一种促进铁皮石斛种子无菌萌发的培养基及培养方法技术

本发明专利技术公开了一种促进铁皮石斛种子无菌萌发的培养基及培养方法，所述培养基包含下述组分：马铃薯汁220‑250g、6‑BA 0.8‑1.2mg、NAA 0.4‑0.6mg、硝酸镧0.1‑0.2mg、三七总皂苷50‑100mg、低聚肽0.1‑0.4g、海藻糖0.2‑0.5g、蔗糖25‑30g、琼脂7‑10g，1/2MS培养基补足至1000mL。本发明专利技术通过对培养基配方的优化，有效提高了铁皮石斛种子无菌繁育培养的发芽率和萌芽速度，有利于铁皮石斛的规模化栽培。

【技术实现步骤摘要】
一种促进铁皮石斛种子无菌萌发的培养基及培养方法
本专利技术涉及铁皮石斛无菌培养
，尤其涉及一种促进铁皮石斛种子无菌萌发的培养基及培养方法。
技术介绍
铁皮石斛是兰科石斛属草本植物，药用历史悠久，富含多糖、生物碱、氨基酸等多种活性成分，具有生津、润肺、益肾、明目的功效，且具有良好的抗肿瘤、降血糖、抗衰老和增强免疫力等作用，铁皮石斛保健产品也因此受到市场的高度评价。由于市场需求逐步攀升，野生铁皮石斛资源日渐枯竭，价格日趋昂贵。因此，人工栽培铁皮石斛成为主要来源，对铁皮石斛栽培用的种苗需求量也越来越大。目前，铁皮石斛多采用组织培养的方法，以种子为外植体进行无菌繁育，发芽率较低，且种子萌芽速度慢，难以在短时间内大量获取种苗。因此，提高铁皮石斛种子的发芽率和萌芽速度，对铁皮石斛的规模化栽培具有十分重要的意义。
技术实现思路
基于
技术介绍
存在的技术问题，本专利技术提出了一种促进铁皮石斛种子无菌萌发的培养基及培养方法。本专利技术提出的一种促进铁皮石斛种子无菌萌发的培养基，包含下述组分：马铃薯汁220-250g、6-BA0.8-1.2mg、NAA0.4-0.6mg、硝酸镧0.1-0.2mg、三七总皂苷5-20mg、低聚肽0.1-0.4g、海藻糖0.2-0.5g、蔗糖25-30g、琼脂7-10g，1/2MS培养基补足至1000mL。优选地，所述的促进铁皮石斛种子无菌萌发的培养基包含下述组分：马铃薯汁230g、6-BA1mg、NAA0.5mg、硝酸镧0.14mg、三七总皂苷15mg、低聚肽0.25g、海藻糖0.45g、蔗糖28g、琼脂8g，1/2MS培养基补足至1000mL。优选地，所述低聚肽的分子量为200-1000Da。优选地，所述低聚肽为玉米低聚肽、大豆低聚肽、大米低聚肽、小麦低聚肽中的至少一种。一种铁皮石斛种子的无菌萌发培养方法，采用所述的培养基进行培养。优选地，所述的铁皮石斛种子的无菌萌发培养方法包括下述步骤：S1、取铁皮石斛的成熟果实，经过清洗、消毒处理；S2、将步骤S1处理后的果实中的种子接种于所述培养基中进行培养。优选地，所述步骤S1中，消毒处理的方法为：先用浓度为70-75％的酒精浸泡40-50s，再用浓度为0.05-0.15％的升汞溶液处理15-30min，即可。优选地，所述步骤S2中，培养方法为：在温度为24-26℃、光照强度为1400-1800lux的条件下进行培养，每日光照时间为10-14h。其中，1/2MS培养基是将MS培养基的大量元素减半其他不变而配置的培养基，具体成分如下：KNO3950mg/L、NH4NO3825mg/L、KH2PO485mg/L、MgSO4.7H2O185mg/L、CaCl2.2H2O220mg/L、KI0.415mg/L、H3BO33.1mg/L、MnSO4.7H2O11.15mg/L、ZnSO4.7H2O4.3mg/L、Na2MoO4.2H2O0.125mg/L、CuSO4.5H2O0.0125mg/L、CoCl2.6H2O0.0125mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L、FeSO4.7H2O27.8mg/L、肌醇100mg/L、维生素B10.1mg/L、维生素B60.5mg/L、烟酸0.5mg/L、甘氨酸2.0mg/L。本专利技术的有益效果如下：本专利技术在常规的铁皮石斛种子无菌萌发培养基中，加入了合适浓度的添加剂硝酸镧、三七总皂苷、低聚肽和海藻糖。其中，硝酸镧、三七总皂苷能够增加种子膜的通透性，增强种子的呼吸作用，加快种子的吸水速率，从而有效提高种子的发芽速度和发芽率；低聚肽是由2-6个氨基酸构成的、分子量在1000Da以下的片段，是一种高效率的转运载体，可以作为营养成分载体，快速满足种子萌发过程中的营养需求，从而起到辅助作用，提高种子的发芽速度和发芽率。