本发明专利技术公开了一种检测痕量过氧化氢的罗丹明Ｓ缔合物微粒酶催化荧光方法，它是在弱酸性的ＨＡｃ－ＮａＡｃ溶液中加入ＫＩ、ＨＲＰ、Ｈ↓［２］Ｏ↓［２］、罗丹明Ｓ，摇匀后定容得已知浓度的被测体系，然后用荧光光度计扫描得到体系的激发和发射光谱，在激发光波长５００ｎｍ处和发射波长５５６ｎｍ处测得体系的荧光强度Ｆ和试剂空白Ｆ↓［０］，计算△Ｆ＝Ｆ－Ｆ↓［０］的值，再求出被测物的△Ｆ，再根据工作曲线计算出某未知浓度的被测物的Ｈ↓［２］Ｏ↓［２］浓度。这种方法反应条件温和，设备简单，操作简单，试剂易得、价廉，灵敏度高，选择性好，简便快速，易于推广应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及H202的检测方法，特别是检测痕量过氧化氢的罗丹明S缔合物 微粒酶催化荧光方法。
技术介绍
过氧化氢是一种强氧化剂，可作为漂白剂、消毒剂、脱氧剂、液体燃料推 进剂等被广泛应用于化学品合成、造纸、环保、医药、纺织、矿业及农业废料 加工等领域。长期接触过氧化氢会毛发脱色，出现呼吸道及皮肤刺激等症状。 国内外目前检测过氧化氢的方法主要有常规滴定法、电化学法、分光光度法、 荧光法、化学发光法、色谱法。这些方法中有的是干扰因素多，有的是仪器较 复杂昂贵，有的是灵敏度低，测量有误差。
技术实现思路
本专利技术的目的是要为克服现有技术的不足，而提供一种灵敏度高、检测快 速准确的检测痕量过氧化氢的罗丹明S缔合物微粒酶催化荧光方法。 本专利技术通过下述技术方案来实现一种检测痕量过氧化氢的罗丹明S缔合物微粒酶催化荧光方法，它是利用 辣根过氧化物酶(HRP)对过氧化氢催化的专一性和罗丹明S (RhS)缔合物微 粒的荧光淬灭特性结合来测定过氧化氢。在酸性条件下，HRP可以催化H202与过量的r反应生成l3—， 13—与RhS形成 缔合物微粒(RhS-13')，从而导致体系的荧光值降低，显示出荧光猝灭效应。过 氧化氢浓度在一定范围内分别与罗丹明S的荧光强度呈碱性关系。据此建立了 一种灵敏度高、选择性好、简便快速测定痕量过氧化氢的荧光法。主要反应如下<formula>formula see original document page 3</formula>nRhS+ + nI3- - (RhS-I3)n (4)具体检测方法包括如下步骤1. 制备已知的H202浓度的测试体系，用微量取样器移取HAc-NaAc缓冲 液于5mL试管中；在上述试管的溶液中加入KI、辣根过氧化物酶(HRP)、己 知不同浓度的&02、罗丹明S，摇匀，定容至3ml;2. 依照步骤(1)的方法制备试剂空白体系，不加入H202;3. 用荧光光度计扫描得到的体系的激发和发射荧光光谱，在激发光波长 500nm、发射波长556nm处，测定体系的荧光强度为F和F。，计算AF-F-Fo的 值；4. 根据AF对H202的浓度关系作工作曲线；5. 依照步骤(1)的方法制备检测体系，其中加入的&02为含有H202但未知浓度的被测物，求出被测物的AF值；6. 依据(4)的工作曲线，计算出被测物的所含H202浓度。 射步骤1所述的HAc-NaAc缓冲液的pH值为3.0—6.0，体积为0.05-1.0mL;KI浓度为2X 10'3mol/L，体积为0.1-lmL;HRP浓度为0.2 P g/mL，体积为0.02-0.2mL;罗丹明S浓度为2X 10'5mol/L，体积为0.1-0.8mL。本专利技术的优点在于-.(1) 反应在室温下进行，反应条件温和，利于推广普及；(2) 设备简单、操作简单；(3) 试剂易得、价廉；(4) 灵敏度高、快速，有较好的应用价值。 附图说明图1为本专利技术实施方式中辣根过氧化物酶催化过氧化氢与碘离子及罗丹明 S缔合的激发光谱图，其中曲线a至d表示a.HAc-NaAc(pH=4.4)- 3.33 X l(T5mol/L KI -4 X l(T3 y g/mL HRP-2 X 10-5mol/L Rh-S ; b. a-l.44 X 10-bmol/L H202;c. a-2.52 X l(T6mol/L H202;d. a-3.6X10-6mol/LH2O2。图2为本专利技术实施方式中辣根过氧化物酶催化过氧化氢与碘离子及罗丹明 S缔合的荧光光谱图；其中曲线a至d表示a.HAc-NaAc(pH=4.4)- 3.33X l(T5mol/L KI -4X10-3ii g/mL HRP-2X 10-5mol/L Rh画S， b.a-1.44 X 10-6mol/L H202， c.a-2.52 X 10-6mol/L H202， d. a-3.6 X 1 (T6mol/L H202。