特异于类浆细胞树突状细胞的抗体制造技术

本发明专利技术提供能够结合类浆细胞树突状细胞（ｐＤＣ）的免疫学试剂（抗体），表达这种抗体的细胞系以及利用这种抗体从包含ｐＤＣ的组织鉴定和纯化类浆细胞树突状细胞的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术提供能够结合类浆细胞树突状细胞(plasmacytoid dendrticcells，pDC)的免疫学试剂(抗体)，表达这种抗体的细胞系以及利用这种抗体从包含pDC的组织鉴定和纯化类浆细胞树突状细胞的方法。
技术介绍
树突状细胞(DC)是引发T细胞依赖的免疫应答的抗原呈递细胞(APC)(Steinman，1991，Ann.Rev.Immunol.9271-296)。在人类中，类浆细胞DC(pDC)是DC亚型，其特征在于它们的超微结构类似于分泌Ig的浆细胞(Grouard等人，1997，J.Exp.Med.185(6)1101-1111)，它们独特的表面表型(CD4+IL-3R++CD45RA+HLA-DR+)(Grouard等人，1997，J.Exp.Med.185(6)1101-1111；Facchetti等人，1999，Histopathology 35(1)88-9；Res等人，1999，Blood 94(8)2647-57)，以及它们应答病毒或包含特定CpG基序的寡脱氧核苷酸(ODN)刺激而产生高水平IFNα的能力(Siegal等人，1999，Science 284(5421)1835-7；Kadowaki等人，2001，J Immunol 166(4)2291-5)以及体外有效诱导遭遇病毒后幼稚T细胞的启动(priming)和Th-1极化(Cella等人，2000，Nat Immunol 1(4)305-10；Kadowaki等人，2000，J Exp Med192(2)219-26)。据认为pDC起源于T细胞和B细胞的共同前体(Grouard等人，1997，J.Exp.Med.185，61101-1111；Res等人，1999.Blood 94，82647-57；Res等人，1999，Blood 94(8)2647-57；Bruno等人，1997，J.Exp.Med.185875-884；Bendriss-Vermare等人，2001，JCI 107835；Spits等人，2000，J.Exp.Med.192(12)1775-84)。在小鼠中，最近已经有几个小组将pDC鉴定为CD11clowB220hiGr1low细胞，其能够应答病毒刺激而产生I型的IFN，平且显示出类浆细胞形态学(Nakano等人，2001，J.Exp Med，194(8)1171-8；Paturel等人，2001，Nat Immunol.2(12)1144-1150；Bjorck，2001，Blood 98(13)3520-6)。也可通过在存在FLT3L时，使骨髓细胞分化成为树突状细胞而在体外大量地获得小鼠pDC。除其形态学、其IFNα产生及其假定的起源外，pDC在其弱的吞噬活性(Grouard等人，1997，J.Exp.Med.185，61101-1111)、其弱的IL-12生产能力(Rissoan等人，1999，Science 2831183-1186)，和诱导其活化的信号(Kadowaki等人，2001，J.Immunol 166(4)2291-5)方面与骨髓的DC有所不同。虽然活化pDC的募集将通过幼稚T细胞活化而引发免疫性，然而已经报道不成熟的或失活的DC可能通过诱导调节T细胞而诱导免疫耐受性(Jonuleit等人，2001，Trends Immunol.22394；Bell等人，2001，Trends Immunol 2211，Ronearolo等人，2001，JEM 193F5；Jonuleit等人，2000，JEM 1621213)。此外，已经显示pDC诱导分泌IL-10的T细胞(Rissoan等人，1999，Science 2831183；Liu等人，2001，Nature Immunol 2585)和CD8调节T细胞(Gilliet等人，2002，J.ExpMed.195(6)695-704)。也已经显示人天然产生IFN的细胞(HuIPC)在活化自然杀伤(NK)细胞以杀死受病毒感染的细胞中起重要作用(Bandyopadhyay等人，1986，J.Exp Med 164(1)180-95)。此外，最近pDC已经与自身免疫疾病，特别是红斑狼疮相关(Farkas等人，2001，Am.J.Pathol.159(1)237-43)。I型干扰素(IFN-α、β或ω)在寄主对病毒或微生物感染的抗性中发挥中心作用(Pfeffer等人，1998，Cancer Res 58(12)2489-99；van denBroek等人，1995，Immunol Rev 69(8)4792-6)。最近已经在MCMV和VSV感染模型中体内证明了pDC在病毒感染中的重要作用(Dalod等人，2002，J Exp Med 195(4)517-28；Barchet等人，2002，J Exp Med195(4)507-16)。实际上，当缺乏小鼠pDC时，在感染MCMV的小鼠中IFNα的水平显著降低。在该研究中，用于排空pDC的抗-Gr1处理可能除排空嗜中性粒细胞外，也可能减少部分巨噬细胞和活化T细胞。然而，因为所有这些细胞不在体外产生IFN-α，并且T或B淋巴细胞不是体内产生IFN-α所需要的，这些数据证明要么MIPC是能够应答MCMV感染而体内产生I型IFN的唯一细胞，要么I型IFN的初期产量是为从其他细胞类型引发IFN级联生成所必需的(Dalod等人，2002，J Exp Med195(4)p.517-28)。在人类中，已经显示静止的pDC特异表达BDCA-2和BDCA-4(Dzionek等人，2000，J.Immunol.165(11)6037-46)。在小鼠中，迄今为止还没有鉴定出这种特异的标记物。为了监测、表征和分离pDC，以及为了在动物模型中研究其体内功能，鉴定出特异于小鼠pDC的新标记物将是非常有用的。专利技术概述本专利技术通过提供具有在2003年1月27日，以ATCC保藏号PTA-4957保藏的杂交瘤细胞系所产生的单克隆抗体的结合特性的结合化合物而填补了上述空白。在优选的实施方案中，该结合组合物是抗体或抗体片段。最优选地，该单克隆抗体是由杂交瘤ATCC No.PTA-4957产生的单克隆抗体120G8。本专利技术也提供保藏号为PTA-4957的杂交瘤细胞系。本专利技术进一步提供从含pDC的样品纯化pDC的方法，所述方法包括将所述的样品与120G8抗体接触，然后回收已经结合所述抗体的pDC。最后，本专利技术提供从含pDC的样品鉴定pDC的方法，包括将所述样品与120G8抗体接触以形成抗体/pDC复合物，以及检测所述抗体/pDC复合物的存在以鉴定pDC的步骤。专利技术详述本专利技术部分地基于在小鼠中发现的特异识别pDC的抗体。通过DC呈递抗原的T细胞应答特性取决于所涉及的DC亚群和呈递DC的成熟阶段(Steinman等人，2000，J.Exp.Med.191(3)411-6)。不考虑功能可塑性，MDC和pDC能够分别通过其分泌IL-12或不分泌IL-12的能力，使T细胞应答的类型向Th1或Th2应答极化(Rissoan等人，1999，Science 2831183-1186)。在应答病毒中伴随MDC活化B细胞(Dubois等人，1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种结合化合物，其具有由ＡＴＣＣ保藏号ＰＴＡ－４９５７保藏的杂交瘤细胞系产生的单克隆抗体的结合特性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：C帕图雷尔，G特林基里，JJ宾，
申请(专利权)人：先灵公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]