对表面表达有MCSP的细胞的细胞毒性的介导制造技术

本发明专利技术涉及癌症的诊断和治疗，特别涉及对肿瘤细胞的细胞毒性介导；更特别涉及使用癌症缓解性抗体（ＣＤＭＡＢ）来启动细胞毒性反应，可根据情况选择与一种或多种化疗剂联合使用。本发明专利技术进一步涉及使用本发明专利技术ＣＤＭＡＢ进行结合分析。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及癌症的诊断和治疗，特别涉及对肿瘤细胞的细胞毒 性介导；更特别涉及使用癌症缓解性抗体(CDMAB)来启动细胞毒性 反应，可根据情况选择与一种或多种化疗剂联合使用。本专利技术进一 步涉及使用本专利技术CDMAB进行结合分析。
技术介绍
许多开发针对人转移性黑色素瘤细胞系的抗体的研究人员们各 自独立鉴定出黑色素瘤相关硫酸软骨素蛋白多糖(MCSP)。他们发现 有一些抗体能与黑色素瘤细胞表面的特定抗原发生反应。由于各自 独立开发，靶抗原出现多种叫法，后来统一确定为MCSP。因此MCSP 又称为高分子量黑色素瘤相关抗原(HMW-MAA)、人黑色素瘤蛋白多 糖(HMP)、黑色素瘤相关蛋白多糖抗原(MPG)和黑色素瘤硫酸软骨 素蛋白多糖(mel-CSPG)，现己鉴定出MCSP是各种特定抗体的抗原， 其中一些抗体会在下文阐述。还发现MCSP与大鼠蛋白多糖NG2之间 的同源性达80%以上，所以MCSP又称为大鼠蛋白多糖NG2。MCSP是一种糖蛋白-蛋白多糖复合体，由一个250kDa的N连接 糖蛋白和一个大于450kDa的蛋白多糖成分组成。核心糖蛋白以游离 或硫酸软骨素修饰的形式存在于黑色素瘤细胞表面。由于成功克隆 到MCSP，所以它的一些结构特征被鉴定出来，它有3个胞外域，共 包含10个半胱氨酸(5个可能的二硫桥)、15个可能的N连接糖基 化位点和11个潜在的硫酸软骨素连接位点。跨膜部分有1个半胱氨 酸，其功能还不清楚。胞质域有3个苏氨酸残基，可能是蛋白激酶C 进行磷酸化的位点，不过至今还未发现MCSP被磷酸化。 已发现大多数恶性黑色素瘤中都表达有MCSP，最初认为它在正 常细胞和其它类型的肿瘤上很少见。早先得出此结论的研究曾采用免疫组化技术(IHC)，用抗MCSP抗体B5检测经甲醛或甲醇固定的 正常组织和肿瘤组织上MCSP的分布。这一研究发现，所检测的22 例黑色素瘤和2例星形细胞瘤中与抗体B5发生反应的分别为17例 和2例，而检测的23例癌症中无一发生反应。检测的22例正常组 织中，发现B5只与皮肤角化细胞、肺泡上皮、毛细血管内皮结合。另一项研究是利用抗MCSP抗体9.2.27和冰冻组织切片检测 MCSP的组织分布。再次发现检测的所有黑色素瘤组织和细胞系中都 发生反应，而6例不同类型的癌肿瘤中均无反应。7例胎儿组织中只 观察到皮肤内有反应，主动脉中有微弱反应，而成人组织中，13例 组织中只看到3例有反应。后续研究是利用识别MCSP不同表位的抗MCSP抗体9. 2. 27、 225. 28S和A0122和冰冻组织来检测MCSP分布。研究发现，所有抗 MCSP抗体的染色图谱近似，并且与神经、间充质、上皮来源的正常 细胞和恶性肿瘤都发生反应而以前认为是MCSP阴性结果。尤其是， 抗体B5与检测的24例器官中的各种上皮、结缔、神经和肌肉组织 都发生反应，并且所检测的34例各种类型的肿瘤中有28例发生反 应。研究者解释说，出现这种差异是由于他们使用的IHC技术经过 了改进，变得更加稳定，他们注意到固定方法的选择非常重要，并 且猜测，MCSP抗原的一个重要特征是对IHC技术中的方法歩骤很敏 感。为搞清楚MCSP在超微结构水平的定位，研究者们又开展了进一 步研究。借助电子显微镜的免疫定位研究证实，MCSP几乎专一性存 在于黑色素瘤细胞表面的微区——微端丝中，而微端丝可能在细胞-细胞接触和细胞-基质粘连中发挥作用。1996年，MCSP被克隆出后，即以MCSP cDNA作探针，对肿瘤细 胞系和正常人组织中分别表达的MCSP进行了 northern印迹分析。所检测的8例不同肿瘤细胞系中，只在黑色素瘤细胞系中观察到MCSP表达而在所检测的16例正常成人和4例正常胎儿组织中未发 现MCSP表逸MCSP在组织中定位的不同研究结果所表现出的这种不 一致说明，可能还需要进一步研究以阐明该抗原真正的表达图谱， 或者对报道结果之间的差异作出解释。