一种基于低共熔溶剂的马肉中苯基丁氮酮的检测方法技术

本发明专利技术提供了一种基于低共熔溶剂的马肉中苯基丁氮酮的检测方法，属于成分检测技术领域。本发明专利技术使用含抗坏血酸的醋酸铵缓冲液作为提取溶剂，酸性的醋酸铵缓冲液能够增加苯基丁氮酮的溶解性，提高液液微萃取的萃取效率，提取液中含有抗坏血酸能够避免苯基丁氮酮在酸性溶液中分解现象的发生；同时，本发明专利技术使用含抗坏血酸的醋酸铵缓冲液作为提取溶剂，能够避免有机提取溶剂的大量使用。本发明专利技术使用低共熔溶剂作为液液微萃取的萃取剂，能够与提取溶剂互溶并快速达到萃取平衡，从而提高萃取效率。本发明专利技术使用极性有机分散剂即可实现萃取剂与提取溶剂的分层，操作简单，耗时短。实施例结果表明，本发明专利技术提供的检测方法重复性和精密度良好。

【技术实现步骤摘要】
一种基于低共熔溶剂的马肉中苯基丁氮酮的检测方法
本专利技术涉及成分检测
，特别涉及一种基于低共熔溶剂的马肉中苯基丁氮酮的检测方法。
技术介绍
苯基丁氮酮(Phenylbutazone)又称保泰松，属于非甾体抗炎药，专利技术于20世纪中叶，主要用于治疗人类风湿性关节炎和通风，也用于马匹的镇痛和退烧。其副作用类似其他非甾体抗炎药，过量或者长期使用可引起胃肠道溃疡、血液病、肾损害、口腔病变、内出血等。而且苯基丁氮酮具有胚胎毒性，此外其可能抑制白细胞的再生，引起人类再生障碍性贫血。由于该药物的副作用，国际上已禁止人使用，并对其进入人食物链有严格限制，欧盟、美国、加拿大和日本等国家均禁止该药物用于食用动物。虽然各国均有严格规定，但仍有含有苯基丁氮酮的马肉进入市场的情况发生。鉴于此，有必要建立快速、简易的马肉中苯基丁氮酮检测方法，以检测进口肉类品质。针对动物肌肉组织中苯基丁氮酮的检测，庞国芳等建立了屠宰动物肌肉组织中的苯基丁氮酮残留量的LC-UV测定方法，并制定了GB/T20754—2006《畜禽肉中保泰松残留量的测定方法液相色谱-紫外检测法》，该检测方法使用大量乙酸乙酯有机混合溶液作为提取溶剂，使用固相萃取柱净化，步骤较多，成本较高。SN/T2190-2008采用常规液相萃取方法对动物源基质中非甾体类抗炎药进行了检测，使用大量有机溶剂乙腈和正己烷，且在提取时需要分液、净化、氮吹浓缩等步骤，操作繁琐。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种基于低共熔溶剂的马肉中苯基丁氮酮的检测方法。本专利技术提供的检测方法操作简单，有机溶剂用量少，能够快速、准确地检测出马肉中苯基丁氮酮的含量。为了实现上述专利技术的目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种基于低共熔溶剂的马肉中苯基丁氮酮的检测方法，包括以下步骤：(1)将马肉样品与提取溶剂、水溶性无机盐、低共熔溶剂和极性有机分散剂混合，依次进行液液微萃取和离心，取上层清液定容，过膜后得到待测液；所述提取溶剂为含抗坏血酸的醋酸铵缓冲液；所述含抗坏血酸的醋酸铵缓冲液的pH值为3～5；所述低共熔溶剂的氢键受体为氯化胆碱，氢键供体为苯酚；(2)使用高效液相色谱-串联质谱法对所述待测液进行检测，得到待测液的峰面积；(3)根据标准曲线和步骤(2)所得峰面积，得到马肉中苯基丁氮酮的含量；所述标准曲线为苯基丁氮酮标准溶液的浓度与高效液相色谱-串联质谱峰面积的线性关系曲线。