一种预测妊娠不良结局发生风险的试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种试剂盒，利用血管和内皮功能调节通路上的重要酶脯氨酸羧肽酶基因的单核苷酸多态性位点Ｅ１１２Ｄ基因型与妊娠不良结局发生率之间的关系，来预测妊娠不良结局的发生风险：当基因型为１１２ＥＥ纯合野生型时，妊娠不良结局发生率较低；当基因型为１１２ＥＤ杂合型或者１１２ＤＤ纯合突变型时，妊娠不良结局发生率较高。该试剂盒含有用于检测生物样品中脯氨酸羧肽酶基因的Ｅ１１２Ｄ多态性位点基因型的多态性分型寡核苷酸，以及相关试剂。本发明专利技术可指导医生早期识别妊娠不良结局的高危妇女，从进入育龄妊娠到生产各期尽早采取预防措施、医疗随诊和适时分娩，能最大限度减少妊娠不良结局的发病率、并发症和病死率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种利用血管和内皮功能调节通路上的重要酶基因多态性预测妊娠不良结局发生风险的试剂盒，包括先兆早产和早产、宫内发育迟缓和低出生体重、妊娠高血压综合症以及先兆子痫和子痫等妊娠不良结局，属于医药生物

技术介绍
生殖生育健康是涉及母婴健康、家庭幸福和人口社会可持续发展的世界性问题。妊娠期间发生先兆早产和早产(Preterm)、胎儿宫内发育迟缓(Uterus GrowthRetardation, UGR)和出生低体重(Low Birth Weight, LBW)、以及妊娠高血压综合症(pregnancy induced hypertension syndrome, PIHs)和其重度临床表现的先兆子痫和子痫等三大妊娠不良结局，是损害围产期母子健康、影响孕产妇和新生儿、婴儿死亡和相关疾患地的最常见和最主要的原因。在孕前、孕中早期预防最常见和主要的生殖健康问题，对提供围产期母婴健康水平意义十分重要。早产(Preterm delivery)指在妊娠28-37足周(196-258日)之间终止而分娩者。先兆早产指在妊娠28-37周之间出现临产前兆，伴有宫颈管展平和宫口扩张。伴有见红和胎膜早破的早产一般较难控制，而一旦出现宫口扩张，颈管展平，则往往发展至早产分娩。全国2002 2003年早产儿回顾调查表明，77所城市医院一年6179名新生儿中，产科出生的早产发生率7.8%，住院病人中早产儿占19. 7%，性比1.67 I。胎龄32-36周占 63. 5%。出生低体重(< 1500g)占32. 3%。早产的高危因素依次为母亲流产史(36. 8% )、 多胎(20. 1% )、胎膜早破(19.8% )和妊高症(12.6% )。中华医学会儿科学分会新生儿学组，中国城市早产儿流行病学初步调查报告，中国当代儿科杂志，2005，7 (I) :25-28其他引发早产的临床常见因素还有母亲的急性感染性疾病、生殖器异常和胎儿本身的疾病。约 30%的早产无明显原因。低出生体重指足月出生的新生儿体重低于2500克。极低出生体重儿< 1500克。 早产和低出生体重儿是围产儿死亡和疾病的主要原因。低出生体重儿发病率为4. 52% (476/10522)，各年间没有明显变化，其中早产发生率达到一半(53. 57% )，足月产和过期产分别为36. 13%和10.29%。王刚琴，袁蜀豫，出生体重儿发生的相关因素分析与结局， 中华现代妇产科学杂志，2006，3 (I) :14临床观察发现，低出生体重的发病因素与早产、胎膜早破、妊娠高血压综合征、多胎妊娠等有关。既往早产次数越多，本次妊娠发生早产的可能越大.第一次妊娠分娩新生儿体重< I. 5kg的产妇，第二次妊娠发生早产的机会为50%。妊娠期女性人群高血压最常见的是妊娠期高血压综合症(简称妊高症)。孕前有原发性高血压者，定义为慢性高血压合并妊娠。孕前血压正常，孕中期才开始血压升高，定义为妊娠高血压综合症。妊高症多发生在妊娠20周后至产后2周，发展为重度妊高症，则为先兆子痫(Preeclampsia)和子痫(Eclampsia)。我国参照WHO的建议分类标准,1983年制定了现行分类法(见表I)余振球等主编，《实用高血压学》科学出版社，1998年第二版， 609-23 页表I.妊娠高血压综合症分类权利要求1.