畜水产品中残留动物用药物的提取液制造技术

本发明专利技术公开了一种可以用于提取畜水产品中残留动物用药物的提取液。所述提取液包括含０．０５～１％Ｗ／Ｖ的偏磷酸、ｐＨ为５．５～７．５的缓冲液，为可以一次性提取多种动物用药物的提取液。特别适合用于残留动物用药物为抗菌物质时的提取。本发明专利技术所提供的提取液，由于ｐＨ在中性范围，可在不损害多种动物用药物稳定性的情况下，将其有效地一次性提取，有望使畜水产品中残留动物用药物的测定更加迅速、简捷。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及残留动物用药物的提取液。更详细地说，涉及测定 畜水产品中残留的动物用药物时所使用的提取液。
技术介绍
10 近年来，为了预防/治疗畜水产动物的疾病或促进生长，人们使用了许多种动物用药物。测定畜水产品中动物用药物的残留量(定量) 对确保食品安全至关重要。基于此种状况，日本及国外各国导入了 与畜水产品中残留的动物用药物相关的肯定列表制度，同时规定了 200多种动物用药物残留量的暂定基准值，但实际上用公定方法对每15 种动物用药物的残留进行分析，时间与劳动力均难以应付。因此希 望开发出一种能同时对多成分且简便、迅速分析的残留物质的分析 方法。在动物用药物中，特别是抗菌物质(例如抗生素、合成抗菌药等) 在目前集约化祠养方式下使用的种类和用量均有增加的趋势，其在20 畜水产品中残留的可能性倍受关注。但现在的问题是，即使对在食品卫生法中规定的动物用药物中， 诸如螺旋霉素、替米考星、庆大霉素、大观霉素、新霉素等抗生素 类或喹喔啉曱酸、环丙马秦等高极性化合物也未能开发出多成分同 步分析的方法。进行所迷多成分同步分析，需要从被检物畜水产品25 中一次性提取出多种残留动物用药物。对可溶于有机溶剂的动物用药物来讲，通过使用有机溶剂作为提取液，上述问题已得到解决(例 如，参考Howells, L., Sauer, M. J., Analyst, 126, 155~160, 2001)。但是， 对难溶于有机溶剂的药物来讲，因不能使用有机溶剂，提取工序存 在问题。如上所述，对可溶于有机溶剂的动物用药物来讲，使用有机溶 剂作为提取液，问题已得到解决，也期望对水溶性的动物用药物能 同时提取的一次性提取液。但问题是在动物用药物中，如抗菌物质 5 等各种药物可稳定存在的条件各异，要在多种残留的动物用药物不变性的条件下高效 一 次性提取是困难的。为解决上述问题，本专利技术人等进行了各种研究，结果发现通过 使用具有特定性质的提取液，可以在多种残留动物用药物不变性的 条件下，高效一次性提取。本专利技术根据这一发现而设，提供对畜水 10 产品中残留的动物用药物、特别是抗菌物质一次性提取有用的提取液。
技术实现思路
为解决上述问题所做的本专利技术是一种畜水产品中残留动物用药15 物的提取液，其包括含0.05~1% (W/V,以下同样)的偏磷酸、pH为 5.5~7.5的緩冲液。该提取液特别适合用于残留动物用药物为抗菌物 质时的提取，緩冲液优选使用Mcllvaine緩冲液。实施专利技术的最佳方式20 如上所述，动物用药物中特别是抗菌物质，各种物质稳定存在的条件不同，导致难以一次性提取。基于上述观点，本申请专利技术人 等为消除这一障碍，进行了如下试验。首先，根据提取液的极性，将目标物质分成了两类。目标物质 之一选择的是可溶于有机溶剂的四环素等21种化合物；目标物质之 25 二选择的是高极性且难溶于有机溶剂的氨基糖苷类抗生素的4种化合物(链霉素、双氢链霉素、大观霉素和庆大霉素)。首先，进行的是添加回收试验，即在牛肉中加入规定量的目标 物质，以此作为被检物，对其利用pH7.0的Mcllvaine緩冲液/EDTA/曱醇混合溶剂进行提取，再使用(:18固相提取柱进行纯化。对目标物质之一的21种化合物进行了 20ppb浓度的添加回收试验，结果回收率以及变动系数基本达到了法定药典的基准。与此不同，对目标物质之二的氨基糖苦类抗生素，为使这些化5 合物能吸附于C,8固相提取柱，提取液中添加了离子对试剂七氟丁酸，然后通过c18固相提取柱进行了纯化。