优选的，所述含抗坏血酸的醋酸铵缓冲液中抗坏血酸的摩尔浓度为0.005～0.05mol/L，醋酸铵的摩尔浓度为20mmol/L。优选的，所述低共熔溶剂中氯化胆碱与苯酚的摩尔比为1:1～4。优选的，所述水溶性无机盐为氯化钠，所述极性有机分散剂为乙腈、丙酮和四氢呋喃中的一种。优选的，所述马肉样品、提取溶剂、水溶性无机盐、低共熔溶剂和极性有机分散剂的用量比为2.5g：5mL：1.0g：0.8mL：0.8mL。优选的，所述液液微萃取的时间为5min；所述离心的转速为10000r/min，时间为5min。优选的，所述高效液相色谱的检测条件包括：色谱柱为AcquityUPLCBEHC18，所述色谱柱的柱长为50mm，柱径为2.1mm，填料粒径为1.7μm；进样量为5μL；流动相A为含有5mmol/L乙酸铵和0.1vol％甲酸的水溶液；流动相B为乙腈；所述流动相A和B的流速为0.2mL/min；洗脱方式为梯度洗脱，所述梯度洗脱的程序为：0～3min时，流动相B的体积百分含量为20～60％；3～4min时，流动相B的体积百分含量为60～90％；4～4.5min时，流动相B的体积百分含量为90～20％；4.5～7.min，流动相B的体积百分含量为20％。优选的，所述质谱法的检测条件包括：质谱仪为三重四级杆质谱仪，采用ESI电离源、正离子模式、多反应监控MRM模式；干燥气温度为3250℃；干燥气流量为10L/min；雾化气压力为20psi；毛细管电压为4000V。本专利技术提供了一种基于低共熔溶剂的马肉中苯基丁氮酮的检测方法，本专利技术使用含抗坏血酸的醋酸铵缓冲液作为提取溶剂，酸性的醋酸铵缓冲液能够增加苯基丁氮酮的溶解性，提高液液微萃取的萃取效率，提取液中含有抗坏血酸能够避免苯基丁氮酮在酸性溶液中分解现象的发生；同时，本专利技术使用含抗坏血酸的醋酸铵缓冲液作为提取溶剂，能够避免有机提取溶剂的大量使用。本专利技术使用低共熔溶剂作为液液微萃取的萃取剂，能够与提取溶剂互溶并快速达到萃取平衡，从而提高萃取效率。本专利技术使用极性有机分散剂即可实现萃取剂与提取溶剂的分层，操作简单，耗时短。实施例结果表明，本专利技术提供的检测方法重复性和精密度良好。附图说明图1是实施例1待测液色谱图；图2是实施例1所得的标准曲线图；图3是实施例1中标准溶液的色谱图；图4是实施例1～4待测液中的低共熔溶剂的回收率柱状图；图5是实施例1、实施例5～7待测液中的低共熔溶剂的回收率柱状图；图6是马肉阴性样品色谱图；图7是10μg/kg水平的马肉标准添加样色谱图。具体实施方式本专利技术提供了一种基于低共熔溶剂的马肉中苯基丁氮酮的检测方法，包括以下步骤：(1)将马肉样品与提取溶剂、水溶性无机盐、低共熔溶剂和极性有机分散剂混合，依次进行液液微萃取和离心，取上层清液定容，过膜后得到待测液；所述提取溶剂为含抗坏血酸的醋酸铵缓冲液；所述含抗坏血酸的醋酸铵缓冲液的pH值为3～5；所述低共熔溶剂的氢键受体为氯化胆碱，氢键供体为苯酚；(2)使用高效液相色谱-串联质谱法对所述待测液进行检测，得到待测液的峰面积；(3)根据标准曲线和步骤(2)所得峰面积，得到马肉中苯基丁氮酮的含量；所述标准曲线为苯基丁氮酮标准溶液的浓度与高效液相色谱-串联质谱峰面积的线性关系曲线。本专利技术将马肉样品与提取溶剂、水溶性无机盐、低共熔溶剂和极性有机分散剂混合，依次进行液液微萃取和离心，取上层清液定容，过膜后得到待测液。在本专利技术中，所述马肉样品优选为粉碎后的马肉样品；本专利技术对所述粉碎的方式没有特殊的要求，使用本领域技术人员熟知的粉碎方式即可。