但是，由于铁皮石斛种子对盐溶液的耐受力较低，高浓度的稀土盐溶液会造成渗透胁迫，对种子的萌芽产生抑制作用，而且萌发速率加快导致的代谢增强，导致快速耗氧，产生大量自由基，使种子的活性受损，而本专利技术通过调节三七总皂苷与硝酸镧的含量，在有效提高种子膜通透性的前提下，降低稀土盐的浓度，通过添加合适含量的海藻糖，起到调节渗透压的作用，从而避免渗透胁迫对种子的抑制作用，通过具有清除自由基功效的三七总皂苷和低聚肽复配，减少自由基对种子活性的损伤，从而在提高发芽速度的同时，使种子具有高发芽率。因此，本专利技术基于对添加剂硝酸镧、三七总皂苷、低聚肽和海藻糖的选择以及各添加剂含量的调整，对配方进行了合理的优化，从而得到了一种高效的铁皮石斛种子无菌萌发培养基，能大幅度提高铁皮石斛种子无菌繁育培养的发芽率和萌芽速度，有利于铁皮石斛的规模化栽培。具体实施方式下面，通过具体实施例对本专利技术的技术方案进行详细说明。实施例1一种促进铁皮石斛种子无菌萌发的培养基，包含下述组分：马铃薯汁230g、6-BA1mg、NAA0.5mg、硝酸镧0.14mg、三七总皂苷15mg、低聚肽0.25g、海藻糖0.45g、蔗糖28g、琼脂8g，1/2MS培养基补足至1000mL。其中，低聚肽为分子量为500-1000Da的小麦低聚肽。一种铁皮石斛种子的无菌萌发培养方法，包括下述步骤：S1、取铁皮石斛的成熟果实，将表皮用清水清洗干净后，先用浓度为70％的酒精浸泡45s，用无菌水冲洗3次，再用浓度为0.1％的升汞溶液处理20min，用无菌水冲洗10次，用无菌滤纸吸干表皮的水分；S2、将步骤S1处理后的果实切口，将果实中的种子均匀播撒接种于上述培养基中，在温度为25℃、光照强度为1500lux的条件下进行培养，每日光照时间为12h。实施例2一种促进铁皮石斛种子无菌萌发的培养基，包含下述组分：马铃薯汁220g、6-BA0.8mg、NAA0.4mg、硝酸镧0.1mg、三七总皂苷5mg、低聚肽0.1g、海藻糖0.2g、蔗糖25g、琼脂7g，1/2MS培养基补足至1000mL。其中，低聚肽为分子量为500-1000Da的小麦低聚肽。一种铁皮石斛种子的无菌萌发培养方法，包括下述步骤：S1、取铁皮石斛的成熟果实，将表皮用清水清洗干净后，先用浓度为70％的酒精浸泡50s，用无菌水冲洗3次，再用浓度为0.05％的升汞溶液处理30min，用无菌水冲洗10次，用无菌滤纸吸干表皮的水分；S2、将步骤S1处理后的果实切口，将果实中的种子均匀播撒接种于上述培养基中，在温度为24℃、光照强度为1400lux的条件下进行培养，每日光照时间为10h。实施例3一种促进铁皮石斛种子无菌萌发的培养基，包含下述组分：马铃薯汁250g、6-BA1.2mg、NAA0.6mg、硝酸镧0.2mg、三七总皂苷20mg、低聚肽0.4g、海藻糖0.5g、蔗糖30g、琼脂10g，1/2MS培养基补足至1000mL。其中，低聚肽为分子量为500-1000Da的小麦低聚肽。一种铁皮石斛种子本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种促进铁皮石斛种子无菌萌发的培养基，其特征在于，所述培养基包含下述组分：马铃薯汁220-250g、6-BA 0.8-1.2mg、NAA 0.4-0.6mg、硝酸镧0.1-0.2mg、三七总皂苷5-20mg、低聚肽0.1-0.4g、海藻糖0.2-0.5g、蔗糖25-30g、琼脂7-10g，1/2MS培养基补足至1000mL。/n

【技术特征摘要】
1.一种促进铁皮石斛种子无菌萌发的培养基，其特征在于，所述培养基包含下述组分：马铃薯汁220-250g、6-BA0.8-1.2mg、NAA0.4-0.6mg、硝酸镧0.1-0.2mg、三七总皂苷5-20mg、低聚肽0.1-0.4g、海藻糖0.2-0.5g、蔗糖25-30g、琼脂7-10g，1/2MS培养基补足至1000mL。


2.根据权利要求1所述的促进铁皮石斛种子无菌萌发的培养基，其特征在于，所述培养基包含下述组分：马铃薯汁230g、6-BA1mg、NAA0.5mg、硝酸镧0.14mg、三七总皂苷15mg、低聚肽0.25g、海藻糖0.45g、蔗糖28g、琼脂8g，1/2MS培养基补足至1000mL。


3.根据权利要求1或2所述的促进铁皮石斛种子无菌萌发的培养基，其特征在于，所述低聚肽的分子量为200-1000Da。


4.根据权利要求1-3任一项所述的促进铁皮石斛种子无菌萌发的培养基，其特征在于，所述低聚肽...

【专利技术属性】
技术研发人员：张建民，
申请(专利权)人：安徽皖斛堂生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34