用于检测PSA的可活化游离形式的方法及其用于诊断前列腺的良性病理学和前列腺的腺癌的技术

本发明专利技术涉及用于体外诊断前列腺的良性病理学或前列腺的腺癌的方法，所述的方法的特征在于其包括在来自怀疑患有前列腺良性病理学或患有前列腺腺癌的患者的生物样品中检测ＰＳＡ的可活化游离形式的步骤。这种诊断方法可以通过以下步骤实施：ｉ）让能特异性结合至可活化游离ＰＳＡ的结合配偶体与来自怀疑患有前列腺良性病理学或前列腺腺癌的患者的生物样品接触；ｉｉ）证明所述的结合配偶体捕获了ＰＳＡ的可活化游离形式；ｉｉｉ）计算在步骤ｉｉ）中检测的ＰＳＡ的可活化游离形式的量与在取自相同受试者的相同本质的样品中存在的除了可活化游离形式之外的其他ＰＳＡ形式的量的比率；和ｉｖ）通过将在步骤ｉｉｉ）中测定的比率值与预定阈值比较来确定患者是否患有前列腺腺癌或患有前列腺良性病理学，其中所述的阈值是根据所使用比率的类型而选择的并代表了每种病理学的检测界限。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及前列腺腺癌的诊断。具体来说，本专利技术涉及用于在怀疑患有这些病理学的患者中诊断前列腺的良性病理学或前列腺的腺癌的方法，该方法使用能识别特别是处于其可活化游离形式的前列腺特异性抗原(或PSA)的结合配偶体。PSA由人前列腺的腺上皮产生，可能处于非活性酶原形式(Lundwall等，FEBS Lett.1987)，并以其活性形式分泌进精液中(Lilja，J.Clin Invest 1985)。精液中的PSA的生物活性牵涉其限制性蛋白水解断裂由精囊分泌的主要蛋白(Lilja，J.Clin Invest1985；Lilja等，J.Clin Invest 1987；Mc Gee等，Biol.reprod.1988)。PSA是前列腺癌的主要标记，在西方，六个男性中有一个将在一生中受到PSA的影响。这种主要由前列腺上皮分泌的激肽释放酶家族的蛋白酶在患者精液中的浓度为0.5-5mg/ml，而血清中其浓度要低一百万倍。因而，一般发现PSA在血清中浓度为低于2.5ng/ml。然而，当有前列腺癌和当有良性改变如良性前列腺增生(BPH)或急性前列腺炎时，该浓度原则上显著增加。PSA的蛋白序列已经测定。其为含有237个氨基酸的糖蛋白(“Molecular cloning of human prostate specific antigen cDNA”.Lundwall A.，Lilja H.，1987.FEBS Lett 214317-322)。已经提出了一种诊断方法，包括测量血清PSA浓度并将其于阈值比较，阈值是4ng/ml。然而，已经注意到，这种诊断方法导致四分之三的患者受到错误的怀疑，这是不利的。而且，这种方法使得不可能诊断30-40％的局限于腺体的癌症病例，而局限于腺体的癌症属于潜在可治愈的疾病早期阶段，因而特别期望能诊断该阶段。此外，由文章“Prostate Cancer Detection in Men With Serum PSAConcentrations of 2.6 to 4.0ng/ml and Benign ProstateExamination″，Catalona等，JAMA，14 May 1997-Vol.277，No.18报告的研究证实了这种方法相对令人不满意的特征，该研究显示，对于早期发现前列腺癌，阈值必须低于4ng/ml。此外，已经表明，在血清中，PSA与蛋白酶抑制剂，例如α-1-抗胰凝乳蛋白酶(ACT)和α-2-巨球蛋白(A2M)结合。这种结合导致PSA的胰凝乳蛋白酶活性的失活，如文章″Enzymatic activity ofprostate specific antigen and its reactions with ultracellularserine proteinase inhibitors″A.Christensson，C.B.Laurell，H.Lilja，1990 Eur.J.Biochem 194755-763中所证明的。这也使得能够证明血清中存在的PSA为游离形式即非结合形式，或为复合形式即结合形式。也因此提出了使用游离PSA与总PSA的比率来提高诊断的特异性。因此，专利申请WO 97/12245描述了用于诊断前列腺的腺癌而不需活组织检查的方法。该方法包括在患者的血清或血液中测量PSA的总量。