通过这样的操作预计回收链霉素、双氢链霉素、大观霉素和庆大霉素，可实际上未能回收到 庆大霉素。为了查找到原因，在C18固相提取柱处理前，向提取液中添加标10 准物质，结果论及的所有氨基糖苷类抗生素得到回收。因此判断问 题出现在C,8固相提取柱纯化前的工序，即提取。在此试验庆大霉素提取法，用公定方法规定的提取条件即在提 取液中使用1。/。的偏磷酸(pH2)，研究的结果确认可以回收庆大霉素。 以往使用上述1。/。偏磷酸(pH2)目的在于除去蛋白质，提取溶剂因添15 加偏磷酸呈现了酸性。但是，如果采用此类提取溶剂，则红霉素等酸性条件下不稳定 的化合物就会被分解掉。因此，多种成分同步分析法不能使用低pH 的提取液。此外，考虑有氯四环素等在碱性条件下不稳定的化合物 存在，因此多种成分同步测定需要在中性条件下提取。为此，就接20 近中性条件下的提取方法进行了研讨。首先，针对庆大霉素的提取，研究了是否需要在酸性条件下除 去蛋白。上述公定方法中偏磷酸溶液pH为2，使用Mcllvaine緩冲 液将pH由2调整到6，未能回收到庆大霉素。因此，偏磷酸本身的 存在是良好回收庆大霉素所需要的。25 基于上述结果，如后述实施例所示，本专利技术人等对提取液的液体性质和偏磷酸浓度进行了反复研究，结果表明使用尽管其液体性 质在中性附近，但调整偏磷酸到特定浓度的提取液，更具体讲就是 使用包括含0.05~1%的偏磷酸，pH为5.5 7.5的緩沖液的提取液，可 以在不损害动物用药物、特别是抗菌物质稳定性的情况下一次性提 取。需要说明的是，在上述浓度/pH条件下含有偏磷酸的緩冲液未确 认具有公定方法所用目的，即除去蛋白质的效果，作为一种化合物， 偏磷酸本身的存在对保证提取效果具有重要的意义。5 对本专利技术中所用的緩沖剂来讲，只要对从畜水产品中提取动物用药物无阻碍作用，可以广泛选用緩沖液，例如Mcllvaine緩冲液、 HEPES緩冲液、索伦森(Scrensen)緩冲液、克拉克-鲁布斯(Clark-Lubs) 緩沖液和Kolthoffs緩沖液等，其中优选使用Mcllvaine緩冲液。本专利技术为防止作为提取对象的动物用药物变性，将提取液的pH 10调整到5.5-7.5,优选调整到6.0-7.0。此外，偏磷酸浓度调整到0.05~1%,优选调整到0.1~0.5%。如 果偏磷酸浓度不足0.05%,则可能难以提取到庆大霉素。本专利技术的提取液，可以通过在上述适当的pH緩冲液中添加偏磷 酸使其达到上述的浓度来制备。在使用时为了提高提取效果，根据 15需要可以添加EDTA等螯合物、曱醇等水性有机溶剂。优选使用将 上述緩冲剂螯合物曱醇按15: 1: 4左右的比例混合而成的提取 液。本专利技术提取液的使用方法可以采用与过去的残留动物用药物提 取液相同方法。例如，向被检畜水产品中添加本专利技术的^是取液，均 20 质后，利用离心等常用方法进行分离即可得到提取液。相对上述祐_检物提取液的添加量可调整到被检物与提取液之比 为1: 1 10(W/V比，以下同样)，优选为1: 2~8，更优选为1: 2.5 5 左右。如果相对1份被检物添加的提取液不足1，则可能使提取不充 分；反之如果提取液超过10,提取方面没有问题，但由于提取液量 25 增加操作会麻烦。作为被检物的畜禽水产品包括畜肉(例如牛肉、猪肉、鸡肉、兔 肉、羊肉、鸭肉等)和水产品(竹莢鱼(young yellowtail)、鲷鱼、飩鱼、 虾、鳗鱼、鲤鱼、鲑鱼、牡蛎等)。需要说明的是，在调查动物用药 物？ 1起的环境污染时也会把从自然界采取的动物作为被检物。如此得到的提取液，经过柱纯化等常规方法纯化后，利用常规测定装置可测定残留动物用药物。作为纯化方本文档来自技高网...

【技术保护点】
畜水产品中残留动物用药物的提取液，其包括含０．０５～１％Ｗ／Ｖ的偏磷酸、ｐＨ为５．５～７．５的缓冲液。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：北山雅彦，小园正树，大森丘，森松文毅，山田良司，
申请(专利权)人：日本肉类批发商株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]