过氧化物酶体增殖物激活受体α靶基因的使用方法技术

本发明专利技术的特征是鉴定出新的人过氧化物酶体增殖物激活受体α（ＰＰＡＲα）的靶基因及该新靶基因在治疗或监测代谢异常的治疗以及在鉴定用于治疗代谢异常的化合物中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于治疗或监控代谢异常的治疗方法和组合物。本专利技术也涉及用于鉴定代谢异常治疗用化合物的方法和组合物。具体地讲，本专利技术的方法包括Pa9、Pa13和Pa21三种PPARα靶基因的用途。
技术介绍
肥胖症、糖尿病、高血压和高脂血症等代谢异常，在大多数工业化社会中是一个重要的公共卫生问题。这类代谢异常使个体易患冠状动脉病、中风和其它心血管疾病。越来越多的数据表明，过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)在脂质代谢和葡萄糖代谢中起到关键作用并参与代谢障碍。PPAR是配体激活转录因子，隶属于核受体亚家族。激活PPAR与其它核受体即类视黄醇X受体形成异质二聚体，并改变靶基因的转录。激活PPAR与称为过氧化物酶体增殖物应答元件(PPRE，其位于靶基因启动子上)的特异性DNA序列结合，增加了转录起始率。迄今为止所鉴定的大多数PPRE都是由间隔一个核苷酸的典型AGGTCA序列的直接重复序列组成(Schoonjans等，1996，BiochimBiophys Acta，130293-109)。三种PPAR亚型已经表征为PPARα、PPARδ和PPARγ。在褐色脂肪组织、肝、心、肾和肌肉细胞中观察到较高水平的PPARα表达，在此它调节脂肪酸的分解代谢。PPARδ广泛表达，其功能现已阐明。PPARγ主要存在于脂肪组织、结肠和巨噬细胞中，并且参与脂肪细胞分化、脂质贮藏和葡萄糖平衡(Lee等，2003，出处同上)。PPAR的配体包括膳食脂肪酸以及用于治疗高脂血症或II型糖尿病的大量药物。例如，贝特类药物(fibrate)是一类降低血清甘油三酯的药物，是PPARα的合成激动剂。贝特类药物的实例包括但不限于吉非贝齐、苯扎贝特、非诺贝特、氯贝丁酯和新开发的微粉化非诺贝特。PPARα的其它合成激动剂包括但不限于GW2331、WY14643和L165041(Mukherjee等，2002，J Steroid Biochem Mol Biol.81(3)217-25)。噻唑烷二酮类(TZD)是一类胰岛素敏感药物，是高亲和性PPARγ激动剂。TZD的实例包括但不限于文迪雅(罗格列酮)和Resulin(曲格列酮)。某些PPARα激动剂(例如贝特类)的作用看来具有种属特异性(Vosper等，2002，Pharmacology & Therapeutics，9547-62)。在啮齿动物中给予贝特会诱导脂质平衡的关键性基因，例如HD(3-酰烯基CoA脱氢酶)基因、ACOX(脂酰CoA氧化酶)基因和ME(苹果酸酶(MalicEnzyme))基因(Castelein等，1994 J.Biolo.Chem.26926754-758)。这与PPARα-裸鼠的研究结果是一致的，表明PPARα在维持啮齿动物的肝、脂肪细胞和骨骼肌等葡萄糖代谢和脂质代谢的主要靶组织的β-氧化途径的组成型活性上起到关键性作用(Leone等，1999，Proc.Natl.Acsd.Sci.U.S.A.967473-7478)。在人和若干其它“非敏感”物种(例如豚鼠和狨猴(marmoset))中给予贝特类，所诱导的基因看来不如贝特类在啮齿动物中诱导的那么多(Stael等，1997，Current PharmaceuticalDesign 31-14)。在人肝细胞或几种其它“非敏感”物种的肝中，没有观察贝特类对过氧化物酶体脂肪酸氧化的调节。但是，这些“非敏感”动物确实对贝特类表现出有效的降脂反应。对PPARα所调节的新的人体基因进行鉴定，是理解贝特类在病人中的治疗机制的关键。新的PPARα靶基因对于贝特类和其它PPARα激动剂活性的临床监测来说具有价值。另外，新的PPARα靶基因将有助于快速鉴定和开发用于治疗代谢异常的新化合物。