SlmiR319b在调控番茄株型中的应用及重组质粒、重组菌、转基因株系制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种SlmiR319b在调控番茄株型中的应用及重组质粒、重组菌、转基因株系。所述SlmiR319b序列如SEQ ID NO.1所示。将SlmiR319b序列经限制性内切酶XbaI和SmaI双酶切，连接至pCAMBIA3301载体中，得到重组质粒pCAMBIA3301/Luc‑preSlmiR319b。本发明专利技术通过人工合成番茄miR319b的前体序列SlmiR319b并构建过表达转基因材料，过表达miR319b，揭示了miR319b在番茄植株高度以及根系发育状态的调控作用，该SlmiR319b序列还可以在调控番茄果实产量中得到应用，为解决番茄等果菜类蔬菜的株型和果实品质提供一条有效途径。

【技术实现步骤摘要】
SlmiR319b在调控番茄株型中的应用及重组质粒、重组菌、转基因株系
本专利技术属于生物
，具体涉及一种SlmiR319b在调控番茄株型中的应用及重组质粒、重组菌、转基因株系。
技术介绍
株型是作物增产的一个重要因素，番茄作为喜光蔬菜，也是研究果实发育的重要模式作物，所以株型对番茄生产的影响尤为重要。株型作为植物的形态特征，主要包含植株的高度、叶片大小、叶夹角、扩展幅度等植物学性状。目前株型研究集中在小麦和水稻等大田作物上。理想株型的研究最早在水稻上开展。日本栽培雪茄的松岛省三最早提出水稻的理想株型具备矮杆、短穗、多穗、叶片短厚等具体的形态指标。株型育种已经成为育种学家和栽培学家重点关注的课题。除水稻理想株型的研究，玉米株型也受到越来越多的关注。但是蔬菜作物的株型研究很少，番茄株型方面的研究更少。佟友丽(佟友丽.番茄株型特性的研究[博士学位论文].沈阳农业大学，2001)筛选出在番茄中叶形差异较大的品系，并对其进行研究。结果表明，上举型番茄的叶形紧凑，更好地适应环境，同时果实产量也随之提高。番茄株型相关基因的研究主要集中在以下几个方面：SlGRAS转录因子可以调控番茄植株高度、叶片大小以及侧枝数(NaeemM.,WaseemM.,ZhuZ.G.,ZhangL.C.(2020)DownregulationofSlGRAS15manipulatesplantarchitectureintomato(Solanumlycopersicum).DevelopmentGenesandEvolution230:1-12.)；SlCAND1沉默后也会导致矮化番茄植株，缺少顶端优势以及异常的根构型(ChengW.J.,YinS.Q.,TuY.,MeiH.,WangY.Z.,YangY.W.(2020)SlCAND1,encodingcullin-associatedNedd8-dissociatedprotein1,regulatesplantheight,floweringtime,seedgermination,androotarchitectureintomato.PlantMolecularBiology102:537-551.)；SlYABBY2b可以通过赤霉素路径调控番茄植株高度(SunM.H.,LiH.,LiY.B.,XiangH.Z.,LiuY.D.,HeY.,QiM.F.,LiT.L.(2020)TomatoYABBY2bcontrolsplantheightthroughregulatingindole-3-aceticacid-amidosynthestase(GH3.8)expression.PlantScience297:110530.)。miRNA319是20个保守的miRNA家族之一，且主要靶向TCP转录因子。miR319家族是发现较早的一类高度保守的microRNA家族。miR319与植物叶、花器官的生长发育密切相关。TCP转录因子是miR319的靶基因。miR319直接定量调控TCP4调控拟南芥叶片的大小。miR319靶基因的功能主要是TCP转录因子。miR319通过调控TCPs的表达影响下胚轴的发育。水稻中miR319bc过表达可以增加叶片宽度和增强耐冷性。miR319还可以控制植物对干旱和盐胁迫的反应。虽然miR319在调控拟南芥叶片大小和水稻叶片大小等方面具有应用效果，但是，现有技术并未发现miRNA319序列或者其相似序列在调控植株高度、根构型方面的应用。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种SlmiR319b在调控番茄株型中的应用及重组质粒、重组菌、转基因株系。