如果该值在2.5和2.5ng/ml之间，也测量游离PSA的浓度。然后计算游离PSA与总的PSA的比率。如果该比率小于7％，诊断结果就倾向于前列腺的腺癌。然而，将阈值7％用于诊断前列腺癌受到许多作者的质疑，如出版物，Lein等“Relation of free PSA/total PSA in serum fordifferentiating between patients with prostatic cancer andbenign prostate hyperplasiawhich cutoff should be used？”所显示的。在这篇在期刊Cancer Investigation，16(1)，45-49，1998中出版的文献中，据证实，通过该比率难以系统地区分前列腺癌和BPH。因为这些原因，在专利申请WO 00/02052中，申请人的兴趣在于血清中游离形式PSA中的裂解(cleaved)形式PSA的存在。患有癌症或BPH的患者中血清PSA的分子形式已经通过二维电泳，并结合化学发光检测进行了作图，以便观测全部PSA形式，即游离形式，其中包括裂解形式，和复合形式。患有前列腺腺癌的受试者的血清的电泳图谱是相对同质的，基本显示出非裂解的游离形式的PSA，而患有BPH的受试者的血清含有相对高比例的裂解的游离形式和无裂解形式的稍微更碱性(basic)的点。因而可认为在患有BPH的患者中观察到的血清游离PSA/血清总PSA的比率的增加基本上与裂解的游离PSA的存在相关，所述裂解的游离PSA可以是无酶促活性的并因而不能结合至ACT，并且也可认为与比活性游离PSA形式稍微更碱性的游离PSA形式的存在相关，所述的稍微更碱性的游离PSA形式可能对应无活性的、酶原形式的PSA。依照这些观测，申请人已经描述了用于诊断前列腺腺癌的方法，包括在用二维电泳分离后定量裂解和/或非裂解的游离PSA并用这些值来进行诊断。然而，即使这些方法已经使得有可能改进诊断，但是它们需要用到二维电泳。因而，它们是相当昂贵的并需要大量操作时间。为了避免这些操作，专利申请WO 01/77180已经描述了新的特异性针对无活性游离PSA的抗体，及其在用于诊断前列腺的良性病理学或前列腺的腺癌的方法中的用途。申请人现在已经发现，在患者的生物样品中，在游离形式的PSA中，存在一种新形式的PSA，该PSA不是酶原形式(ProPSA)但也是可活化的，即其潜在地具有与蛋白酶抑制剂反应的能力，并且公开了利用检测这样的可活化PSA的游离形式使得能在患有前列腺良性病理学的受试者和患有前列腺腺癌的受试者之间做出区别性诊断，其具有良好的特异性和灵敏性。因此，本专利技术的一个目标是用于体外诊断前列腺的良性病理学或前列腺的腺癌的方法，该方法的特征在于其包括在来自怀疑患有前列腺良性病理学或患有前列腺腺癌的患者的生物样品中检测PSA的可活化游离形式的步骤。存在于患者的生物流体如精液或血清中的多种不同形式的PSA通常具有多个不同的名字，这取决于创始者。他们都同意认为，总PSA处于两种形式，即游离形式(游离PSA)和与蛋白酶抑制剂如ACT复合的形式(复合PSA)。游离PSA也可根据其大小命名当其以ProPSA的形式产生时，其具有额外的氨基酸(7或5或4或2个)。那么可称为酶原PSA或ProPSA-7、ProPSA-5等等。这种proPSA，在成熟并因而失去额外的氨基酸后，可以处于完整形式或处于部分形式。在后面的情况下，称为截短的或裂解的PSA。完整形式的游离PSA也可以变性(糖基化或去糖基化)；则称为变性形式。因此，游离形式的PSA包括酶原PSA、完整的PSA和裂解的PSA，完整的PSA可以是或不是变性的。对于这些PSA的不同的游离或复合形式，也可称为活性和无活性形式。术语“活性形式”用于表示能结合至蛋白酶抑制剂如ACT的形式。术语本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于体外诊断前列腺的良性病理学或前列腺的腺癌的方法，所述的方法的特征在于其包括在来自怀疑患有前列腺良性病理学或患有前列腺腺癌的患者的生物样品中检测ＰＳＡ的可活化游离形式的步骤。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：S巴瑟尔特米歇尔，C洛利夫雷雷诺，
申请(专利权)人：拜奥默里克斯公司，
类型：发明
国别省市：FR[]