具体实施例方式下面的实施方式描述了在弱酸性的HAC-NaAC缓冲液中及&02存在下， HRP可催化&02生成 OH， OH可氧化I生成I2，过量的I与12可结合形成 I3，而RhS可与l3结合形成(RhS-I^缔合微粒，导致RhS体系的荧光值下降。 据此，建立间接测定过氧化氢的荧光新方法。其主要反应如前所述。一种检测痕量过氧化氢的罗丹明S缔合物微粒酶催化荧光方法描述如下(1) 用微量取样器移取0.08mL pH值为4.4的HAc-NaAc缓冲液于5ml试 管中，在试管的溶液中分别加入浓度为2X l(T3mol/L的KI 0.5ml，再加入浓度为 0.2ug/mL的HRP O.lml，再加入己知不同浓度的H202 O.lml，再加入浓度为2 X10—Smol/L的罗丹明S0.4ml，摇匀定容至3ml，制得被测体系。(2) 用步骤(1)的方法制备试剂空白体系；(3) 将上述各溶液用Cary Eclipse荧光分光光度计(美国Varian公司)扫描得 到的体系的激发和发射荧光光谱，在激发光波长500nm处和发射波长即荧光波 长556nm处，测定体系的荧光强度F和试剂空白的F。，计算AF-F-Fo的值；(4) 依据己知不同浓度的被测物的AF与H202的浓度关系作工作曲线为A F =7.1444 c+8.2037,c-H2O2的浓度，单位是l()-7mol/L，线性范围是3.6X l(r8mol/L 到3.6X10—6mol/L;(5) 按步骤(1)的方法制备检测体系，其中加入的是含有1^202但未知浓 度的被测物，按照步骤(3)的方法，测得某未知浓度的被测物的AF为52;(6) 根据工作曲线，计算出未知浓度的被测物的&02浓度为6.13X 10—7mol/L。权利要求1.检测痕量过氧化氢的罗丹明S缔合物微粒酶催化荧光方法，其特征是测定方法包括步骤如下(1)制备已知的H2O2浓度的测试体系，用微量取样器移取HAc-NaAc缓冲液于试管中；在上述试管的溶液中加入KI、辣根过氧化物酶(HRP)、已知不同浓度的H2O2、罗丹明S，摇匀，定容至3ml；(2)依照步骤(1)的方法制备试剂空白体系，不加入H2O2；(3)用荧光光度计扫描得到的体系的激发和发射荧光光谱，在激发光波长500nm，发射波长556nm处，测定体系的荧光强度为F和F0，计算ΔF＝F-F0的值；(4)根据ΔF对H2O2的浓度关系作工作曲线；(5)依照步骤(1)的方法制备检测体系，其中加入的H2O2为含有H2O2但未知浓度的被测物，求出被测物的ΔF值；(6)依据(4)的标准曲线，计算出被测物的所含H2O2浓度。2. 如权利要求1所述的检测痕量过氧化氢的罗丹明S缔合物微粒酶催化荧 光方法，其特征是步骤(1)所述HAc-NaAc缓冲液的pH值为3.0—6.0，体 禾只为0.05-1.0mL。3. 如权利要求1所述的检测痕量过氧化氢的罗丹明S缔合物微粒酶催化荧 光方法，其特征是步骤(1)所述的KI浓度为2Xl(rVol/L，体积为0.1-lmL。4. 如权利要求1所述的检测痕量过氧化氢的罗丹明S缔合物微粒酶催化荧 光方法，其特征是步骤(1)所述的HRP浓度为0.2 y g本文档来自技高网...
【技术保护点】
检测痕量过氧化氢的罗丹明Ｓ缔合物微粒酶催化荧光方法，其特征是：测定方法包括步骤如下：（１）制备已知的Ｈ↓［２］Ｏ↓［２］浓度的测试体系，用微量取样器移取ＨＡｃ－ＮａＡｃ缓冲液于试管中；在上述试管的溶液中加入ＫＩ、辣根过氧化物酶（ＨＲ Ｐ）、已知不同浓度的Ｈ↓［２］Ｏ↓［２］、罗丹明Ｓ，摇匀，定容至３ｍｌ；（２）依照步骤（１）的方法制备试剂空白体系，不加入Ｈ↓［２］Ｏ↓［２］；（３）用荧光光度计扫描得到的体系的激发和发射荧光光谱，在激发光波长５００ｎｍ，发 射波长５５６ｎｍ处，测定体系的荧光强度为Ｆ和Ｆ↓［０］，计算△Ｆ＝Ｆ－Ｆ↓［０］的值；（４）根据△Ｆ对Ｈ↓［２］Ｏ↓［２］的浓度关系作工作曲线；（５）依照步骤（１）的方法制备检测体系，其中加入的Ｈ↓［２］Ｏ↓［２］为含有Ｈ↓ ［２］Ｏ↓［２］但未知浓度的被测物，求出被测物的△Ｆ值；（６）依据（４）的标准曲线，计算出被测物的所含Ｈ↓［２］Ｏ↓［２］浓度。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：梁月圆，蒋治良，
申请(专利权)人：广西师范大学，
类型：发明
国别省市：45[中国|广西]
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