使用生物传感器的测定方法技术

提供一种通过在同一生物传感器中进行生理活性物质在生物传感器基板上的固定量的测定和该生物活性物质的生物学活性的测定，来分析相对于维持活性的生理活性物质的相互作用的方法。该测定方法的特征在于在使用生物传感器基板的测定方法中，生理活性物质在基板上的固定量的测定和在该基板上固定的生物活性物质的生物学活性的测定在同一生物传感器基板上进行。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及。更详细的，本专利技术涉及在同一生物传感器上进行生理活性物质对生物传感器基板的固定量的测定和该生理活性物质的生物学活性的测定。
技术介绍
现在在临床检查等中大多利用免疫反应等分子间相互作用来进行测定，但是因为采用现有的方法必须复杂的操作和标记物质，要求使用不需要标记物质、可以高敏感度地检测测定物质的结合量变化的几个技术。例如有表面等离子体激元共振(SPR)测定技术、晶体振荡器微量天平(QCM)测定技术、使用从金的胶体颗粒到超微颗粒的功能化表面的测定技术。SPR测定技术是通过测定反射光波长的峰位移和一定波长的反射光量的变化来求出和芯片金属膜接触的有机功能膜附近的折射率变化，由此检测在表面附近引起的吸附或脱附的方法。QCM测定技术是根据晶体振荡器的金电极(装置)上的物质的吸脱附引起的发射器的频率变化，可以检测ng水平上的吸脱附质量的技术。并且，通过将金超微细颗粒(nm水平)表面功能化，在其上固定生理活性物质，进行生理活性物质间的特殊认识反应，可以检测从金微细颗粒的沉淀、排列产生的生物体关联物质。对于表面等离子体共振(SPR)分析中一般使用的测定芯片是由透明基板(例如玻璃)、蒸镀的金属膜和具有能在其上固定生理活性物质的官能团薄膜制得，在引入该官能团的金属表面上固定生理活性物质。通过测定该生理活性物质和检测体物质间的特殊结合反应来分析生物体分子间的相互作用。作为具有可以固定生理活性物质的官能团的薄膜使用具有和金属结合的官能团、链长的原子数为10个以上的连接剂和能和生理活性物质结合的官能团的化合物，有报导说用于固定生理活性物质的测定芯片上(参加专利文献1)。并且，有报导公开了由金属膜、在该金属膜上形成的等离子体聚合膜制得的测定芯片(参加专利文献2)。由上所述，在现有的表面等离子体激元共振(SPR)测定中，可以进行与在测定芯片上固定的生理活性物质相互作用的物质的检测或测定，但是因为没有进行固定在测定芯片上的该生理活性物质的生物学活性的测定，不一定能在维持本来要观察的活性的状态下进行对生理活性物质的相互作用的测定。第2815120号专利特开平9-264843号
技术实现思路
专利技术要解决的问题本专利技术是要消除上述现有技术问题的解决课题。即，本专利技术通过在同一生物传感器上进行生理活性物质在生物传感器基板上的固定量测定和该生理活性物质的生物学活性的测定，提供一种分析对保持活性的生理活性物质的相互作用的方法作为要解决的课题。解决课题的手段本专利技术人为了解决上述课题进行了反复的研究，结果发现通过在同一生物传感器上进行生理活性物质在生物传感器基板上的固定量测定和该生理活性物质的生物学活性的测定，可以解决上述课题，从而完成本专利技术。即，根据本专利技术，可以提供一种测定方法，其特征在于在中，可以在同一生物传感器基板上进行生理活性物质在上的固定量测定和在该基板上固定的生理活性物质的生物学活性的测定。优选生理活性物质是蛋白质。更优选生理活性物质是酶。优选通过表面等离子体激元共振分析来测定生理活性物质在基板上的固定量。优选所述表面等离子体激元共振分析是通过生物传感器用于表面等离子体激元共振测定装置，该装置包含电介质块、在该电介质块一侧形成的金属膜、产生的光束的光源和允许光线进入上述电介质块使在该电介质块和金属膜界面获得全反射状态和各种不同入射角度的成分而入射的光学系统，以及测定在所述界面全反射光束强度来检测表面等离子体激元共振状态的检测装置；其中，所述的生物传感器是由上述的电介质块和金属膜构成，所述的上述电介质块包含上述光束的入射面、出射面和上述金属膜被形成的一面的全部作为一块被形成，在该电介质块上金属膜被一体化。