因为已知蛋白多糖能介导细胞-细胞和细胞-胞外基质(ECM)间 的相互作用，所以MCSP在这些过程中发挥的作用业已研究清楚。研 究显示，MCSP能促进ci4卜整合素介导的粘连及黑色素细胞的扩散。 还有研究指出，MCSP核心蛋白发出信号，诱导pl3(T"募集及酪氨酸 磷酸化，从而可调节细胞粘连和运动，帮助肿瘤侵入和转移。综合 这些研究成果可见，MCSP可通过激活整合素和激发细胞骨架重排路 径来促进黑色素细胞粘连。研究还发现MCSP可能通过其硫酸软骨素成分与膜3型基质金属 蛋白酶(MT3-MMP)建立某种联系。有研究暗示，体内黑色素瘤表达 的MT3-MMP有可能促进正在生长的肿瘤附近的ECM蛋白的降解，从 而为肿瘤提供扩张空间。所以，MT3-醒P与MCSP之间可能存在促进 黑色素瘤侵入的激活步骤。使用抗MCSP抗体进行的体外分析试验也已陆续展开，以査明 MCSP在肿瘤侵入和转移过程中所起的作用。抗体9. 2. 27被用来评价 MCSP在不依赖锚定生长(anchorage-ind印endent growth)中所发 挥的作用。黑色素瘤细胞在含抗体9.2.27的软琼脂中进行培养，结 果显示形成的细胞克隆数量特异性减少67-74%。这些研究结果暗 示，MCSP可能参与细胞间相互作用，使细胞不依赖锚定生长。上述 研究作者还通过测定牛主动脉内皮(BAE)细胞基膜上黑色素瘤细胞 M14粘连的试验来检测9. 2. 27对MCSP的抑制效果。该试验中，对 9. 2. 27与单克隆抗体W6/32 (针对所有I类组相容性抗原)对照的 疗效进行比较。将M14对照细胞和经抗体预先处理的M14细胞铺在 BAE细胞基膜上。结果显示，9.2.27处理的细胞中，27%的细胞粘连受到明显抑制，而W6/32处理的细胞中没有观察到显著影响。通过 扫描电子显微术在超微结构水平上证实用9. 2. 27进行细胞预处理所 获得的另一更显著作用是细胞扩散受到抑制。针对黑色素瘤细胞开发的、经证实能特异性识别MCSP的许多抗 体己进行了体外和体内试验来确定其抗癌效果。单克隆抗体9. 2. 27识别MCSP的核心糖蛋白成分，是最早用于 研究其肿瘤抑制特性的抗体之一。Bumol等人就9. 2. 27与9. 2. 27-白喉毒素A (DTA)结合物对裸鼠黑色素瘤的免疫治疗效果开展了研 究。最先进行的是体外细胞毒性试验，该试验通过向蛋白中掺入 蛋氨酸标记来检测9. 2. 27和9. 2. 27-DTA结合物对M21人黑色素瘤 细胞中蛋白合成的影响。结果显示，9. 2. 27-DTA结合物能显著抑制 M21黑色素瘤细胞的蛋白合成不过未结合的DTA产生的影响更大一 些。而单使用9.2.27所产生的影响极小。另外，又对9.2.27和 9.2.27-DTA结合物抗裸鼠中人黑色素瘤的效果进行了研究。将M21 肿瘤碎块植入小鼠皮下，让其生长3天，然后在第3天用9. 2. 27或 9.2.27-DTA结合物治疗小鼠，并每隔3天治疗一次。比较受治小鼠 和未受治对照小鼠的肿瘤体积。第18天(数据报告的最后一天)， 与未治疗对照相比，分别经9. 2. 27治疗和9. 2. 27-DTA结合物治疗 的小鼠显示其肿瘤生长抑制率分别为64%和52%。在最初的这项研究 中，作者得本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗癌症患者的方法，其包括：　　　　向所述患者施用抗癌抗体或其片段，该抗体是根据癌症治疗所使用的抗癌抗体的制备方法制备所得，所述抗体或其片段的特征在于对癌组织细胞有细胞毒性，而对非癌细胞基本上为良性；　　　　其中，将所述抗体或其片段与药物可接受的佐剂混合后，按有效量施用以介导所述癌症的治疗；　　　　所述抗体是分离出的单克隆抗体或其抗原结合片段，它能与所述癌组织表达的抗原性部分结合，所述抗原性部分的特征在于能被具有保藏于ＡＴＣＣ、保藏号为ＰＴＡ－５６４３的克隆所编码的单克隆抗体鉴别特征的抗体结合。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：大卫SF杨，苏姗E哈恩，海伦P芬得利，艾莉森L费里，
申请(专利权)人：阿里乌斯研究公司，
类型：发明
国别省市：CA[加拿大]