在本专利技术中，所述提取溶剂为含抗坏血酸的醋酸铵缓冲液；所述含抗坏血酸的醋酸铵缓冲液的pH值为3～5，优选为3.5。在本专利技术中，所述含抗坏血酸的醋酸铵缓冲液优选为含抗坏血酸的醋酸铵水溶液，所述含抗坏血酸的醋酸铵缓冲液中抗坏血酸的摩尔浓度优选为0.005～0.05mol/L，更优选为0.01mol/L；所述醋酸铵的摩尔浓度优选为20mmol/L。本专利技术使用含抗坏血酸的醋酸铵缓冲液作为提取溶剂，酸性的醋酸铵缓冲液能够增加苯基丁氮酮的溶解性，提高液液微萃取的萃取效率，提取液中含有抗坏血酸能够避免苯基丁氮酮在酸性溶液中分解现象的发生；同时，本专利技术使用含抗坏血酸的醋酸铵缓冲液作为提取溶剂，能够避免有本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于低共熔溶剂的马肉中苯基丁氮酮的检测方法，包括以下步骤：/n(1)将马肉样品与提取溶剂、水溶性无机盐、低共熔溶剂和极性有机分散剂混合，依次进行液液微萃取和离心，取上层清液定容，过膜后得到待测液；/n所述提取溶剂为含抗坏血酸的醋酸铵缓冲液；所述含抗坏血酸的醋酸铵缓冲液的pH值为3～5；/n所述低共熔溶剂的氢键受体为氯化胆碱，氢键供体为苯酚；/n(2)使用高效液相色谱-串联质谱法对所述待测液进行检测，得到待测液的峰面积；/n(3)根据标准曲线和步骤(2)所得峰面积，得到马肉中苯基丁氮酮的含量；所述标准曲线为苯基丁氮酮标准溶液的浓度与高效液相色谱-串联质谱峰面积的线性关系曲线。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于低共熔溶剂的马肉中苯基丁氮酮的检测方法，包括以下步骤：
(1)将马肉样品与提取溶剂、水溶性无机盐、低共熔溶剂和极性有机分散剂混合，依次进行液液微萃取和离心，取上层清液定容，过膜后得到待测液；
所述提取溶剂为含抗坏血酸的醋酸铵缓冲液；所述含抗坏血酸的醋酸铵缓冲液的pH值为3～5；
所述低共熔溶剂的氢键受体为氯化胆碱，氢键供体为苯酚；
(2)使用高效液相色谱-串联质谱法对所述待测液进行检测，得到待测液的峰面积；
(3)根据标准曲线和步骤(2)所得峰面积，得到马肉中苯基丁氮酮的含量；所述标准曲线为苯基丁氮酮标准溶液的浓度与高效液相色谱-串联质谱峰面积的线性关系曲线。


2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述含抗坏血酸的醋酸铵缓冲液中抗坏血酸的摩尔浓度为0.005～0.05mol/L，醋酸铵的摩尔浓度为20mmol/L。


3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述低共熔溶剂中氯化胆碱与苯酚的摩尔比为1:1～4。


4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述水溶性无机盐为氯化钠，所述极性有机分散剂为乙腈、丙酮和四氢呋喃中的一种。


5.根据权利要求1或4所述的检测方法，其特征在于，所述马肉样品、提取溶剂、水溶性无机盐、低共熔溶剂和极性有...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑书展，张春艳，任彩霞，王晓敏，盛万里，马彩霞，
申请(专利权)人：呼和浩特海关技术中心，
类型：发明
国别省市：内蒙古;15