本发明专利技术公开了特异性结合人白细胞介素-12(hIL-12)的人抗体,优选重组人抗体。优选抗体对hIL-12具有高度亲和力,而且在体外和体内中和hIL-12活性。本发明专利技术的抗体可以是全长抗体或其抗原结合部分。本发明专利技术的抗体或抗体部分可用于检测hIL-12以及抑制例如患有其中hIL-12活性有害的疾病的病人体内的hIL-12活性。本发明专利技术还包括用于表达本发明专利技术重组人抗体的核酸、载体和宿主细胞以及合成所述重组人抗体的方法。(*该技术在2020年保护过期,可自由使用*)
【技术实现步骤摘要】
本申请是申请日为2000年3月24日,申请号为00807783.5,专利技术名称为“结合人IL-12的人抗体及其生产方法”的专利技术专利申请的分案申请。相关申请本申请是要求1999年3月25日提交的美国临时申请序号60/126,603的优先权的非临时申请,所述临时申请的内容通过引用结合到本文中。
技术介绍
人白细胞介素12(IL-12)最近鉴定为一种细胞因子,它具有独特的结构和多效作用(Kobayashi等(1989)J.Exp Med.170827-845;Seder等(1993)Pro.Natl.Acad.Sci.9010188-10192;Ling等(1995)J.Exp Med.154116-127;Podlaski等(1992)Arch.Biochem.Biophys.294230-237)。IL-12在与若干涉及免疫和炎症反应的疾病有关的病理学中起着重要的作用。一篇关于IL-12、其生物活性和在疾病中的作用的综述可见Gately等(1998)Ann Rev.Immunol.16495-521。在结构上IL-12是一种异源二聚体蛋白(称为“p70亚单位”),它包含通过二硫桥将二者连接在一起的35kDa亚单位(p35)和40kDa亚单位(p40)。所述异源二聚体蛋白主要由诸如单核细胞、巨噬细胞和树突细胞的抗原提呈细胞产生。这些细胞类型还分泌相对于p70亚单位过量的p40亚单位。p40和p35亚单位在遗传学上是不相关的,而且也没有关于它们具有生物活性的报道,尽管p40同源二聚体可能具有IL-12拮抗剂的作用。在功能上,IL-12在调节抗原特异性1型T辅助(Th1)淋巴细胞和2型T辅助(Th2)淋巴细胞之间的平衡中起重要作用。Th1和Th2细胞控制自身免疫性疾病的发生和发展,IL-12在调节Th1淋巴细胞的分化和成熟中起重要的作用。Th1细胞释放的细胞因子是炎症性细胞因子,包括γ干扰素(IFNγ)、IL-2和淋巴毒素(LT)。Th2细胞分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10和IL-13促进体液免疫、过敏反应和免疫抑制。与Th1反应在自身免疫性疾病中占优势以及IFNγ的促炎活性一致的是,IL-12可能在与许多诸如类风湿性关节炎(RA)、多发性硬化(MS)和节段性回肠炎的自身免疫性疾病和炎症疾病有关的病理学中起主要作用。已经证实MS病人的IL-12的表达增加,因为文献证实急性MS斑中存在不同水平的p40 mRNA。(Windhagen等,(1995)J.Exp.Med.1821985-1996)。另外,用MS患者表达CD40L的T细胞体外刺激抗原提呈细胞使IL-12产生增加(与对照T细胞相比),这与CD40/CD40L相互作用是IL-12的有效诱导剂的观测结果一致。与健康对照相比,在RA患者滑液中观测到IL-12 p70水平升高(Morita等(1998)Arthritis and Rheumatism.41306-314)。在RA滑液中细胞因子信使核酸(mRNA)表达类型鉴定主要为Th1细胞因子。(Bucht等,(1996)Clin.Exp.Immunol.103347-367)。IL-12似乎还在与节段性回肠炎(CD)有关的病理学中起重要作用。在节段性回肠炎患者的肠粘膜中观测到IFNγ和IL-12表达增加(Fais等(1994)J.Interferon Res.14235-238;Parronchi等,(1997)Am.J.Path.150823-832;Monteleone等,(1997)Gastroenterology.1121169-1178和Berrebi等,(1998)Am.J.Path.152667-672)。CD患者的粘膜固有层的T细胞的细胞因子分泌类型的特征是主要为Th1反应,包括IFNγ水平明显升高(Fuss等,(1996)J.Immunol.1571261-1270)。而且,CD患者的结肠组织切片显示丰富的表达IL-12的巨噬细胞和表达IFNγ的T细胞(Parronchi等(1997)Am.J.Path.150823-832)。因为人IL-12在各种人类疾病中的作用,因此设计了各种治疗策略来抑制或中和IL-12活性。尤其是寻找结合并中和IL-12的抗体用作抑制IL-12活性的手段。