此外，新的PPARα靶基因还将有助于开发治疗代谢异常的新方法。专利技术概述目前已经发现，本文所说的基因Pa9、Pa13和Pa21是人过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)的靶基因。因此，就一般方面而言，本专利技术提供测定患者PPARα的生物活性的方法。该方法包括测定患者基因表达水平的步骤，所述基因选自人Pa9基因、Pa13基因和Pa21基因。就另一个一般方面而言，本专利技术提供评价患者代谢异常的治疗有效性的方法。该方法包括下述步骤a)测定治疗期间或治疗之后患者体内选自人Pa9基因、Pa13基因和Pa21基因的基因表达水平；和b)将步骤a)中测定的表达水平与治疗之前患者体内所述基因表达水平进行比较；其中，治疗期间或治疗之后患者体内所述基因表达水平增加，表明对患者代谢异常的治疗是有效的。本专利技术的特征也在于试剂盒，该试剂盒用于评价患者代谢异常的治疗有效性。试剂盒可包括核酸探针，该探针在严格性杂交条件下与选自以下的核酸分子杂交SEQ ID NO1、SEQ ID NO3和SEQID NO5或其互补序列。试剂盒也可包括抗体，该抗体与选自以下的多肽分子特异性结合SEQ ID NO2、SEQ ID NO4和SEQ ID NO6。试剂盒还可包括使用说明书，该说明书用于确定对患者代谢异常的治疗是否有效。就另一个一般方面而言，本专利技术提供用于治疗患者代谢异常的化合物的鉴定方法。该方法的一个实例包括下述步骤a)使PPARα-反应系统与包含缓冲剂和试验化合物的溶液接触；b)测定PPARα-反应系统受到人Pa9基因、Pa13基因或Pa21基因调节序列控制的基因表达水平；和c)将步骤(b)的结果与其中PPARα-反应系统仅与缓冲液接触的对照的结果进行比较。该方法的其它实例包括下述步骤a)使人Pa9基因、Pa13基因或Pa21基因所编码的多肽与包含缓冲剂和候选化合物或试验化合物的溶液接触；b)测定试验化合物对多肽活性的影响；和c)将步骤(b)的结果与其中多肽仅与缓冲液接触的对照进行比较。本专利技术的另一个一般方面涉及患者代谢异常的治疗方法。该方法包括给予患者治疗有效量的组合物的步骤，该组合物能改变患者细胞内人Pa9基因、Pa13基因或Pa21基因的基因表达模式或生物活性。就又一个基本方面而言，本专利技术提供PPARα-反应系统，该系统包含功能性PPARα蛋白和核酸分子，该核酸分子包含与人Pa9基因、Pa13基因或Pa21基因调节序列操作性连接的报道基因编码序列。本专利技术也包括分离的核酸分子，该核酸分子包含与人Pa9基因、Pa13基因或Pa21基因调节序列操作性连接的报道基因编码序列。就其它方面而言，根据以下公开内容(包括专利技术详述及其优选实施方案和所附权利要求书)，本专利技术的特征和优势将会是显而易见的。附图简述附图说明图1显示Pa9微阵列注释(annotation)序列(GenBank检索号W30988)与人FDRG基因序列(GenBank检索号AX278133)之间的DNA序列比对。图2显示Pa13微阵列注释序列(GenBank检索号N26311)与人TGF-β超家族蛋白质基因序列(GenBank检索号AB000584)之间的DNA序列比对。图3显示Pa21微阵列注释序列(GenBank检索号H49601)与人C20orf139基因序列(GenBank检索号NM_080725)之间的DNA序列比对。图4说明在SKMU细胞中，PPARα特异性siRNA降低PPARα基因表达水平。图本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定来自患者的生物样品中过氧化物酶体增殖物激活受体α（ＰＰＡＲα）活性的方法，该方法包括测定样品中选自人Ｐａ９基因、Ｐａ１３基因和Ｐａ２１基因的基因表达水平的步骤。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：L周，EV克赖恩，KT德马雷斯特，
申请(专利权)人：詹森药业有限公司，
类型：发明
国别省市：BE[比利时]