用于扩增含E112D单核苷酸多态性位点的脯氨酸羧肽酶基因片断的特异性引物和限制性内切酶Avail及其缓冲液在制备用于预测妊娠不良结局发生风险的试剂盒中的应用，其中，所述特异性引物序列为正向引物5’ ATGGTTTGCCAAAAGGTTCA 3’，反向引物5’ TGTCACCAAAGGGGAGAGAC 3’ ；所述限制性内切酶AVaII能够特异性识别并切断所述位点处的突变型序列；利用脯氨酸羧肽酶基因的E112D单核苷酸多态性位点基因型与妊娠不良结局发生率之间的关系，预测妊娠不良结局的发生风险当基因型为112EE纯合野生型时，妊娠不良结局发生率较低；当基因型为112ED杂合型或者112DD纯合突变型时，妊娠不良结局发生率较高；所述妊娠不良结局包括先兆早产、早产、宫内发育迟缓、低出生体重、妊娠高血压综合症以及先兆子痫和子痫。2.用于扩增含E112D单核苷酸多态性位点的脯氨酸羧肽酶基因片断的特异性引物和检测脯氨酸羧肽酶基因E112D单核苷酸多态性位点的野生型探针和/或突变型探针在制备用于预测妊娠不良结局发生风险的试剂盒中的应用，其中，所述特异性引物序列为正向引物5’ GTTTGCCAAAAGGTTCAGTGACTT 3’，反向引物5’ TCTCCATAGTATCGATGTTCAGCAAAC 3’ ；所述探针为Taqman探针,其序列为野生型探针VIC-5’ CATAGCTTTCAGTTCCTCA 3’ -NFQ 对应于“T”等位基因，携带VIC荧光报告集团；突变型探针FAM-5’ ATAGCTTTCAGGTCCTCA 3’ -NFQ 对应于“G”等位基因，携带FAM荧光报告集团；利用脯氨酸羧肽酶基因的E112D单核苷酸多态性位点基因型与妊娠不良结局发生率之间的关系，预测妊娠不良结局的发生风险当基因型为112EE纯合野生型时，妊娠不良结局发生率较低；当基因型为112ED杂合型或者112DD纯合突变型时，妊娠不良结局发生率较高；所述妊娠不良结局包括先兆早产、早产、宫内发育迟缓、低出生体重、妊娠高血压综合症以及先兆子痫和子痫。3.如权利要求I或2所述的应用，其特征在于，所述试剂盒进一步包括核酸提取试剂、 PCR反应试剂和/或阳性对照模板。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述PCR反应试剂含有四种脱氧单核苷酸、 耐热DNA聚合酶及其反应缓冲液。5.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述阳性对照模板包括含有脯氨酸羧肽酶基因E112D单核苷酸多态性位点的纯合野生型、杂合型和/或纯合突变型序列的PCR产物、 克隆质粒或基因组DNA。专利摘要本专利技术提供了一种试剂盒，利用血管和内皮功能调节通路上的重要酶脯氨酸羧肽酶基因的单核苷酸多态性位点E112D基因型与妊娠不良结局发生率之间的关系，来预测妊娠不良结局的发生风险当基因型为112EE纯合野生型时，妊娠不良结局发生率较低；当基因型为112ED杂合型或者112DD纯合突变型时，妊娠不良结局发生率较高。该试剂盒含有用于检测生物样品中脯氨酸羧肽酶基因的E112D多态性位点基因型的多态性分型寡核苷酸，以及相关试剂。本专利技术可指导医生早期识别妊娠不良结局的高危妇女，从进入育龄妊娠到生产各期尽早采取预防措施、医疗随诊和适时分娩，能最大限度减少妊娠不良结局的发病率、并发症和病死率。文档编号A61B10/00GKCN101063677 B发布类型授权 专利申请号CN 200610011837公开日2012年7月25日 申请日期2006年4月30日专利技术者吴涤, 张岩, 徐希平, 李志平, 汪霖, 王晓斌, 王滨燕, 臧桐华, 邢厚恂 申请人:安徽省生物医学研究所, 深圳奥萨医药有限公司导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan专利引用 (2),本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于预测妊娠不良结局发生风险的试剂盒，利用脯氨酸羧肽酶基因的Ｅ１１２Ｄ单核苷酸多态性位点基因型与妊娠不良结局发生率之间的关系，预测妊娠不良结局的发生风险；当基因型为１１２ＥＥ纯合野生型时，妊娠不良结局发生率较低；当基因型为１１２ＥＤ杂合型或者１１２ＤＤ纯合突变型时，妊娠不良结局发生率较高；该试剂盒包括用于检测生物样品中脯氨酸羧肽酶基因的Ｅ１１２Ｄ多态性位点基因型的多态性分型寡核苷酸，以及相应的反应体系。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：邢厚恂，张岩，王滨燕，李志平，吴涤，王晓斌，臧桐华，徐希平，
申请(专利权)人：安徽省生物医学研究所，
类型：发明
国别省市：34[中国|安徽]