一种食线虫真菌厚垣孢子营养颗粒制剂的制备方法与应用技术

本发明专利技术提供一种食线虫真菌厚垣孢子营养颗粒制剂的制备方法，其特征在于：包括食线虫性真菌

【技术实现步骤摘要】
一种食线虫真菌厚垣孢子营养颗粒制剂的制备方法与应用
本专利技术涉及动物寄生线虫病领域，具体涉及到一种食线虫真菌厚垣孢子营养颗粒制剂的制备方法与应用。
技术介绍
长期以来，家养动物寄生线虫病主要依赖于化学药物进行预防和治疗性驱虫。然而随着驱虫药的广泛使用，目前体内寄生虫对常用三大类驱虫药（苯并咪唑类、阿维菌素/伊维菌素、左旋咪唑）的抗药性频繁发生且在一些国家或地区流行严重并呈蔓延之势。为了阻止寄生虫抗药性的继续传播，研究者推荐轮牧、清除牧场粪便、利用天然含有丹宁的植物、应用隐含抗原的疫苗以及探讨利用线虫的天敌进行生物防治；其中利用食线虫真菌捕杀环境中的感染性幼虫（L3）以控制感染源头，这不仅节约人力、物力和应用成本，而且是最直接有效且具有应用前景的防治策略之一。食线虫真菌Arthrobotrys(Duddingtonia)flagrans（同物异名Trichotheciumflagrans）在反刍动物寄生虫的生物控制方面得到了广泛的研究，D.flagrans在培养期间可产生大量双层壁的厚垣孢子能够抵抗动物消化道内的消化酶而不被灭活。因此该菌的孢子可添加于动物的饲料中，经过消化道后随粪便虫卵排出体外，可以大量捕杀粪便中孵化出的寄生线虫幼虫，减少L3的数量，达到生物防控的目的。本研究前，由于国内缺乏优良的候选菌种D.flagrans，严重制约了动物寄生线虫生物防治的研究进展，而引进外来菌种有基因重组和物种入侵的风险。为此，我们自2011年以来，在全国20个省（自治区/直辖市）、48个县87个位点对食线虫真菌进行了广泛的分离、鉴定工作，在国内首次分离获得了D.flagrans13株，并对当地分离株的形态学、分子遗传学、捕食机理、体外杀虫试验、体内通过动物消化道试验以及其它生物学特性进行了研究，结果表明，我国分离的D.flagrans菌株在形态学、培养特性方面不同于国外菌种，证明该菌株是适应我国地理特征的新分离株，具有作为研制生防制剂候选菌种的巨大潜力。此外，研制适宜的剂型对于家畜寄生线虫的生物防治至关重要，D.flagrans厚垣孢子不仅需要具有稳定的活性从而传递到动物的粪便中发挥有效捕杀L3的作用，更需要适于投放至饲料中从而便于饲用、保存和运输，一种好的剂型是生防制剂商业化的关键。国内已有采用D.flagrans分离株厚垣孢子的真空冷冻干燥剂型，但制备冻干制剂需要大型的设备、耗电量较大，提高了产品的成本，而且要将微量的冻干制剂如何均匀的混合入家畜的饲料中让其采食则增加了劳力成本，这些可能限制其今后在寄生虫生物防治中大规模应用。另外，国内报道了关于食线虫真菌粉状制剂的研制及应用，将捕食线虫性真菌分离株接种在培养基（优选玉米+小麦联合谷粒培养基）上，温度25-28℃，相对湿度80%以上，进行厚垣孢子批量培养，15-25d终止培养并收获含孢子的培养物。将收获含孢子的培养物连同谷粒，置容器中摊薄，于35℃风干，风干时间3-5d；或者真空干燥，温度35-40℃，真空度为0.082-0.085MPa；或者自然风干，最后收获干燥物备用配置和粉碎。将干燥后培养物按照质量比为1:1混合，再把干燥的菌株培养物与麸皮按照质量比为1:5‒1:10混合，混合物经粉碎机粉碎并搅拌均匀获得捕食线虫性真菌粉状制剂。但由于该粉剂并没有添加其它保护剂，导致其不能长期保存贮藏。目前国外也正在用当地的D.flagrans分离株研究不同类型的颗粒制剂，缓释剂，微囊剂等。但现有技术的食线虫性真菌厚垣孢子颗粒制剂还具有以下技术缺陷：耐高温性能差，不耐储存，易失活失效。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种食线虫性真菌厚垣孢子颗粒制剂的制备方法，其特征是在：提高食线虫性真菌厚垣孢子颗粒制剂的耐高温性能、耐储存性能。另外，本专利技术中的产品具有易于贮的藏存和运输、生产工艺简单且易于规模化生产、能在生产中方便应用、成本低的特点。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：菌种：鞭式节丛孢D.flagrans分离株SDH035保藏编号为CGMCCNO.11210，保藏日期为2015年8月31日；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物保藏中心，其简称为CGMCC；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，邮编100101。SDH035分离株在NCBI（GenBank）获取的序列登录号为KP2575930。该制备方法包括以下步骤：一种食线虫真菌厚垣孢子营养颗粒制剂的制备方法，其特征在于：包括食线虫性真菌D.flagransSDH035的分离纯化、菌种扩培、孢子粉的制备、耐高温颗粒制备步骤；所述耐高温颗粒制备：原料按照以下重量配比混合：玉米30-60份、麸皮10-30份、豆饼2-5份、菜饼5-10份、青干草粉10-46份、磷酸氢钙0.5-1份、石粉0.5-2份、食盐0.5-1份、复合维生素0.02-0.05份、复合微量元素0.25-0.5份和孢子粉0.2-0.5份。所述孢子粉的制备：将捕食线虫性真菌D.flagransSDH035分离株接种于培养基上，培养温度为27-30℃，相对湿度75-85%，经30-40℃鼓风干燥4-5d，培养物用粉碎机打成粉状。所述耐高温颗粒制备：原料按照以下重量配比混合：玉米50份、麸皮25份、豆饼3份、菜饼7份、青干草粉12份、磷酸氢钙0.5份、石粉1份、食盐0.46份、复合维生素0.04份、复合微量元素0.5份和孢子粉0.5份。所述耐高温颗粒制备：将原料混合后，经80℃瞬时高温加工处理1-2s，形成含有D.flagrans厚垣孢子的耐高温颗粒制剂。所述耐高温颗粒制备：每克物料含有4-5×105/g个厚垣孢子。所述菌种扩培：将捕食线虫性真菌D.flagransSDH035分离株在玉米-小麦联合谷培养基上进行批量培养，温度20-30℃。所述菌种扩培：培养的相对湿度75-90%，培养时间为14-16d。所述复合维生素：包括维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、维生素B6、维生素B9、维生素B12、维生素C、维生素H。所述复合维生素的组分配比为：维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、维生素B6、维生素B9、维生素B12、维生素C、维生素H，质量比为12:7:9:10:6:6:6:6:10。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：（1）本专利技术制备的含有食线虫真菌D.flagrans厚垣孢子颗粒制剂营养丰富，动物采食性好。（2）本专利技术制备的含有食线虫真菌D.flagrans厚垣孢子颗粒制剂可耐40-60℃的高温，经高温处理1min后，杀虫率仍然能达到98%以上；可耐仓库存储150d，杀虫率仍然达到94%以上；可见，本专利技术耐高温性能和耐储存性能显著。（3）本专利技术制备的含有食线虫真菌D.flagrans厚垣孢子颗粒作为动物寄生线虫生物防治制剂，可有效补充或替代传统化药的大量使用，从而减少环境中寄生线虫的自由生活阶段如卵、1~3期幼虫的数量。可通过饲本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种食线虫真菌厚垣孢子营养颗粒制剂的制备方法，其特征在于：包括食线虫性真菌

