多特异性抗体。这些抗体的一个实施方案具有一个或多个相同的结合部位，其中每个结合部位与靶抗原或靶抗原上的表位结合。这些抗体的另一个实施方案具有两个或更多个结合部位，其中这些结合部位对靶抗原上的不同表位或者不同的靶抗原具有亲和性，或者对靶抗原和半抗原具有亲和性。本发明专利技术还涉及可用于在宿主中表达这些功能性抗体的重组载体。更准确地讲，本发明专利技术涉及命名为ＰＡＭ４的肿瘤相关抗体。本发明专利技术还涉及人源化ＰＡＭ４抗体和人ＰＡＭ４抗体以及所述抗体在诊断和治疗中的用途。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及单价和多价单特异性抗体以及多价多特异性抗体。准确地讲，本专利技术涉及命名为PAM4的MUC1抗原特异性抗体。本专利技术还涉及人源化PAM4抗体和人PAM4抗体及其片段以及所述抗体及其片段在诊断和治疗中的用途。在一个实施方案中，本专利技术的抗体具有一个或多个相同的结合部位，其中每个结合部位对靶抗原或靶抗原上的表位都具有亲和性。在另一个实施方案中，本专利技术的抗体具有两个或更多个结合部位，所述结合部位对靶抗原上或者相同或不同靶抗原上的相同或不同表位具有亲和性，或者至少一个结合部位对靶抗原具有亲和性，至少一个结合部位对半抗原具有亲和性。本专利技术也描述了可用于在宿主中表达本文所述抗体的重组载体。
技术介绍
胰腺产生胰岛素和酶，胰岛素帮助机体将葡萄糖转化成能量，而酶帮助机体消化食物。胰腺癌是主要发生在胰腺管细胞的胰腺的恶性生长。该疾病是排在第九位的最常见癌症形式，还是分别排在第四位和第五位的男性和女性癌症死亡的原因。胰腺癌几乎总是致命的，5年存活率小于3％。胰腺癌最常见的症状包括黄疸、腹痛和体重减轻，并伴有本质上是非特异性的其它呈递因子。因此，在肿瘤生长的早期诊断出胰腺癌常常是困难的，需要经过深思熟虑的怀疑和多方面的诊断检查，时常包括探察手术。内窥镜超声成像和计算机断层成像是目前最好的可利用的非侵害性诊断胰腺癌的手段。然而，小肿瘤以及鉴别胰腺癌和局灶性胰腺炎的可靠检测极其繁琐。遗撼的是，目前，绝大多数患者当处于晚期时才被诊断出来，此时肿瘤已经从囊向外延伸，侵袭周围器官和/或已经向全身转移。Gold等，Crit.Rev.Oncology/Hematology，39147-54(2001)。该病的晚期检测是普通的，而“早期”胰腺癌诊断在临床上是罕见的。用于胰腺癌的当前疗法一直不能治愈，基本上也不能延长存活时间。手术切除术一直是提供存活机会的唯一方式。然而，由于大肿瘤负担，仅10％-25％的患者是“治疗性切除术”的候选者。对于这些经历手术治疗的患者，5年存活率仍不理想，平均仅约为10％。胰腺癌的早期检测和诊断以及对该疾病的适当分期将会提供增加的存活优势。许多实验室都在进行基于使肿瘤相关标记释放到血流中以及检测活检标本中的标记物来开发诊断方法。对于胰腺癌，最好的肿瘤相关标记一直是针对CA19.9的免疫测定。在70％的胰腺癌患者体内发现该唾液酸化Lea表位结构的水平升高，但该表位结构在任何所检查的局灶性胰腺炎标本中都没有被发现。然而，发现CA19.9水平在许多其它恶性和良性病症中也会升高，所以目前该测定不能用于诊断。然而，该测定可用于监测，手术后CA19.9血清水平持续升高说明预后差。据报道，许多其它的单克隆抗体(MAb)结合免疫测定可以在不同的发展期用于诊断。这些包括但不限于DUPAN2、SPAN1、B72.3、Ia3和各种抗CEA抗体。人造抗体、特别是MAb和工程抗体或抗体片段已经进行了全面的测试，表明它们在检测和治疗胰腺癌以及包括癌症、自身免疫病、感染性疾病、炎性疾病和心血管疾病在内的其它各种人类疾病中具有价值。抗体或抗体源性试剂的临床应用主要取决于其结合特殊疾病相关性特异性靶抗原的能力。选择性对于在人类疾病的检测和治疗阶段期间将例如以下的诊断剂或治疗剂传递到靶部位是有价值的同位素、药物、毒素、细胞因子、激素、激素类拮抗剂、酶、酶抑制剂、寡核苷酸、生长因子、寡核苷酸、放射性核素、血管生成抑制剂或金属，如果所述诊断剂或治疗剂对机体正常组织有毒性的情况下特别重要。放射性标记抗体在包括卵巢癌、结肠癌和淋巴瘤在内的许多恶性肿瘤中的应用已取得了一定的成功。