本发明专利技术公开了一种用ＨＰＬＣ指纹图谱鉴别黑米或其制品真伪的方法，其包括以下步骤：（１）黑米标准指纹图谱的建立：精密称取黑米，用乙醇浸提得到黑米浸提物，然后对黑米浸提物进行脱脂处理后，用甲醇溶解脱脂物，过滤得到上样液；取上样液测定黑米ＨＰＬＣ标准指纹图谱；（２）分别测定不同黑米品种的ＨＰＬＣ指纹图谱，并进行比较，得到具有６个共有特征峰的黑米ＨＰＬＣ标准指纹图谱；所述的共有特征峰的保留时间ＲＴ值依次为３２．２，３６．６，４４．１，４８．９，５２．６，６５．５分钟；（３）以上述相同的步骤测定待测黑米或其制品的指纹图谱；（４）将待测黑米或其制品的指纹图谱与黑米标准指纹图谱对比，确定待测黑米或其制品的真伪。本发明专利技术在鉴定黑米及其制品的真伪中具有稳定、精密度高、重现性好的特点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种鉴别黑米或其制品真伪的方法，尤其涉及一种用HPLC指纹 图谱鉴别黑米或其制品的真伪方法。
技术介绍
随着经济的发展和生活水平的提高，黑米或其制品因天然的色、香、味和良好的营 养保健功能越来越受到人们的关注，黑米及其制品不断问世，并受到消费者的普遍欢迎。 黑米呈色是因色素在果皮和种皮内沉积所致，其种皮部分为黑色，胚乳部分为白色，因 此市面上出现了不少通过色素染色制成的假冒黑米及黑米制品，严重影响了消费者健康 和黑色食品产业的健康发展。目前关于黑米及其制品的鉴伪方法多以目测和紫外一可见光谱分析法，目测法人为 因素很多，准确性不高；紫外一可见光谱法是基于黑米色素的主要成分花色苷类化合物 在525 540nm之间有特征吸收峰，通过测定黑米浸泡液是否存在上述特征吸收峰可以 辨别黑米的真伪。但由于某些其它天然色素或人工合成色素在该区域也存在特征吸收， 例如甜菜红和苋菜红的最大吸收峰均在535nm。如果有些不法商贩用上述一类的色素对 普通的白糙米进行染色，在525 540nm区域内仍可以检测到特征吸收峰，从而会影响 到检测结果的准确性。因此建立可靠的黑米及其制品的真伪鉴别技术势在必行。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用HPLC指纹图谱鉴别黑米或其制品真伪的方法， 该方法具有稳定、精密度高、重现性好的特点。 本专利技术的目的通过以下技术措施来实现-其包括以下步骤-(1) 精密称取黑米，用乙醇浸提得到黑米浸提物，然后对黑米浸提物进行 脱脂处理后，用甲醇溶解脱脂物，过滤得到上样液；取上样液测定黑米HPLC标准 指纹图谱；(2) 分别测定不同黑米品种的HPLC指纹图谱，并进行比较，得到具有6个共有特 征峰的黑米HPLC标准指纹图谱，所述的共有特征峰的保留时间RT值依次为32. 2， 36. 6， 44. 1， 48.9， 52.6， 65. 5分钟;(3) 以上述相同的步骤测定待测的黑米或其制品的指纹图谱；(4) 将待测黑米或其制品的指纹图谱与黑米标准指纹图谱对比，确定待测黑米或 其制品的真伪。本专利技术所述的步骤(l)的具体过程是1) 精密称取黑米，按料液重量体积比l: 4 1: 6 (m/v)用50 70%的乙醇在常 温下浸提黑米20 24小时后，过滤，将浸提液减压真空0. 08-0. lMPa浓縮，得到浆 状黑米浸提物；2) 将上述浸提物用双蒸水溶解至与歩骤l)中所述的浸提液相同的体积，并加入等 体积的石油醚萃取2 3次，得到黑米脱脂液；3) 将脱脂液减压真空浓縮，得到浆状脱脂物，再用50 60%的甲醇溶解脱脂物， 并使黑米与脱脂物甲醇溶液的质量体积比为1 : 2 1 : 3，过0. 3 0. 5微米滤膜得上样 液，在4'C条件下保存备用；4) 取上样液测定黑米HPLC标准指纹图谱。所述的步骤1) 3)制备上样液的过程是一个纯化的过程，目的是脱去米皮中含有的 较多的脂肪酸以及其它一些脂溶性成分， 一方面减少指纹图谱中的杂峰的量另一方面可 以减少杂质，提高色谱柱的使用寿命。步骤3)中减压真空浓縮的真空度为0. 08-0. lMPa。本专利技术所述测定黑米HPLC标准指纹图谱的色谱条件色谱柱为Cw， 5ixm， 250X 4. 6 mi;流动相为甲醇、0.5%甲酸和乙腈；洗脱方式为梯度洗脱，在线脱气；检测波长 为254nm。本专利技术测定国内外60个不同黑米品种的HPLC指纹图谱并进行比较，得到具有6 个共有特征峰的黑米HPLC标准指纹图谱。本专利技术与现有方法相比，具有以下的优点(1) 本专利技术是根据60个国内外不同品种的黑米中主要的非营养素生物活性 成分是水溶性成分，建立黑米及其制品的水溶性提取物HPLC指纹图谱，从而确 定其标准指纹图谱的共有特征峰有6个，其保留时间RT值依次为32.2， 36.6， 44.1， 48.9， 52.6， 65.5分钟；将测定黑米待检样品的色谱图与标准色谱图比较，即可鉴定待 测黑米及其制品的真伪，具有稳定、精密度高、重现性好的特点。