Phi BT1-TAT -NLS -HIS6整合酶及其制备方法与应用,其多克隆抗体及其应用技术

本发明专利技术属生物技术和基因工程技术领域，具体涉及一种用于定点整合的蛋白酶Ｐｈｉ　　ＢＴ１－ＴＡＴ－ＮＬＳ－ＨＩＳ６整合酶及其制备方法，其多克隆抗体及其应用。首先表达纯化Ｐｈｉ　　ＢＴ１－ＴＡＴ－ＮＬＳ－ＨＩＳ６整合酶蛋白质，该蛋白质保持ＰｈｉＢＴ１整合酶的基本特性，但是其可以通过蛋白转导进入高等生物细胞，并增加蛋白向细胞核转移的能力，同时适用于细胞外体系以及活细胞体系中介导特异性附加在ａｔｔＰ与ａｔｔＢ上的ＤＮＡ分子之间的交换与转移等基因操作。用Ｐｈｉ　　ＢＴ１－ＴＡＴ－ＮＬＳ－ＨＩＳ６整合酶蛋白质直接与佐剂相混合，注射免疫动物，制得Ｐｈｉ　　ＢＴ１整合酶多克隆抗体。该抗体可以用于特异性识别Ｐｈｉ　　ＢＴ１整合酶蛋白质。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种表达重组Ｐｈｉ　　ＢＴ１－ＴＡＴ－ＮＬＳ－ＨＩＳ６整合酶蛋白的方法，其特征在于具体步骤：　　　　使用大肠杆菌表达Ｐｈｉ　　ＢＴ１－ＴＡＴ－ＮＬＳ－ＨＩＳ６整合酶蛋白并用ＮＴＡ树脂纯化Ｐｈｉ　　ＢＴ１－ＴＡＴ－ＮＬＳ－ＨＩＳ６整合酶蛋白，利用基于ＰＣＲ引物末端修饰的技术，通过多轮ＰＣＲ操作在Ｐｈｉ　　ＢＴ１整合酶表达框架３｀附加表达编码－ＴＡＴ－ＮＬＳ－ＨＩＳ６的序列，从而形成Ｐｈｉ　　ＢＴ１－ＴＡＴ－ＮＬＳ－ＨＩＳ６整合酶标大框架，将其克隆到原核表达载体ｐＥＴ２２ｂ（＋）上，经测序鉴定正确后，转化到ＢＬ２１菌株中，进行大量诱导表达和纯化；条件为：诱导温度１５－２５℃，时间１２－２４小时，采用含咪唑的高盐缓冲液梯度洗脱收集纯化蛋白。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈金中，田聆，姚纪花，丁晓明，赵国屏，薛京伦，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]