急性呼吸窘迫综合征检测试剂盒制造技术

本发明专利技术属于急性呼吸窘迫综合征检测领域。本发明专利技术提供了检测血清中DR5蛋白的试剂在制备急性呼吸窘迫综合征检测试剂盒中的用途。本发明专利技术还提供了对应的急性呼吸窘迫综合征检测试剂盒。本发明专利技术可借助检测DR5蛋白DR5蛋白在血清中的含量，实现急性呼吸窘迫综合征的快速诊断，应用前景良好。

【技术实现步骤摘要】
急性呼吸窘迫综合征检测试剂盒
本专利技术属于急性呼吸窘迫综合征诊断领域。
技术介绍
急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是由肺内原因和/或肺外原因引起的，以顽固性低氧血症为显著特征的临床综合征，因高病死率而倍受关注。ARDS诊断现行的标准是柏林ARDS标准，该标准从起病时间、氧合指数、肺水肿来源和X线胸片共4个方面对ARDS进行诊断(具体可参考“唐朝霞，管向东，急性呼吸窘迫综合征诊断标准，中国实用内科杂志，2013年第33卷第11期”)，较为复杂和耗时。在医疗资源紧缺的今天，ARDS患者有时会因为医疗资源挤兑而得不到及时诊断，导致病情延误。因此，开发耗时更短的ARDS诊断工具具有十分重大的现实意义。TNF相关凋亡诱导配体的受体2，也称死亡受体5(DR5)，在UniProtKB数据库中编号为O14763，是细胞毒性配体TNFSF10/TRAIL的受体，负责招募Caspase-8并起始caspase介导的细胞凋亡。由于DR5与配体结合后可迅速诱导细胞凋亡，目前研究者们主要关注如何利用该原理，对肿瘤细胞进行特异性的杀灭。而DR5与癌症以外的肺病的关系，目前还未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种诊断ARDS的试剂盒。本专利技术的技术方案包括：检测血清中DR5蛋白含量的试剂在制备急性呼吸窘迫综合征检测试剂盒中的用途。如前述的用途，所述检测血清中DR5蛋白含量的试剂为酶联免疫吸附检测试剂。如前述的用途，所述检测血清中DR5蛋白含量的试剂为液相色谱方法用试剂或胶体金检测试剂。如前述的用途，所述检测血清中DR5蛋白含量的试剂为R&DSystemsLuminex液相芯片检测试剂。一种急性呼吸窘迫综合征检测试剂盒，它包括检测血清中DR5蛋白含量的试剂。如前述的检测试剂盒，所述检测血清中DR5蛋白含量的试剂为酶联免疫吸附检测试剂。如前述的检测试剂盒，所述检测血清中DR5蛋白含量的试剂为液相色谱方法用试剂或胶体金检测试剂。如前述的检测试剂盒，所述检测血清中DR5蛋白含量的试剂为R&DSystemsLuminex液相芯片检测试剂。专利技术人发现，ARDS患者与健康人的血清中DR5蛋白的含量存在显著性区别，ARDS患者血清中DR5蛋白含量远高于健康人。常规蛋白检测方法例如液相色谱(比如高效液相色谱、超高效液相色谱)、酶联免疫吸附检测、胶体金均可对DR5蛋白进行检测，用已有健康人和或ARDS患者的DR5蛋白水平数据作为参照，即可进行诊断ARDS。进一步地，本专利技术实施例1中使用的R&DSystemsLuminex液相芯片，检测了ARDS患者与健康人的血清中DR5蛋白的水平，并作出了ROC分析，得到的曲线下面积(AUC)为0.992，当检测临界值(cut-off值)为79.69pg/mL时，其特异性为100％，灵敏度为96.2％，表明理论上误诊可能性为0，漏诊可能性仅3.8％，准确性很高。在所有检测单个生化指标的疾病诊断技术中，很少能达到如此高的准确性，说明本专利技术检测试剂盒的性能非常优良。本专利技术的试剂盒是根据前述发现专利技术的试剂盒，该试剂盒可以通过检测血清中DR5蛋白，实现ARDS客观、准确、快速的诊断。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1是两组中血清DR5蛋白的水平比较的散点图。图2是DR5蛋白浓度与ARDS的ROC曲线图。具体实施方式实施例1ARDS患者血清中DR5蛋白检测1.被检对象ARDS患者(A组)56人，健康人(B组)32人。被检对象人群在实验前均已经知情并同意。2.方法留取被检对象的血液，收集血清，针对DR5蛋白进行R&DSystemsLuminex液相芯片检测，具体地，包括如下步骤：(1)重悬混匀稀释的检测混合液，向每个酶标板孔内加入50μL混合液；(2)加入50μL标准品或样本，封膜后，室温摇晃孵育2小时；(3)100μL洗板液洗板3次；(4)每孔内加入50μL生物素标记的抗体混合物，封膜后室温摇晃孵育30min；(5)100μL洗板液洗板3次；(6)向每孔中加入100μL显色液，室温摇晃混匀2min；(7)90min内读板(Bio-Rad)；3.结果(1)ARDS患者血清中DR5水平显著高于健康人对A、B两组血清中DR5蛋白的检测结果如图1所示，ARDS患者血清中DR5的平均值显著高于健康人血清中DR5，统计P值＜0.001；(2)血清DR5蛋白在ARDS的诊断中具有较大价值对A、B组血清中DR5蛋白含量的ROC分析结果如图2所示，ROC的曲线下面积(AUC)高达0.992；当检测临界值(cut-off值)为79.69pg/mL时，其特异性为100％，灵敏度为96.2％。实验结果说明，通过检测血清中DR5蛋白的水平，理论上误诊可能性为0，漏诊可能性仅3.8％，准确性很高；本专利技术的试剂盒性能十分优秀。实施例2本专利技术的试剂盒1.本专利技术试剂盒的组成2.试剂盒使用方法(1)向96孔板中每孔内加入50μL标准品或样本，封膜后，室温摇晃孵育2小时；(2)100μL洗板液洗板3次；(3)每孔内加入50μL生物素标记的二抗，封膜后室温摇晃孵育30min；(4)100μL洗板液洗板3次；(5)向每孔中加入50μL显色底物，室温摇晃混匀2min；(6)酶标仪读数；当血清中DR5蛋白的检测值为79.69pg/mL(即cut-off值)以上，可判别为ARDS。综上，本专利技术的试剂盒通过对DR5蛋白的定量检测，可实现对ARDS的快速、准确的诊断，应用前景良好。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测血清中DR5蛋白含量的试剂在制备急性呼吸窘迫综合征检测试剂盒中的用途。/n

【技术特征摘要】
1.检测血清中DR5蛋白含量的试剂在制备急性呼吸窘迫综合征检测试剂盒中的用途。


2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述检测血清中DR5蛋白含量的试剂为酶联免疫吸附检测试剂。


3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述检测血清中DR5蛋白含量的试剂为液相色谱方法用试剂。


4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述检测血清中DR5蛋白含量的试剂为胶体金检测试剂。


5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述检测血清中DR5蛋白含量的试剂为R&DSystemsLuminex液相芯片检测用试剂。


6....

【专利技术属性】
技术研发人员：王浩，郝南亚，文富强，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：四川;51