(2) 将黑米整个HPLC指纹图谱作为一个整体看待，注重各个共有特征峰的 有无和相互关系，注重图谱的整体面貌特征，为准确鉴别黑米及其制品的真伪提 供了对照标准，将为黑色食品市场的健康稳定发展做出贡献。 附图说明图1是本专利技术实施例一的黑米标准指纹图谱。图中箭头所指从左到右分别是 1至6号6个共有特征峰。图2是本专利技术实施例一中市售黑米的HPLC指纹图谱。图中箭头所指从左到 右分别是1至6号6个共有特征峰。具体实施例方式下面结合实施实例对本专利技术做进一步说明。 实施例一1仪器、试材及药品 1.1仪器Agilent 1200LC高效液相色谱仪，Agilent VWD紫外可变波长检测器，Agilent Chemstation工作站。1.2试材及药品黑米样品自超市购买，乙腈、甲醇为色谱纯，其余试剂均 为分析纯。2、黑米标准指纹图谱的建立(1)黑米标准指纹图谱的建立1) 精密称重黑米8.00g，用60X的乙醇40ml在常温下浸提黑米24小时后，用普 通滤纸过滤，将浸提液减压真空0.09MPa浓缩，得到浆状黑米浸提物；2) 将上述浸提物用双蒸水溶解至总体积为40ml，加入40ml石油醚萃取3次，得到 黑米脱脂液；3) 将脱脂液减压真空0.09MPa浓缩，得到浆状脱脂物，再用50%的甲醇溶解至 20ml，过0. 45微米滤膜得上样液，在4'C条件下保存备用；4) 色谱条件色谱柱为Dikma Diamonsil C18， 5 p m， 250X4.6 mm;流动相为甲 醇、0.5%甲酸和乙腈；准取吸取10u 1上样液进样，记录100分钟色谱图。洗脱方式 为梯度洗脱，在线脱气；检测波长为254nm。梯度洗脱方案如下表。时间流速甲醇0.5%甲酸乙腈曲线类型00. 6296250. 639436100, 668866230.61276126430. 21663216530. 41858246630. 41858246730.62053276950. 6500506、1000. 61000065)按同样的方法测定60个不同黑米品种的HPLC指纹图谱并进行比较，得到具有 共有特征峰的黑米HPLC标准指纹图谱，所述的共有特征峰总共有6个，其保留时间RT 值依次为32.2， 36.6， 44.1， 48.9， 52.6， 65.5分钟。3、 以上述相同的方法测定市售黑米或其制品的指纹图谱。4、 市售黑米真伪的辨别取市售黑米样品的HPLC指纹图谱与黑米标准指纹图谱进 行对比，确定6个共有峰均存在，其RT分别为32.6， 36.0, 44.8， 48.0， 53.2， 65.1 分钟。因此可以判断此黑米样品为真的黑米。实施例二与实施例一不同的是 黑米标准指纹图谱的建立1) 精密称重黑米10. 00g，用65%的乙醇50ml在常温下浸提黑米20小时后，用普 通滤纸过滤，将浸提液减压真空0.08MPa浓縮，得到浆状黑米浸提物；2) 将上述浸提物用双蒸水溶解至总体积为50ml,加入50ml石油醚萃取2次，得到 黑米脱脂液；3) 将脱脂液减压真空0.08MPa浓縮，得到浆状脱脂物，再用60%的甲醇溶解至 30ml，过0.5微米滤膜得上样液，在4。C条件下保存备用；4) 色谱条件色谱柱为Hyp本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用ＨＰＬＣ指纹图谱鉴别黑米或其制品真伪的方法，其特征在于：其包括以下步骤：（１）精密称取黑米，用乙醇浸提得到黑米浸提物，然后对黑米浸提物进行脱脂处理后，用甲醇溶解脱脂物，过滤得到上样液；取上样液测定黑米ＨＰＬＣ标准指纹图谱；（２）分别测定不同黑米品种的ＨＰＬＣ指纹图谱，并进行比较，得到具有６个共有特征峰的黑米ＨＰＬＣ标准指纹图谱，所述的共有特征峰的保留时间ＲＴ值依次为３２．２，３６．６，４４．１，４８．９，５２．６，６５．５分钟；（３）以上述相同的步骤测定待测的黑米或其制品的指纹图谱；（４）将待测黑米或其制品的指纹图谱与黑米标准指纹图谱对比，确定待测黑米或其制品的真伪。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张名位，张瑞芬，池建伟，魏振承，张雁，唐小俊，
申请(专利权)人：广东省农业科学院农业生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]
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