本发明专利技术公开了使用荧光偏振对具有结合高级糖化终产物受体（ＲＡＧＥ）和／或调节其活性的能力的化合物进行鉴定的方法和系统。使用本发明专利技术方法和系统鉴定的化合物可包括有机小分子ＲＡＧＥ拮抗剂。使用本发明专利技术方法和系统鉴定的有机小分子ＲＡＧＥ拮抗剂可用来治疗ＲＡＧＥ－介导的疾病，例如，包括但不限于糖尿病或阿尔茨海默病。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及使用荧光偏振的方法和系统来鉴定具有调节高级糖化终产物受体(RAGE)能力的化合物。
技术介绍
蛋白质或脂质与醛糖的温育导致了非酶促的蛋白质上氨基基团的糖化和氧化从而形成了阿马杜里加合物(Amadori adducts)。随着时间的流逝，该加合物历经了额外的重排，脱水，以及与其它蛋白质的交联从而形成了称为高级糖化终产物(AGEs)的复合物。那些促进AGEs形成的因素包括延迟的蛋白转换(例如，在淀粉样变(amyloidoses)中的情况)，具有较高赖氨酸含量的大分子的积累，以及较高的血糖水平(例如，在糖尿病中的情况)(Hori et al，J.Biol.Chem.27025752-761，(1995))。AGEs与多种失调相关，包括与糖尿病和自然老化相关的并发症。AGEs表现出与单核细胞，巨噬细胞，微脉管系统的内皮细胞，平滑肌细胞，mesengial细胞，和神经元的细胞表面受体具有特异性和饱和性结合。高级糖化终产物受体(RAGE)是细胞表面分子的一个免疫球蛋白超家族的成员。RAGE的细胞外结构域(N-末端)包括三个免疫球蛋白类型的区域一个V(可变)型结构域紧接两个C-型(恒定)结构域(Neeper et al，J.Biol.Chem.，26714998-15004(1992)；Schmidt et al，Circ.(Suppl.)96#194(1997))。单个跨膜结构域和较短的，高度荷电的细胞质溶质尾部紧随细胞外结构域。可通过RAGE的蛋白质水解或分子生物学方法分离N-末端的细胞外结构域，从而生成包括V结构域和C结构域的可溶性RAGE(sRAGE)。RAGE在大多数组织中都有表达，尤其是在胚胎形成过程中的皮质神经元中有发现(Hori et al.，J.Biol.Chem.，27025752-761(1995))。在衰老的组织(Schleicher et al，J.Clin.Invest，99(3)457-468(1997))，糖尿病患者的视网膜，脉管系统和肾脏中也发现有RAGE的水平有所升高(Schmidt et al，Nature Med.，11002-1004(1995))。在不同组织和器官中RAGE的活化产生了众多的病理生理性后果。RAGE与众多疾病有关，包括急性和慢性炎症(Hofmann et al.，Cell(Hofmann etal，Cell 97889-901(1999))，诸如血管通透性升高的糖尿病患者晚期并发症的发展(Wautier et al，J.Clin.Invest，97238-243(1995))，(Wautieret al，J.Clin.Invest，97238-243(1995)，肾病(Teillet et al，J.Am.Soc.Nephrol，111488-1497(2000))，动脉粥样硬化(Vlassara et al，TheFinnish Medical Society DUODECIM，Ann.Med.，28419-426(1996))，和视网膜病(Hammes et al，Diabetologia，42603-607(1999))。RAGE还与阿尔茨海默病(Yan et al，Nature，382685-691(1996))，Yan et al，Nature，382685-691(1996)，勃起功能障碍和肿瘤侵入和转移(Taguchi etal，Nature，405354-357(2000))相关。除了AGEs之外，还有其它的化合物可以结合于RAGE并对其进行调节。在正常发育过程中，RAGE与amphoterin相互作用，其是在培养的胚胎神经元中介导轴突生长出来的多肽(Hori et al，1995)。