一种检测有机磷农药的免疫胶体金测试条及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种检测有机磷农药的免疫胶体金测试条及其制备方法，属于对农药的检测技术领域。该测试条包括ＰＶＣ背衬（１）、粘合剂层（２）、样品垫（３）、结合垫（４）、硝酸纤维素膜（５）、重叠带Ａ（６）、检测带（７）、对照带（８）、重叠带Ｂ（９）、吸水垫（１０）、限位线（１１）和箭头线（１２）；其制备方法包括：制备有机磷农药－ＢＳＡ载体蛋白偶联物；制备抗有机磷农药特异性单克隆抗体；制备羊或兔抗鼠ＩｇＧ；制备胶体金；制备单克隆抗体胶体金标记等步骤；该测试条具有简单、快速，仅需要３－１５分钟、特异性强，灵敏度高、重复性好、准确、无毒、易保存、廉价等特点，可在对蔬菜、果品、肉类、水产品、蜂产品等有机磷农药残留检测中推广应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及对农药的检测
，尤其涉及一种应用抗体免疫胶体金技术检测有机磷农药残留的测试条及其制备方法。
技术介绍
目前我国对农药残留检测的主要手段仍然依赖液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)、液相色谱-串联质谱法(HPLC/MS/MS)、气相色谱-质谱法(GC/MS)等大型现代分析仪器，这类仪器虽然检测灵敏度高，但仪器的价格昂贵，而且需要受过严格训练的专业技术人员进行操作使用，同时从样品处理到最后得到结果，需要几个小时甚至过夜，期间的操作过程需要几步到十几步，从技术上和经济上都无法满足大批量样品或临时样品的适时快速检测，从而无法保证人们在日常生活中对食品质量安全的要求，因此研究蔬菜及食品中农药残留快速检测技术已成为各级主管部门和广大居民关注的问题，因此尽快研制出能灵敏、快速、准确的检测有机磷的设备与方法，用以检测蔬菜、水果、组织等样品的有机磷残留有着重要的意义。在现有同类技术中，ELISA试剂盒的生产厂商主要是美国EnviroLogixInc.，其检测样本为水体，不能用于检测蔬菜水果中的有机磷农药残留，最低检出限为0.023ppb；此外，国内、外还有多家生产厂商，如美国Neogen公司，国内的浙江后秀生物制品开发有限公司研制生产的多种速测卡，一般均是利用胆碱酯酶抑制法原理检测蔬菜水果中的有机磷农药残留；此类速测卡虽应用国家标准GB/T5009.199，以快速检测蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量，但对检测农药对象尚不够完善，如对毒死蜱的检出限无说明；且以上速测卡仅适用于对少量样品的处理，剪成1cm左右见方碎片，取5g放入带盖瓶中，加入10mL缓冲溶液，震摇50次，静置2min以上即行检测，故实际只能检测到样品表面的农药含量。
技术实现思路
本专利技术目的是针对上述已有技术存在的缺陷，提供一种不需要特定贵重仪器设备辅助，即能快速、准确、特异、方便、低成本地检测蔬菜、水果、食品样品所含有机磷农药残留的简易测试条；本专利技术的另一目的是提供该测试条的制备方法。本专利技术目的通过以下技术方案来实现。一种检测有机磷农药的免疫胶体金测试条，该测试条包括PVC背衬、不干胶粘合剂层、样品垫、包被有抗有机磷农药特异性单克隆抗体--胶体金标记物的结合垫、硝酸纤维素膜、包被有有机磷农药-BSA载体蛋白偶联物的检测带、包被有羊或兔抗鼠IgG的对照带和吸水垫；其中，所述的检测带设置在硝酸纤维素膜的中端左侧，对照带设置在硝酸纤维素膜的中端右侧，在样品垫的顶面上与其下方结合垫的左端相对应处设一限位线，在限位线的右侧设有指向左方的箭头线；上述各部件间的结构是粘合剂层的底面粘合在PVC背衬的顶面上，在粘合剂层的顶面中段粘贴硝酸纤维素膜，粘合剂层的左端先粘贴胶体金结合垫，在其上方再粘贴样品垫，在样品垫与结合垫的右端下方与硝酸纤维素膜的左端上方相叠合形成重叠带A，粘合剂层的右端粘贴吸水垫，吸水垫的左端下方与硝酸纤维素膜的右端上方相叠合形成重叠带B。一种检测有机磷农药免疫胶体金测试条的制备方法，包括以下步骤(1)制备有机磷农药-BSA载体蛋白偶联物将有机磷农药与BSA载体蛋白按1∶5～50(mol/mol)比例混匀，形成稳定的颗粒，通过纯化形成有机磷农药-BSA偶联物；(2)制备抗有机磷农药特异性单克隆抗体用有机磷农药-BSA偶联物多次免疫Balb/c纯系小鼠，取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞在体外融合形成杂交瘤细胞，经选择性培养基筛选得阳性杂交瘤细胞株；通过将阳性杂交瘤细胞注入小鼠腹腔获取腹水或以体外细胞培养收集培养上清液的方式，大量制备抗有机磷农药特异性单克隆抗体；(3)制备羊或兔抗鼠IgG用有机磷农药-BSA偶联物多次免疫小鼠，提取抗血清免疫山羊或家兔，纯化后得羊抗鼠IgG或兔抗鼠IgG；(4)制备胶体金用柠檬酸三钠等还原剂将氯金酸还原成20nm～40nm的胶体金颗粒；(5)制备单克隆抗体胶体金标记将胶体金与抗有机磷农药特异性单克隆抗体按1∶0.005～0.015(ml/mg)比例混匀，形成稳定的胶体颗粒，通过纯化、浓缩形成抗有机磷农药特异性单克隆抗体--胶体金标记物；(6)将抗有机磷农药特异性单克隆抗体--胶体金标记物包被在胶体金结合垫上；将有机磷农药-BSA偶联物包被在硝酸纤维素膜的检测带上；将羊或兔抗鼠IgG包被在对照带上，并充分干燥；(7)将硝酸纤维素膜、胶体金结合垫、样品垫、吸水垫通过不干胶粘合剂层依次粘合在PVC背衬上，切成条状，即制成检测有机磷农药的免疫胶体金测试条。