该项技术也证明可用于胰腺癌。然而，除抗CEA抗体和B72.3的应用之外，几乎没有其它的现有临床资料。该抗体系统的潜在限制在Goldenberg，The American Journal ofMedicine，94298-299(1993)中有讨论。检测和治疗技术的重要参数是存在靶细胞的部位的具体位置的注射剂量以及摄取率即具体结合抗体的浓度与周围正常组织内存在的放射性浓度之比。当将抗体注射到血流中时，它通过许多区室，进行代谢和排泄。当通过机体的其余部位时，所述抗体必须能够定位并结合靶细胞抗原。控制抗原靶向的因素包括位置、大小、抗原密度、抗原可及性、病理组织的细胞组成和靶向抗体的药代动力学。通过抗体具体影响肿瘤靶向的其它因素包括靶抗原的表达(肿瘤内和其它组织内)和由于放射性标记抗体的较慢血-清除率引起的骨髓毒性。中靶的肿瘤细胞所累积的靶向抗体量受血管形成的影响和抗体穿透肿瘤的屏障以及肿瘤内压力的影响。肝、肾或骨髓等非靶器官的非特异性摄取是该项技术、尤其是放射免疫疗法的另一潜在的限制，其中骨髓的照射常常引起剂量-限制毒性。用于将药剂传递到靶部位的一个推荐方法，称之为直接靶向，是设计用携带诊断性或治疗性放射性同位素的抗体靶向特异性抗原的技术。就肿瘤而论，直接靶向方法利用通过其抗原识别靶肿瘤的放射性标记抗肿瘤单特异性抗体。该项技术包括将标记单特异性抗体注射到患者体内，让所述抗体定位在靶肿瘤，从而获得诊断或治疗益处。未结合的抗体被机体清除。该方法可用于诊断或治疗其它的哺乳动物疾病。另一推荐方法，称之为“亲和力增强系统(Affnity EnhancementSystem)(AES)”，是一项特别设计用以克服携带诊断性或治疗性放射性同位素的抗体靶向肿瘤的缺陷的技术。AES利用既识别靶肿瘤又识别放射性半抗原的放射性标记二价半抗原和抗肿瘤/抗半抗原双特异性抗体。具有较高价数的半抗原和具有较高特异性的抗体也可用于该方法中。该项技术包括将所述抗体注射到患者体内，让其定位在靶肿瘤。在未结合抗体从血流中清除足够时间后，给予放射性标记半抗原。半抗原与位于靶细胞部位的抗体-抗原复合物结合，从而获得诊断或治疗益处，同时未结合半抗原快速从机体内清除。Barbet提及二价半抗原可与双特异性抗体交联的可能性(如果后者也结合到肿瘤表面的话)。结果，放射性标记复合物更稳定并且在肿瘤上停留时间更长。该系统可用于诊断或治疗哺乳动物疾病。本领域仍然需要产生可用于直接靶向系统的多价单特异性抗体以及产生可用于亲和力增强系统的多价多特异性抗体。准确地讲，仍然需要作为胰腺癌的有效诊断工具并表现出增强摄取中靶抗原、血浓度降低以及保护正常组织和细胞抵抗毒性药物的抗体。专利技术概述本专利技术考虑结合位于MUC1的氨基末端和重复结构域起始位点之间的结构域的抗体、融合蛋白及其片段。在一个优选的实施方案中，所述抗体、融合蛋白或其片段是PAM4抗体。本专利技术的PAM4抗体、融合蛋白或其片段是通过用粘蛋白免疫和/或选择而获得的，并且最好对胰腺癌粘蛋白有反应性。因此，本专利技术的PAM4抗体、融合蛋白及其片段最好结合胰腺癌细胞相关性抗原。在一个优选的实施方案中，所述PAM4抗体或其片段是人源化PAM4抗体或全人PAM4抗体或其片段，或者所述PAM4融合蛋白包含人源化PAM4抗体或全人PAM4抗体或其片段。还优选所述PAM4抗体、融合蛋白及其片段可以与至少一种治疗剂和/或诊断剂缀合。本文中考虑的是人源化PAM4抗体或其片段，所述人源化PAM4抗体或其片段包含鼠PAM4单克隆抗体的互补性决定区(CDR)和人抗体轻链可变区和重链可变区的构架(FR)区以及人本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人源化抗体或其片段，所述人源化抗体或其片段结合位于ＭＵＣ１的氨基末端和重复结构域起始位点之间的结构域，其中所述抗体通过用粘蛋白免疫和／或选择而获得。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：DM戈登伯格，H汉森，Z屈，
申请(专利权)人：免疫医疗公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]