某些最早期的抗体为小鼠单克隆抗体(mAb),它由IL-12免疫小鼠的淋巴细胞制备的杂交瘤分泌(参见例如Strober等的世界专利申请公布号WO 97/15327;Neurath等(1995)J.Exp.Med.1821281-1290;Duchmann等(1996)J.Immunol.26934-938)。这些小鼠IL-12抗体的体内应用受到限制,因为存在将小鼠抗体给予人类的有关问题,例如血清半衰期短、不能激发某些人类效应物功能以及在人体内诱发抗小鼠抗体的不需要的免疫反应(“human anti-mouseantibody”(HAMA)反应)。一般来说,试图解决在人类使用完全小鼠抗体有关问题的措施包括通过遗传工程改进所述抗体使其成为更接近人类的抗体。例如制备了嵌合抗体,嵌合抗体中所述抗体链的可变区是鼠源性的,而所述抗体链的恒定区是人源性的(Junghans等(1990)Cancer Res.501495-1502;Brown等(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 882663-2667;Kettleborough等(1991)Protein Engineering.4773-783)。但是因为这些嵌合抗体和人源化抗体仍然保留部分鼠序列,所以它们仍然可能激发不需要的免疫反应、人抗嵌合抗体(HACA)反应,当长时间给予所述抗体时尤其如此。鼠抗体或其衍生物(例如嵌合抗体或人源化抗体)的优选IL-12抑制剂应该为完全人抗IL-12抗体,因为这样的抑制剂不会激发HAMA反应,即使长期使用也不会激发HAMA。然而,本领域没有关于这类抗体的介绍,因此仍然需要这样的抗体。专利技术概述本专利技术提供结合人IL-12的人抗体。本专利技术还涉及应用本专利技术的人抗IL-12抗体治疗或预防其病理学涉及IL-12的急性或慢性疾病或病症。一方面,本专利技术提供结合人IL-12的分离人抗体或其抗原结合部分。在一个实施方案中,本专利技术提供选择性突变的人IL-12抗体,包括在具有增强活性的氨基酸残基的优选选择性诱变位点、接触位点或超突变位点选择性突变人抗体或其抗原结合部分,使得它结合人IL-12。在一个优选实施方案中,本专利技术提供选择性突变的人IL-12抗体,包括在具有增强活性的氨基酸残基的优选选择性诱变位点选择性突变人抗体或其抗原结合部分,使得它结合人IL-12。在另一个优选实施方案中,在一个以上具有增强活性氨基酸残基的优选选择性诱变位点、接触或超突变位点选择性突变所述选择性突变的人IL-12抗体或其抗原结合部分。在另一个优选实施方案中,在3个以下优选选择性诱变位点、接触或超突变位点选择性突变选择性突变的人IL-12抗体或其抗原结合部分。在另一个优选实施方案中,在2个以下的优选选择性诱变位点、接触或超突变位点选择性突变所述选择性诱变的人IL-12抗体或其抗原结合部分。在再一优选实施方案中,选择性突变所述选择性突变的人IL-12本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分离的人抗体或其抗原结合部分,它: a)以1×10↑[-6]M或1×10↑[-6]M以下的IC↓[50]抑制体外PHA测定中的植物凝集素母细胞增殖; b)包括含SEQ ID NO:1氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:3氨基酸序列的重链CDR2和含SEQ ID NO:5氨基酸序列的重链CDR1,或者为其在接触位点或超突变位点存在一个或多个氨基酸取代的突变体,其中所述突变体的k↓[off]速率较所述包括含SEQ ID NO:1氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:3氨基酸序列的重链CDR2和含SEQ ID NO:5氨基酸序列的重链CDR1的抗体高10倍以下;以及 c)包括含SEQ ID NO:2氨基酸序列的轻链CDR3、含SEQ ID NO:4氨基酸序列的轻链CDR2和含SEQ ID NO:6氨基酸序列的轻链CDR1,或者为其在接触位点或超突变位点存在一个或多个氨基酸取代的突变体,其中所述突变体的k↓[off]速率较所述包括含SEQ ID NO:2氨基酸序列的轻链CDR3、含SEQ ID NO:4氨基酸序列的轻链CDR2和含SEQ ID NO:6氨基酸序列的轻链CDR1的抗体高10倍以下。...
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员:JG萨菲尔德,M罗古斯卡,M帕斯金德,S巴纳吉,DE特拉西,M怀特,Z凯马克卡兰,B拉布科夫斯基,P萨科拉法斯,S弗里德里希,A迈勒斯,GM韦德曼,A文图里尼,NW瓦尼,A维多姆,JG埃尔文,AR敦坎,EJ德比施雷,S卡门,S史密斯,TL霍尔特特,SL杜富,
申请(专利权)人:艾博特股份有限两合公司,
类型:发明
国别省市:DE[德国]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。