【技术特征摘要】
1.一种食线虫真菌厚垣孢子营养颗粒制剂的制备方法，其特征在于：包括食线虫性真菌D.flagransSDH035的分离纯化、菌种扩培、孢子粉的制备、耐高温颗粒制备步骤；所述耐高温颗粒制备：原料按照以下重量配比混合：玉米30-60份、麸皮10-30份、豆饼2-5份、菜饼5-10份、青干草粉10-46份、磷酸氢钙0.5-1份、石粉0.5-2份、食盐0.5-1份、复合维生素0.02-0.05份、复合微量元素0.25-0.5份和孢子粉0.2-0.5份。


2.根据权利要求1所述的一种食线虫真菌厚垣孢子营养颗粒制剂的制备方法，其特征在于：所述孢子粉的制备：将捕食线虫性真菌D.flagransSDH035分离株接种于培养基上，培养温度为27-30℃，相对湿度75-85%，经30-40℃鼓风干燥4-5d，培养物用粉碎机打成粉状。


3.根据权利要求1所述的一种食线虫真菌厚垣孢子营养颗粒制剂的制备方法，其特征在于：所述耐高温颗粒制备：原料按照以下重量配比混合：玉米50份、麸皮25份、豆饼3份、菜饼7份、青干草粉12份、磷酸氢钙0.5份、石粉1份、食盐0.46份、复合维生素0.04份、复合微量元素0.5份和孢子粉0.5份。


4.根据权利要求1所述的一种食线虫真菌厚垣孢子营养颗粒制剂的制备方法，其特征在于：所述耐高温颗粒制备：将原料...

【专利技术属性】
技术研发人员：王波波，徐斌，赵晓杰，
申请(专利权)人：潍坊中创生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37