本专利技术检测有机磷农药免疫胶体金测试条具有下列各项优点(1)简单操作人员不需要测试、样品处理等专业知识，普通大众经简单培训即可独立使用，检测过程操作简单，易于推广应用；(2)快速可分批或单个样品及时检测，也可以实现自我检测与现场检测，检测过程仅需要3-15分钟，连同样品处理整个过程也只需要15-30分钟；(3)准确根据免疫学原理进行检测，能特异性识别药物，灵敏度高、重复性好，结果判断形象、直观、准确，简单明了，而且本专利技术一次处理样品为10-30g，经研磨、组织捣碎等处理后，所测结果不仅是样品表面的农药含量值，也是样品组织中的农药含量值，故检测结果更可靠；(4)无毒该产品成分对人体无害，对环境无污染；(5)易保存不需要特殊的保存条件，在一般室温下即可保存与检测；(6)廉价除样品处理外，不需要配置其他仪器、设备，肉眼即可观察结果，产品本身亦很廉价，检测费用比其它检测方法约便宜5-10元/次；(7)本产品的主要技术指标高于同行企业的产品质量标准，如一般速测卡对毒死蜱的检出限无说明，而本测试条对毒死蜱的检测限为0.1mg/kg以下。附图说明图1为本专利技术免疫胶体金测试条的剖面结构示意图。具体实施例方式结合图1，通过以下实施例对本专利技术作进一步的详细说明，但这并不是对本专利技术的具体限定。实施例1(检测有机磷农药的免疫胶体金测试条)一种检测有机磷农药的免疫胶体金测试条，该测试条包括PVC背衬1、不干胶粘合剂层2、聚脂纤维样品垫3、包被有抗有机磷农药特异性单克隆抗体--胶体金标记物的聚脂纤维结合垫4、硝酸纤维素膜5、包被有有机磷农药-BSA偶联物的检测带7、包被有羊或兔抗鼠IgG的对照带8和滤纸吸水垫10；其中，所述的检测带7设置在硝酸纤维素膜5的中端左侧，对照带8设置在硝酸纤维素膜5的中端右侧，两者间隔8-10毫米，在样品垫3的顶面上与其下方结合垫4的左端相对应处设一限位线11，并在限位线11的右侧设有指向左方的箭头线12；上述各部件之间的结构是粘合剂层2的底面粘合在PVC背衬1的顶面上，在粘合剂层2的顶面中段粘贴硝酸纤维素膜5，粘合剂层2的左端先粘贴胶体金结合垫4，在其上方再粘贴样品垫3，在样品垫3与结合垫4的右端下方与硝酸纤维素膜5的左端上方相叠合形成宽度为1-2毫米的重叠带A6，粘合剂层2的右端粘贴吸水垫10，吸水垫10的左端下方与硝酸纤维素膜5的右端上方相叠合形成宽度为1-2毫米的重叠带B9；上述的各部件按所述的结构方式组合成本专利技术的一种检测有机磷农药的免疫胶体金测试条。实施例2(检测有机磷农药免疫胶体金测试条的制备方法1)按以下步骤制备1)制备有机磷农药-BSA载体蛋白偶联物将有机磷农药与BSA牛血清白蛋白偶联物按1∶5(mol/mol)比例混匀，使有机磷农药与本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测有机磷农药的免疫胶体金测试条，其特征在于：该测试条包括ＰＶＣ背衬（１）、不干胶粘合剂层（２）、样品垫（３）、包被有抗有机磷农药特异性单克隆抗体－－胶体金标记物的结合垫（４）、硝酸纤维素膜（５）、包被有有机磷农药－ＢＳＡ载体蛋白偶联物的检测带（７）、包被有羊或兔抗鼠ＩｇＧ的对照带（８）和吸水垫（１０）；所述的检测带（７）设置在硝酸纤维素膜（５）的中端左侧，对照带（８）设置在硝酸纤维素膜（５）的中端右侧，在样品垫（３）的顶面上与其下方结合垫（４）的左端相对应处设一限位线（１１），在限位线（１１）的右侧设有指向左方的箭头线（１２）；上述各部件间的结构是：粘合剂层（２）的底面粘合在ＰＶＣ背衬（１）的顶面上，在粘合剂层（２）的顶面中段粘贴硝酸纤维素膜（５），粘合剂层（２）的左端先粘贴胶体金结合垫（４），在其上方再粘贴样品垫（３），在样品垫与结合垫（３、４）的右端下方与硝酸纤维素膜（５）的左端上方相叠合形成重叠带Ａ（６），粘合剂层（２）的右端粘贴吸水垫（１０），吸水垫（１０）的左端下方与硝酸纤维素膜（５）的右端上方相叠合形成重叠带Ｂ（９）。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：朱亚红，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]