一种研究RBM8A基因促进脑胶质母细胞瘤增殖功能的研究方法技术

本发明专利技术涉及了一种研究RBM8A基因促进脑胶质母细胞瘤增殖功能的研究方法。1)Western blot分析胶质母细胞瘤细胞系RBM8A表达，2)慢病毒介导敲除和过表达RBM8A，3)干扰RBM8A基因表达对胶质母细胞瘤细胞增殖的影响，4)在动物水平，观察敲除RBM8A对胶质母细胞瘤增殖的影响，5)通过Western blot分析检测干扰RBM8A基因表达后的胶质母细胞瘤细胞系中，Notchl、磷酸化STAT3(p‑STAT3)、总STAT3(STAT3)、磷酸化H3(p‑H3)、总H3(H3)和肌动蛋白的情况。Notch/STAT3通路是RBM8A介导的胶质母细胞瘤细胞增殖的机制。本发明专利技术提供了一种胶质母细胞瘤治疗的新思路，为研究胶质母细胞瘤药物治疗靶点提供了新途径。

【技术实现步骤摘要】
一种研究RBM8A基因促进脑胶质母细胞瘤增殖功能的研究方法
本专利技术属于基因工程
，它涉及一种干扰RBM8A基因表达引起胶质母细胞瘤增殖的分子机制及预警方法。
技术介绍
多形胶质母细胞瘤，又称胶质母细胞瘤，是一种高度恶性的脑肿瘤，预后极差。胶质母细胞瘤的死亡率居高不下，多数患者的五年生存率在3％至9％之间[OmuroA,DeangelisLM.GlioblastomaandOtherMalignantGliomasAClinicalReview[J].JAMATheJournaloftheAmericanMedicalAssociation,2013,310(17):1842-1850.]。因此识别与胶质母细胞瘤相关的新标记物将有助于早期诊断和治疗胶质母细胞瘤。无义介导的mRNA降解(NMD)途径中关键因子的异常表达与胶质母细胞瘤相关。NMD功能丧失可促进肿瘤生长和侵袭[TheUPF1RNAsurveillancegeneiscommonlymutatedinpancreaticadenosquamouscarcinoma[J]本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种研究RBM8A基因促进脑胶质母细胞瘤增殖功能的研究方法，包括以下步骤：/n(1)Westernblot分析胶质母细胞瘤细胞系RBM8A表达。/nWesternblot分析的方法如下：/n用兔抗人RBM8A抗体和小鼠抗β-肌动蛋白抗体。用含有蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲液溶解细胞组织。将裂解物样品在8-12％SDS-PAGE凝胶上分离，分离后转移到聚偏氟乙烯膜上。在4℃下与初级抗体孵育过夜，然后与辣根过氧化物酶结合的二级抗体孵育。使用ECL试剂盒检测结合抗体。/n(2)慢病毒载体介导RBM8A基因敲除，方法如下：/n根据引物设计原则，设计3个能够特异敲除RBM8A的引物，RBM8A-shR...

【技术特征摘要】
1.一种研究RBM8A基因促进脑胶质母细胞瘤增殖功能的研究方法，包括以下步骤：
(1)Westernblot分析胶质母细胞瘤细胞系RBM8A表达。
Westernblot分析的方法如下：
用兔抗人RBM8A抗体和小鼠抗β-肌动蛋白抗体。用含有蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲液溶解细胞组织。将裂解物样品在8-12％SDS-PAGE凝胶上分离，分离后转移到聚偏氟乙烯膜上。在4℃下与初级抗体孵育过夜，然后与辣根过氧化物酶结合的二级抗体孵育。使用ECL试剂盒检测结合抗体。
(2)慢病毒载体介导RBM8A基因敲除，方法如下：
根据引物设计原则，设计3个能够特异敲除RBM8A的引物，RBM8A-shRNA：5‘-AGAGCATTCACAAACAACTGAA-3’(RBM8A-KD1)和5‘-CATCAGCGTTGGTGTGTGT-3’(RBM8A-KD2)。制备重组RBM8A-shRNA慢病毒和阴性对照(NC)慢病毒。在U87-MG细胞系中感染敲除RBM8A基因的慢病毒载体(RBM8A-KD)，获得稳定感染敲除RBM8A表达的细胞系和对照细胞系。
(3)慢病毒介导RBM8A过表达，方法如下：
利用pMSCV-IRES-GFP载体构建标...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹东华，林燕，徐宁，王浩，李荣杰，覃刚，胡北泉，
申请(专利权)人：南宁市第一人民医院，
类型：发明
国别省市：广西;45