优选通过光谱测定来进行对生理活性物质的生物学活性测定。本专利技术的测定方法优选包括(1)根据在同一生物传感器基板中测定的生理活性物质在基板上的固定量和在该基板上固定的生理活性物质的生物学活性值确认下式1表示的固定的每单位量的生理活性物质的生物学活性值的步骤；式1每单位量固定的生理活性物质的生物学活性值＝(在基板上固定的生理活性物质的生物学的活性值)/(生理活性物质在基板上的固定量) (2)使用通过上述步骤(1)中确认的固定方法固定了生理活性物质的基板，检测或测定生理活性物质和被检物质的相互作用的步骤。本专利技术的测定方法优选包括(1)根据在同一生物传感器基板中测定的生理活性物质在基板上的固定量和在该基板上固定的生理活性物质的生物学活性值，以下式1表示的固定的每单位量生理活性物质的生物学活性值为指标，使生理活性物质在该生物传感器基板上以最合适的方法固定的步骤；式1每单位量固定的生理活性物质的生物学活性值＝(在基板上固定的生理活性物质的生物学的活性值)/(生理活性物质在基板上的固定量)(2)使用通过上述步骤(1)中最合适的固定方法固定了生理活性物质的基板，检测或测定生理活性物质和被检物质的相互作用的步骤。优选在同一生物传感器基板上进行步骤(1)中的测定在基板上的生理活性物质的固定化量和在该基板上固定的生理活性物质的生物学活性值和步骤(2)中的检测或测定生理活性物质和被检物质的相互作用。专利技术效果根据本专利技术的测定方法，可以测定要测定的蛋白质的固定量和生物学活性。而且，通过进行维持由本测定方法决定的活性的固定化蛋白质和化合物的相互作用的测定，可以确实地分析对蛋白质起相互作用的化合物。实施专利技术的最佳形态以下说明本专利技术的实施形态。本专利技术的方法特征在于在使用在基板上固定了生理活性物质的生物传感器的测定方法中，在上述同一生物传感器中进行该生理活性物质的固定量和该生理活性物质的生物学活性的测定。本专利技术中，因为通过在上述同一生物传感器中进行生理活性物质的固定量和该生理活性物质的生物学活性的测定，可以在测定该生理活性物质和被检测物质的相互作用前固定最理想状态下的该生理活性物质，因此可以确实地进行该生理活性物质和被检测物质的相互作用。本专利技术中所称的生物传感器是指最广义解释的将生物体分子间的相互作用转换成电信号等信号，测定、检出作为对象的物质的传感器。通常的生物传感器由辨认作为检测对象的化学物质的接受部位、将这里发生的物理变化或化学变化转换成电信号的传感器部位构成。作为在生物体内相互有亲合性的物质有酶/基质、酶/辅酶、抗原/抗体、激素/受体等。生物传感器是利用通过将有亲合性的物质中的一方固定在基板上作为分子辨认物质，来选择性地测量对应的另一方的物质的原理。本专利技术中使用的生物传感器可以使用金属表面或金属膜作为基板。作为构成金属表面或金属膜的金属，例如在考虑用于表面等离子体激元共振生物传感器的情况下，只要是可以产生表面等离子体激元共振，没有特别限制。优选列举有金、银、铜、铝、铂等有自由电子的金属，特别优选金。这些金属可以单独使用，也可以结合使用。并且，考虑对上述基板的附着性，可以在基板和由金属制得的层之间设置铬等制得的插层。金属膜的膜厚是任意的，但是例如考虑用于表面等离子体激元共振生物传感器的情况下，优选0.1nm以上500nm以下，特别优选1nm以上200nm以下。超过500nm的话，不能充分检出介质表面的等离子体激元现象。并且在设置由铬等制得的插层的情况下，该插层的厚度优选为0.1nm以上10nm以下。金属膜的形成可以通过常规方法进行，例如可以通过溅镀本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种使用生物传感器基板的测定方法，其特征在于在该测定方法中对同一个生物传感器基板进行对生理活性物质的基板固定量的测定和对该基板上固定的生理活性物质的生物学活性的测定。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：江副利秀，来马浩二，
申请(专利权)人：富士胶片株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]