用于测定候选化合物的ＨＤＣ调节活性的荧光极化测定方法，包括下述步骤：ａ）提供反应混合物，包括ＨＤＣ、组氨酸、荧光标记的组胺探针、候选化合物以及抗组胺抗体，所述的抗组胺抗体对组胺相对于组氨酸的选择性大于至少１０倍；ｂ）孵育反应混合物；ｃ）测定在测试化合物存在下是否发生了ＨＤＣ的抑制，其中荧光极化信号的增加表明测试化合物抑制ＨＤＣ的活性。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术的领域涉及用于检测HDC活性的荧光极化测定方法，可以用于疾病诊断以及确证HDC抑制剂。2.
技术介绍
组胺是一种强效生物活性胺，在多种病理以及生理状态中具有活性(Jutel M，Watanabe T，Akdis M，Blaser K，Akdis CAImmune regulation byhistamine.Curr.Opin.Immunol 2002；14735-740)。除了已经良好表征的对急性炎性以及过敏性反应的活性外，组胺调节抗原-特异免疫反应的多个方面(Schneider E，Rolli-Derkinderen M，Arock M，Dy MTrends in histamineresearchnew functions during immune responses and hematopoiesis.TrendsImmunol 2002；23255-263)。最近的发现，例如在免疫活性细胞上发现新的组胺受体(H4)以及H1和H2受体对T辅助细胞极化中作用的证实，引起了人们对组胺触发的免疫调节机制的极大兴趣(Schneider E，Rolli-Derkinderen M，Arock M，Dy M.；Trends Immunol.2002 May；23(5)255-63)。组氨酸脱羧酶(HDC)是组胺生物合成中的限速酶(Watanabe T，Yamatodani A，Maeyama K，Wada HPharmacology ofα-fluoromethylhistidine，a specific inhibitor of histidine decarboxylase.Trends Pharmaceutical Sci1990；11363-367.)。哺乳动物HDC是吡哆醛5-磷酸(PLP)-依赖酶大家族中的成员(Christen P，Mehta PFrom Cofactor to enzymes.The molecular evolutionof pyridoxal-5’phosphate-dependent enzymes.Chemical Record 2001；1436-447.)。HDC在大多数组织中表达但是最高的水平见于皮肤、GI道以及气道。HDC是74Kd酶，能转化为更短的54Kd形式(Yatsunami K，Tsuchikawa M，Kamada M，Hori K，Higuchi TComparative studies of humanrecombinant 74-and 54-kDa L-histidine decarboxylase.J.Biol.Chem.1995；27030813-30817)。二种形式在体外都具有活性，但是二者不同时出现在亚细胞室中；74Kd形式主要见于内质网中(Tanaka S，Nemoto K，Yamamura E，Ohmura S，Ichikawa ADegradation of the 74kDa form of l-histidine de-carboxylase via the ubiquitin-proteasome pathway in a rat basophilic/mast cellline(RBL-2H3).FEBS Letters 1997；417203-207)。最近得到的HDC-缺乏小鼠为内源性组胺在广泛的正常以及疾病过程中作用的研究提供了良好的系统(Ohtsu H，Watanabe TNew functions ofhistamine found in histidine decarboxylase gene knockout mice.BiochemBiophys Res Commun 2003；443-447)。HDC-/-小鼠具有下降数目的肥大细胞以及下降的粒状含量如肥大细胞蛋白酶(Ohtsu H，Tanaka S，Terui T，Hori Y，Makabe-Kobayashi Y，Pejler G，Tchougounova E，Hellman L，Gertsenstein M，Hirasawa N，Sakurai E，Buzas E，Kovacs P，Csaba G，Kittel A，Okada M，Hara M，Mar L，Numayama-Tsuruta K，Ishigaki-Suzuki S，Ohuchi K，Ichikawa A，Falus A，Watanabe T，Nagy AMice lacking histidine decarboxylase exhibit abnormalmast cells.FEBS 2001；50253-56.)。这些小鼠显示了下降的气道高反应性(Kozma GT，Losonczy G，Keszei M，Komlosi Z，Buzas E，Pallinger E，Appel J，Szabo T，Magyar P，Falus A，Szalai CHistamine deficiency in gene-targetedmice strongly reduces antigen-induced airway hyper-responsiveness，eosinophilia and allergen-specific IgE.International Immunol.2003；15963-973，下降的血管通透性(Ohtsu等Plasma extravasation inducedby dietary supplemented histamine in histamine-free mice.Eur J Immunol.2002；321698-708)、下降的皮肤炎症(Ghosh AK，Hirasawa N，Ohtsu H，Watanabe T，Ohuchi KDefective angiogenesis in the inflammatory granulation tissue inhistidine decarboxylase-deficient mice but not in mast cell-deficient mice.J.Exp.Med.2002；195973-982.)以及增加的骨密度(Fitzpatrick LA，Buzas E，GagneTJ，Nagy A，Horvath C，Ferencz V，Mester A，Kari B，Ruan M，Falus A，BarsonyJ.Targeted deletion of histidine decarboxylase gene in mice increases boneformation and protects against ovariectomy-induced bone loss.Proc Natl AcadSci USA.2003；100(10)6027-32)。因此，强效的HDC活性抑制剂可能可以用于过敏、炎性、免疫性、骨以及心血管疾病。组胺也已经证实是一些类型的癌症增殖的积极的调节剂(Hegyesi H，Somlai B，Varga VL，Toth G，Kovacs本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于测定候选化合物的ＨＤＣ调节活性的荧光极化测定方法，包括下述步骤： ａ）提供反应混合物，包括ＨＤＣ、组氨酸、荧光标记的组胺探针、候选化合物以及抗组胺抗体，所述的抗组胺抗体对组胺的选择性比组氨酸大至少１０倍； ｂ）孵育反应混合物； ｃ）测定在测试化合物存在下是否发生了ＨＤＣ的抑制，其中荧光极化信号的增加表明测试化合物抑制ＨＤＣ的活性。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：E迈克尔奥古斯特，丹尼尔拉乔特，
申请(专利权)人：贝林格尔英格海姆药物公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。