本专利技术的第一个目的是提供一种SlmiR319b在调控番茄株型中的应用，所述SlmiR319b的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术的第二个目的是提供一种含有所述的SlmiR319b核苷酸序列的重组质粒。本专利技术的第三个目的是提供一种所述的重组质粒的构建方法，包括：人工合成SlmiR319b核苷酸序列；将SlmiR319b序列经限制性内切酶XbaI和SmaI双酶切，连接至pCAMBIA3301载体中，得到重组质粒pCAMBIA3301/Luc-preSlmiR319b。本专利技术的第四个目的是提供一种包含所述的重组质粒的农杆菌。本专利技术的第五个目的是提供一种包含所述的重组质粒的转基因番茄株系。本专利技术的第六个目的是提供一种所述的转基因番茄株系的构建方法，包括以下步骤：以重组质粒pCAMBIA3301/Luc-preSlmiR319b转化农杆菌，获得转化菌菌液；以野生型栽培番茄作为遗传转化材料，取饱满完整的种子，利用所述农杆菌菌液进行遗传转化，并培养获得转化植株；从番茄植株叶片中提取基因组DNA，以miR319b-F/miR319b-R为引物进行PCR鉴定；miR319b-F:TCTAGAATTTTGTGATTTAGATGTAATGTGGmiR319b-R:CCCGGGCTTCCACATTACATCTAAATCACA以转化植株为检测对象，以重组质粒pCAMBIA3301/Luc-preSlmiR319b为阳性对照，以未转化的野生型JZ34为阴性对照；若检测对象的扩增结果与阳性对照一致，则该检测对象为阳性转化植株；对上述筛选出阳性转化植株进行TCP10表达水平检测，以野生型JZ34的TCP10表达量为对照，TCP10的表达水平低于野生型JZ34的为目的转基因番茄株系。与现有技术相比，本专利技术提供的SlmiR319b在调控番茄株型中的应用及重组质粒、重组菌、转基因株系，具有以下有益效果：1、本专利技术通过人工合成番茄miR319b前体序列并构建过表达转基因材料，过表达miR319b，揭示了miR319b在番茄植株高度以及根系发育状态的调控作用。进而该SlmiR319b还可以在调控番茄果实产量中得到应用，为解决番茄等果菜类蔬菜的株型和果实品质提供一条有效途径。对番茄高产株型的分子机制研究以及高产品种选育具有重要的理论及实际指导意义。附图说明图1为pCAMBIA3301/Luc过表达载体转化入大肠杆菌的菌液PCR产物凝胶电泳图；图中M泳道为DL2000DNAmarker；1-5泳道均为miR319b目的片段；图2为构建转基因植株构建流程图；图中a，无菌苗；b，共培养；c，培养皿生芽；d，组培瓶生芽；e，生根；f，移栽；图3为转基因植株的PCR检测图；图中M泳道为DL2000DNAmarker；质粒泳道为阳性对照，WT泳道为阴性对照，1-10泳道均为转基因株；图4为过表达miR319b番茄转基因株系miR319b表达量分析；图中L1-10、L12、L14、L16-17：过表达株系；每组数据为三次重复平均值，#表示JZ34对照，*代表与JZ34差异显著性p＜0.05，**代表与JZ34差异显著性p＜0.01；注：L3的miR319本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种SlmiR319b在调控番茄株型中的应用，其特征在于，所述SlmiR319b的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种SlmiR319b在调控番茄株型中的应用，其特征在于，所述SlmiR319b的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.一种含有权利要求1所述的SlmiR319b核苷酸序列的重组质粒。


3.根据权利要求2所述的重组质粒的构建方法，其特征在于，包括：人工合成SlmiR319b核苷酸序列；将SlmiR319b核苷酸序列经限制性内切酶XbaI和SmaI双酶切，连接至pCAMBIA3301载体中，得到重组质粒pCAMBIA3301/Luc-preSlmiR319b。


4.一种包含权利要求2所述的重组质粒的农杆菌。


5.一种包含权利要求2所述的重组质粒的转基因番茄株系。


6.根据权利要求5所述的转基因番茄株系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
以重组质粒pCAMBIA3301/Luc-p...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘欣，姜晶，李天来，程欣，张洪辉，
申请(专利权)人：沈阳农业大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21