神经营养因子制造技术

本发明专利技术涉及ｎｅｕｂｌａｓｔｉｎ神经营养因子多肽，编码ｎｅｕｂｌａｓｔｉｎ多肽的核酸和特异性结合ｎｅｕｂｌａｓｔｉｎ多肽的抗体，及其制备和使用方法。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
神经营养因子本申请是申请号99808289.9、申请日为1999年7月5日、专利技术名 称为"神经营养因子，，的专利技术专利申请的分案申请。
技术介绍
本专利技术涉及神经营养因子多肽，编码神经营养因子多肽的核酸和 特异性结合神经营养因子的抗体。
技术介绍
神经营养因子是天然蛋白质，它可促使神经元细胞和组织的存 活，维持其表型分化，防止其退化并增强其活性。神经营养因子分离 自神经组织和由神经系统支配的非-神经组织，并被分为功能和结构相 关的组，也称家族，超家族或亚族。神经营养因子超家族包括成纤维 细胞生长因子，神经营养蛋白和转化生长因子-P(TGF-P)超家族。可根 据其物理结构，与其复合受体的相互作用及其对多种类型神经细胞的 影响来区分各种神经营养因子。被分在TGF-P超家族(Massague等， Trends in Cell Biology, 1994， 4 172-178)的是得自胶质细胞系的神经营 养因子配体("GDNF"; WO93/06116,列入本文作为参考)，其包括 GDNF， persephin ("PSP，，； Milbrandt等，神经元，1998 20 245-253，列 入本文作为参考)和neurturin ("NTN"; WO97/08196,列入本文作为参 考)。GDNF亚族的配体都能通过RET受体酪氨酸激酶诱导信号传递。 GDNF亚族的这三种配体对神经营养受体家族，GFR受体的相对亲和 性有所不同。鉴于神经营养因子对神经元组织的影响，仍需要鉴定和表征其它 神经营养因子以用于诊断和治疗神经系统疾病。专利技术简述本专利技术涉及新的神经营养因子，本文称之为"neuWastin",或 "NBN" 。 neublastin属于GDNF亚族的成员，因为它与其它GDNF配体共享同源性区域(见下文表3和4),并能与RET相互作用(例见 Airaksinen等，Mol， Cell. Neuroscience, 1999 13 313-325)， neublastin是 新的，独特的神经营养因子。与其它GDNF配体不同的是，neublastin 表现出与GFRa3-RET受体复合物的高亲和性，而且，其氨基酸序列中具有独特的亚区。本文所用"neublastin多肽"是具有神经营养活性的多肽(如实施 例6，7,8和9所述)，其包括具有与人"neublastin"多肽的同源性至少 为70%的氨基酸序列的多肽及其变体和衍生物，所述人"neublastin" 多肽示于SEQ ID NO:2的AA—95-AA10S, SEQ ID NO:2的AArAA105, SEQ ID NO:4的AA_97-AA140, SEQ ID NO:4的AA_41-AA14。(pro)， SEQ ID NO:4的AArAA14o， SEQ ID NO:9的AA_8o-AA14o("野生型" prepro)， SEQ ID NO:9的AA_4i-AA140(pro), SEQ ID NO:5的AAr AA!4q(成熟的140AA), SEQ ID NO:6的AA广AAu6(成熟的116AA), SEQ ID NO:7的AA纩AAn3(成熟的113AA), SEQ ID NO:IO的AArAA"o(成 熟的140AA), SEQ ID NO:ll的AA纩AAn6(成熟的116AA), SEQ ID NO:12的AA纩AAu3(成熟的113AA)。另夕卜，本专利技术还包括具有与鼠"neublastin"多肽的同源性至少为70%的氨基酸序列的多肽，所述鼠"neublastin"多肽示于SEQ ID NO: 16的AAi-AA^,上文所鉴定的neublastin多肽的C-末端序列优选具有SEQ ID NO:2的AA72-AAkj5(即SEQ ID NO:9的AAn)7-AAM。)所示的氨基酸序 列，更优选具有SEQ ID NO:2的AA41-AA節(即SEQ ID NO:9的 AA76-AA剧)所示的氨基酸序列，或SEQ ID NO:16的AA191-AA224所示 的氨基酸序列。