RAGE还表现出与羧甲基赖氨酸(CML)，类钙粒蛋白配体和β-淀粉样蛋白相互作用(Yan et al，Nature，389589-595，(1997)；Yan et al，Nature，382685-691(1996)；Yan et al，Proc.Natl.Acad.ScL，945296-5301(1997。已经显示，对于RAGE的结合配体，例如AGEs，s100b/钙粒蛋白，β-淀粉样蛋白，CML(Nε-羧甲基赖氨酸)，和amphoterin都可以对多种基因的表达进行修饰。例如，在许多细胞类型中，RAGE和其配体之间的相互作用产生了氧化胁迫，从而导致自由基敏感的转录因子NF-κB的活化，以及诸如细胞因子IL-1β，TNF-α等NF-κB调节基因的活化。此外，还发现那些包括p21ras，MAP激酶，ERK1和ERK2的若干其它调节途径可由AGEs和其他配体与RAGE的结合得到活化。实际上，RAGE本身的转录也至少由NF-κBκB部分调节的。因此，由配体结合启动的阳性反馈循环刺激了逐渐增加并且通常是有害的螺旋上升(spiral)。生理性配体与RAGE结合的拮抗可以是由过量浓度的AGEs和其他RAGE配体所引起的病理生理性变化下调的逻辑目的。通过降低内源配体对RAGE的结合，可以减轻与RAGE介导的疾病相关的症状。因此，亟需发现调节生理性配体与RAGE受体结合的化合物的方法。专利技术概述本专利技术的实施方案提供了使用了荧光偏振的方法和系统来鉴定具有调节高级糖化终产物受体(RAGE)能力的化合物。本专利技术可以包括发现能调节生理性配体与RAGE结合的化合物的分析方法与和/或系统。在一个实施方案中，本专利技术包括检测RAGE调节物的方法，包括提供(i)含有RAGE配体结合结构域的RAGE多肽，(ii)荧光RAGE配体，和(iii)目的化合物。所述方法可以还包括向所述RAGE多肽中加入所述目的化合物和荧光RAGE配体，并测定所述荧光RAGE配体的偏振。在另一个实施方案中，本专利技术包括检测RAGE调节物的系统。所述系统可以包括如下成分的单独包装的容器(a)荧光RAGE配体；(b)包括RAGE配体结合结构域的多肽；和(c)在目的化合物存在条件下用于稀释(a)和(b)的至少一种分析试剂，因此可以对所述荧光RAGE配体与含有RAGE配体结合结构域的多肽的结合进行定量。在一个实施方案中，所述系统可以还包括作为阳性对照的对RAGE配体结合结构域具有充分结合亲和性的未标记的RAGE配体。有众多的优点与本专利技术的特殊实施方案有关。例如，本专利技术的方法和系统可以测定生理性配体与RAGE的结合以及对这种结合的修饰。同样，本专利技术的方法和系统可以允许对所述目的化合物与RAGE的结合能力，或所述目的化合物对生理性配体与RAGE结合的调节能力进行定量。通过去除众多与传统结合分析相关的洗涤步骤，本专利技术的方法和系统可提供适于多种化合物的高通量，自动化筛选。因此，本专利技术的方法和系统可提供适于潜在RAGE调节物的快速分析。同样，因为所述方法和系统包括表现出高亲合性，可定量结合于RAGE的分析试剂，所以该分析可提供敏感和高度特异性的分析系统来检测具有结合于RAGE，和/或对其进行调节的潜在的化合物。同样，本专利技术的方法和系统可以提供一种安全和可靠的分析系统，其不会受到许多通常使用放射性标记试剂的系统安全和处置方面考虑的限制。所述分析使用的是对实验室人员或环境没有威胁的非放射性标记试剂。所述方法可本文档来自技高网...
【技术保护点】
检测ＲＡＧＥ调节物的方法，包括： （ａ）提供（ｉ）包括ＲＡＧＥ配体结合结构域的ＲＡＧＥ多肽，（ｉｉ）荧光ＲＡＧＥ配体，和（ｉｉｉ）目的化合物； （ｂ）向所述ＲＡＧＥ多肽中加入所述目的化合物和荧光ＲＡＧＥ配体；以及 （ｃ）测定所述荧光ＲＡＧＥ配体的偏振。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：阿德南MM米亚里，杰弗里C韦布斯特，
申请(专利权)人：特兰斯泰克制药公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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