氨基酸的PAABS-F柱前衍生化方法技术

氨基酸的ＰＡＡＢＳ－Ｆ柱前衍生化方法，属于分析化学技术领域。将含有氨基酸的样品经过预处理后，加入ＰＡＡＢＳ－Ｆ和少量甲醇，混匀，在２５－４５℃条件下衍生化反应２０－４０分钟后，进样至高效毛细管电泳或高效液相色谱进行分离和检测，测得氨基酸的浓度。本发明专利技术具有衍生反应条件简单、温和，能同时衍生一级和二级氨基酸，过量试剂不需预先除去，干扰少，反应后可直接进样进行色谱分析等优良特性。此外它与氨基酸的衍生产物非常稳定，常温无需避光的条件下能放置７天。最佳衍生反应温度为３５℃，特别适合于生物样品的分析。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及化合物的柱前衍生化方法，属于分析化学

技术介绍
柱前衍生化是提高氨基酸检测灵敏度常用的方法，但目前已报道的氨基酸的衍生化方法都或多或少地存在一些问题。例如邻苯二甲醛(OPA)只能衍生伯氨基酸，且衍生产物不稳定；氯甲酸芴甲酯(FMOC)是衍生胺类化合物的常用试剂，但是它本身及水解产物均产生与衍生物类似的荧光，从而干扰分离；异硫氰酸苯酯(PITC)与氨基酸衍生后需要真空干燥以除去过量试剂，且PITC损耗色谱柱寿命；二甲氨基萘磺酰氯(Dansyl-Cl)衍生物对光敏感，且该试剂选择性差。对乙酰氨基苯磺酰氟(PAABS-F)以往主要用于有机合成，未见用于柱前衍生化的报道。因此，有必要开发新型衍生试剂用于氨基酸的柱前衍生，以提高氨基酸的分离检测能力。
技术实现思路
本专利技术的目的是要提供一种衍生反应条件简单、温和，能同时衍生一级和二级氨基酸，过量试剂不需预先除去，干扰少，反应后可直接进样进行色谱分析等优良特性氨基酸的PAABS-F柱前衍生化方法。本专利技术的目的是这样实现的，氨基酸的PAABS-F柱前衍生化方法，其特征是将含有氨基酸的样品经过预处理后，加入PAABS-F的乙醇溶液和少量甲醇，混匀，在25-45℃条件下衍生化反应20-40分钟后，进样至高效毛细管电泳或高效液相色谱进行分离和检测，测定氨基酸的浓度。所述的衍生化反应的最佳温度为30℃，最佳时间为30分钟。为了减少干扰，提高测得氨基酸浓度的准确性，所述的进样前先对待测溶液用0.22μm膜进行过滤。所述的少量甲醇为PAABS-F的乙醇溶液的1/200。本专利技术具有衍生反应条件简单、温和，能同时衍生一级和二级氨基酸，过量试剂不需预先除去，干扰少，反应后可直接进样进行色谱分析等优良特性。此外它与氨基酸的衍生产物非常稳定，常温无需避光的条件下能放置7天。最佳衍生反应温度为35℃，特别适合于生物样品的分析。附图说明图1是13种L-氨基酸柱前衍生化后的高效毛细管电泳图，1.Lys；2.Gln；3.Asn；4.Val；5.Ser；6.Met；7.Pro；8.Ala；9.Gly；10.Cys；11.PAABS-CH；12.Asp；13.Arg；14.His；图2是人血清中氨基酸的高效毛细管电泳图，1.Lys；2.Gln；3.Thr；4.Asn；5.Ile；6.Leu；7.Val；8.Ser；9.Met；10.Pro；11.Ala；12.Gly；13.Phe；14.Trp；15.Cys；16.PAABS-CH。具体实施例方式实施例1仪器与条件毛细管电泳仪，毛细管总长60cm，有效柱长50cm，内径50μm。13种氨基酸(生化试剂，国药集团)。SDS(生化试剂，AlfaAesar)。实施步骤定量移取每种氨基酸(0.05mmol/L)40μL至2mL的具塞磨口试管内，并加入PAABS-F的乙醇溶液(0.05mmol/L)200μL和1μL甲醇，混匀，塞紧后将其放入35℃恒温水浴中30min。进样前用0.22μm膜过滤。实施例2仪器与条件毛细管电泳仪，毛细管总长60cm，有效柱长50cm，内径50μm。13种氨基酸(生化试剂，国药集团)。SDS(生化试剂，AlfaAesar)。实验步骤取预处理好的血清样品0.8mL，并加入PAABS-F的乙醇溶液(0.05mmol/L)200μL和1μL甲醇，混匀，塞紧后将其放入35℃恒温水浴中30min。进样前用0.22μm膜过滤。权利要求1.一种氨基酸的PAABS-F柱前衍生化方法，其特征是将含有氨基酸的样品经过预处理后，加入PAABS-F的乙醇溶液和少量甲醇，混匀，在25-45℃条件下衍生化反应20-40分钟后，进样至高效毛细管电泳或高效液相色谱进行分离和检测，测得氨基酸的浓度。2.根据权利要求1所述的氨基酸的PAABS-F柱前衍生化方法，其特征是所述的衍生化反应的最佳温度为30℃，最佳时间为30分钟。3.根据权利要求1所述的氨基酸的PAABS-F柱前衍生化方法，其特征是所述的进样前先对待测溶液用0.22μm膜进行过滤。4.根据权利要求1所述的氨基酸的PAABS-F柱前衍生化方法，其特征是所述的少量甲醇为PAABS-F的乙醇溶液的1/200。全文摘要氨基酸的PAABS－F柱前衍生化方法，属于分析化学
将含有氨基酸的样品经过预处理后，加入PAABS－F和少量甲醇，混匀，在25－45℃条件下衍生化反应20－40分钟后，进样至高效毛细管电泳或高效液相色谱进行分离和检测，测得氨基酸的浓度。本专利技术具有衍生反应条件简单、温和，能同时衍生一级和二级氨基酸，过量试剂不需预先除去，干扰少，反应后可直接进样进行色谱分析等优良特性。此外它与氨基酸的衍生产物非常稳定，常温无需避光的条件下能放置7天。最佳衍生反应温度为35℃，特别适合于生物样品的分析。文档编号G01N30/02GK1825113SQ20061003907公开日2006年8月30日 申请日期2006年3月21日 优先权日2006年3月21日专利技术者瞿其曙, 汤晓庆, 胡效亚, 刘尹, 陆晓 申请人:扬州大学 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种氨基酸的ＰＡＡＢＳ－Ｆ柱前衍生化方法，其特征是将含有氨基酸的样品经过预处理后，加入ＰＡＡＢＳ－Ｆ的乙醇溶液和少量甲醇，混匀，在２５－４５℃条件下衍生化反应２０－４０分钟后，进样至高效毛细管电泳或高效液相色谱进行分离和检测，测得氨基酸的浓度。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：瞿其曙，汤晓庆，胡效亚，刘尹，陆晓，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]