另外，优选neublastin多肽保留7个保守的Cys残基，所述残基 是GDNF家族和TGF-P超家族所特有的残基。优选neublastin多肽具有与上述序列和SEQ ID NO:16的AAr AAm4的同源性大于85%，最优选大于95%的氨基酸序列，上述序列 即为SEQ ID NO:2的AA_95-AA105， SEQ ID NO:2的AAi-AA105， SEQ ID NO:4的AA_9rAA140， SEQ ID NO:4的AA_41-AA140， SEQ ID NO:4的AArAA14o， SEQ ID NO:9的AA-8o誦AAjl4o("野生型"prepro)， SEQ ID NO:9的AA_41-AA14()(pro)， SEQ ID NO:5的AArAA^(成熟的140AA), SEQ ID NO:6的AArAAn6(成熟的116AA), SEQ ID NO:7的AAr AAu3(成熟的113AA), SEQ ID NO:IO的AArAA"o(成熟的140AA), SEQ ID NO:ll的AArAAn6(成熟的116AA), SEQ ID NO:12的AAr AAu3(成熟的113AA)。本文所用"neublastin核酸"是编码neublastin多肽的多核苷酸。 因此，分离的neublastin核酸是具有核苷酸密码子开放阅读框的多核 苷酸分子，当其暴露于翻译所需的适当组分中时可编码neublastin多 肽。本专利技术的neublastin核酸可以是RNA或DNA,例如基因组DNA, 或与neublastin mRNA互补和/或由其转录的DNA("cDNA，，)。因此， 本专利技术的neublastin核酸还包括在高度严紧的杂交条件下与编码 neublastin多肽的多核苷酸特异性杂交的多核苷酸分子。本专利技术还涉及 核酸引物或其片段，所述引物可用于鉴定，分离和扩增编码neublastin 多肽的多核苷酸。在本专利技术的某些实施方案中，某些引物是neublastin-特异性的探针，所述探针可用于与neublastin核酸杂交，而不与编码 GDNF家族其它成员的核酸杂交。"特异的"，"特异性"或"特异 地"指的是能与neublastin核酸杂交，而不能与非-neublastin核酸杂 交，包括不能与编码GDNF S己体(例如GDNF， persephin和neurturin) 的独特核酸杂交。在另一个实施方案中，通过具有互补核酸序列，或阐明它能在高 度严紧的杂交条件下与编码neublastin的多核苷酸特异性杂交，而将 本专利技术的neublastin核酸鉴定为与编码neublastin多肽的多核苷酸互补 的核酸。特定的neublastin核酸包括但不限于本文所示的核酸序列和 SEQ ID NO:l， SEQ ID NO:3， SEQ ID NO:8， SEQ ID NO: 13， SEQ ID NO:14， SEQ ID NO:15， SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:30以及引物SEQ IDNO:17-28，31和32所示的核酸序列。本专利技术的neubla本文档来自技高网...

【技术保护点】
分离的Ｎｅｕｂｌａｓｔｉｎ核酸，所述核酸含有选自下列的序列：ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１２的核苷酸序列；ｂ）核酸序列，其含有编码表达包含ＳＥＱＩＤＮＯ：１２的Ｎｅｕｂｌａｓｔｉｎ多肽或由其衍生的神经营养多肽的开放阅读框，其中，所述神经营养多肽通过在所述Ｎｅｕｂｌａｓｔｉｎ多肽的序列中添加、缺失和／或替代少于１０．５个氨基酸或通过对该序列中少于１０％的残基进行保守替代而衍生自所述Ｎｅｕｂｌａｓｔｉｎ多肽，其中，所述神经营养多肽具有在ＳＥＱＩＤＮＯ：１２的第１６、４３、４７、８０、８１、１０９和１１１位保守的７个半胱氨酸残基；ｃ）核酸，其在高度严紧的溶液杂交条件下能与具有ＳＥＱＩＤＮＯ：１２核苷酸序列的核酸或其互补链特异性杂交，并编码神经营养多肽。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：TE约翰森，N布洛姆，C汉森，
申请(专利权)人：恩斯吉恩有限公司，
类型：发明
国别省市：DK[丹麦]