一种用于活性导向筛选抗AIDS天然产物的方法技术

本发明专利技术涉及ＨＩＶ－１逆转录酶抑制剂的筛选方法，依据ＨＩＶ－１逆转录酶以单一碱基ＲＮＡ为模板催化ＤＮＡ合成，利用ｂｉｏｔｉｎ－ｄＵＴＰ和ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－ｄＵＴＰ随机掺入ＤＮＡ中，形成ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－ｂｉｏｔｉｎ双标记的ＤＮＡ；再通过抗ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ抗体特异性捕获ＤＮＡ，利用荧光标记链亲和素与ｂｉｏｔｉｎ标记ＤＮＡ的特异性结合进行检测，根据荧光强弱可知合成ＤＮＡ中生物素的量，从而推算ＨＩＶ－１逆转录酶的活性。本发明专利技术克服了以往方法中生物素干扰造成假阳性的难题，对天然产物中的ＨＩＶ－１逆转录酶抑制活性进行高效、灵敏检测，方法简便，抗干扰能力强，在抗ＡＩＤＳ天然产物的筛选中具有广泛应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种HIV-1逆转录酶抑制剂的筛选方法，具体说是其在天然产物粗提物中活性导向发现抗AIDS化合物方面的应用。
技术介绍
HIV-1逆转录酶(HIV-1 RT)抑制剂是获得性免疫缺陷综合症(AIDS)的潜在治疗药物，目前AIDS治疗药物的大部分是逆转录酶抑制剂。逆转录酶具有突出的靶点特异性，是当前AIDS治疗药物的研究热点，发现新型、高效的HIV-1逆转录酶抑制剂极具应用价值。天然产物中蕴含种类繁多、结构新颖的化合物，是新药的重要来源之一。目前对于天然产物的活性筛选大多集中于分离后获得的纯化合物的筛选，在这些纯化合物中发现真正高活性物质的几率很低，这是由于分离提取工作的盲目性导致的。活性导向分离提取有助于解决这个问题，提高工作效率。虽然HIV-1逆转录酶抑制剂抑制活性检测方法检测手段多样，但局限于纯化合物的逆转录酶抑制活性检测。由于天然产物粗提物中含有大量内源性生物素的干扰，因此目前用于HIV-1逆转录酶抑制剂抑制活性检测的方法无法用于粗提物的筛选，个别方法尽管影响较小，但由于操作复杂难以广泛使用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种操作简单、可对粗提物进行HIV-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于活性导向筛选抗ＡＩＤＳ天然产物的方法，其特征在于：以ＨＩＶ－１逆转录酶抑制剂抑制活性的检测来对天然产物粗提物进行筛选；具体为，在逆转录反应体系中加入天然产物粗提物，逆转录反应体系包括ＨＩＶ－１逆转录酶、单一碱基组成的ＲＮＡ及引物、ｂｉｏｔｉｎ－ｄＵＴＰ、ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－ｄＵＴＰ、ｄＴＴＰ，ＨＩＶ－１逆转录酶以单一碱基组成的ＲＮＡ为模板催化ＤＮＡ合成，ｂｉｏｔｉｎ－ｄＵＴＰ和ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－ｄＵＴＰ随机掺入ＤＮＡ，形成ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－ｂｉｏｔｉｎ双标记的ＤＮＡ；再通过ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记ＤＮＡ与抗ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ抗体的特异性结合进行捕获，通过ｂｉｏｔｉ...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张卫，袁景利，胡政，靳艳，王桂兰，虞星炬，金美芳，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：91[中国|大连]