本发明专利技术提供了一种指示受试者中是否存在动脉粥样硬化（特别是冠状动脉粥样硬化）的方法，其包括将来自受试者的组织样本中的核心２ＧｌｃＮＡｃ－Ｔ水平与相同组织中测定的参照水平进行比较。如果来自受试者的组织样本中的核心２ＧｌｃＮＡｃ－Ｔ的水平高于参照水平，则表明该受试者患有动脉粥样硬化（特别是冠状动脉粥样硬化－冠状动脉疾病－ＣＡＤ）。在优选实施方式中，样本由淋巴细胞组成，通过使用放射性标记的ＵＤＰ－ＧｌｃＮＡｃ以及Ｇａｌβ（１，３）－ＧａｌＮＡｃ衍生物将蛋白水平确定为酶活性。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】作为动脉粥样硬化诊断标记的核心2(5 (1,6)-乙酰葡糖胺基转移酶本专利技术涉及血管疾病特别是动脉粥样硬化的诊断方法领域。 已知动脉粥样硬化(AS)具有炎性成分，核心2 GlcNAc-T (也叫做 UDP-GlcNAc:Gaipi,3GalNAc-R (GlcNAc—GalNAc)卩l，6-N-乙酰氨難移酶或 核心邻l,6-N-乙酰氨基转移酶-EC2.4丄102)被认为与炎性过程相关(WO 0031109)。曾有人推测核心2 GlcNAc-T抑制剂在AS中可能有用(例如 WO0185748),然而，目前还没有公开的研究检测过动脉粥样硬化病人的核心2 GlcNAc-T的水平，也没有提示该酶的水平可以作为受试者动脉粥样5更化的标 记。本专利技术人惊奇的发现，患有动脉粥样硬化的病人，其血样中的核心2 GlcNAoT活性水平相对于非患病健康个体显著上升，因此，核心2 GlcNAc-T 的水平可以用于指示受试者中是否存在动脉粥样5更化。具体的，血样可以是包括多形核细胞-PMNs以及其他淋巴细胞亚群的分离 制品，更具体的，可以是包括PMNs和外周血单核细胞-PBMCs的制品。动脉粥样5更化包括(冠状动脉粥样硬俗冠状动脉疾病-CAD/缺血性心脏病 -1 0/动脉硬化性心血管疾病-八8(:\1)/冠状动脉性心脏病-(:00)。因此，本专利技术第一方面提供了一种指示受试者中是否存在动脉粥样石更化的 方法，其包括将来自受试者的组织样本中的核心2 GlcNAc-T水平与相同组织中 测定的参照水平进行比较。如果来自^i式者的组织样本中的核心2GlcNAc-T的 水平高于参照水平，则表明该受试者患有动脉粥样硬化。通常，组织中的参照水平M检测由一个或更多与不存在AS相关的个体 (one or more individuals associated with an absence of AS)组成的人群的组织样本 中的核心2GlcNAc-T的平均水平来建立；ftit的，组织中的参照水平M31检测 由五个或更多与不存在AS相关的个体组成的人群的组织样本中的核心2 GlcNAc-T的平均水平来建立；更itt的，组织中的参照水平Mil检测由十个或 更多与不存在AS相关的个体组成的人群的组织样本中的核心2 GlcNAc-T的平 均水平来建立。方便地，组织样本是血液样本。方便地，可以采用本领域公知方法，在可从血液中分离得到的淋巴细胞中测定核心2 GlcNAc-T水平。具体而言，核心2 GlcNAc-T水平可通过检测包括PMNs以及其它淋巴细 胞亚群的分离制品来确定；更具体的，该分离制品包括PMNs以及PBMCs。核心2 GlcNAc-T水平可以是核心2 GlcNAc-T的RNA转录本水平，也可 以是核心2GlcNAc-T蛋白水平或者是核心2GlcNAc-T酶活水平；{雄的，它 是核心2 GlcNAc-T的酶活7JC平。^ft测核心2 GlcNAc-T酶活的合适方法包括采用方M性标记的底物或者受 体化合物，采用荧光标记的底物或受体化合物，或者在分析(例如通过HPLC) 之前衍生已形成的产品的那些方法，例如本专利技术描述的或者Chibber等，Diabetes 49 1724-1730 (2000); Palmenni C.A.等，Glycoconj J.Aug; 13 (4) :631-6 (1996); 或KuhnsW.等，Glycoconjugate Journal 10 381-394 (1993)(这些都以援引的方 式为本专利技术所包括)的方法。血样中淋巴细胞的分离以及核心2 GlcNAc-T活性 的测定，可以采用Chibber等(2000)中描述的方法，或者采用本专利技术实施例1 中所记载的方法。本专利技术人采用Chibber等(2000)中描述的方法或者实施例1中所详述的 方法，测定了来源于健康个体的淋巴细胞制品的核心2 GlcNAc-T酶活7X平为 40-1000 pmols/hr/mg蛋白，典型地在50-500 pmols/hr/mg蛋白之间。平均值可以在50到1000之间，典型i也在100到500之间，更为典型地是 在200400 pmol^hr/mg。当采用Chibber等(2000)中描述的方法或者实施例1中所详述的方法处 理血样以及检测淋巴细胞时，患有动脉粥样5更化个体的核心2 GlcNAc-T水平所 处的范围至少为健康非患病个体参照水平的两倍，优选的是至少四倍，更tt^ 的是至少六倍，最优选的是至少八倍。方便地，本专利技术所述的方法可以采用包含实施本专利技术所述的方法所必须的 成分的试剂盒来实现。因此，本专利技术的第二个实施方案中提供一种用于指示受 试者中是否存在动脉粥样硬化的试剂盒。优选盼瞎况下，该试剂盒包含受体化 合物。杨。、2GlcNAc-T能转运单糖残基至该受体化合物。优选的，该受体化合 物是Gal卩(1,3 )GalNAcoc的衍生物。适宜的受体化合物如Gal(3 (1,3 )GalNAc-Bn，Galp (1，3) GaINAc-; -硝基苯酚，或者Gaip (1,3) Ga]NAcot-p-NHdansylphenyL任选的，试剂盒还可以包含有UDP-GlcNAc，其可以被方M性标记。方便 地，采用MC或者3H标记UDP《lcNAc。任选的，试剂盒还可以带有N-乙酰葡 糖胺(GlcNAc)以及淋巴细lfiia军试剂，如表面活性剂(如Tnton-X100)。试剂盒还可以带有指导使用的说明书。本专利技术将M参考以下的实施例、方案以及附图进行进一歩详述。根据这 些描述，本领域技术人员能想到落入权利要求范围内的更多实施方案。附图说明图1图^i兑明来自健駒照个体与患有缺血性心脏病(腸)的患者的淋 巴细胞中的核心2GlcNAc-T的活性。对照组，n=19， IHD患者组，n=13。实施例1、测定分离自被诊断患有缺血性心脏病病人血液的淋巴细胞的核心2 GlcNAc-T活性本实验中使用了 13个患有IHD的两种性别的中年患者以及19个年龄匹配 的健^X寸照。患有糖尿病的患者被排除。本研究中包括的IHD患者患有稳定性 心绞痛以及非稳定性心绞痛，或者最近出现过心肌t體。血液采集入肝素化的试管中。血样被置于等体积的Histo-Paque 1077 (Pharmacia,百丁购自Sigma， Poole， Dorset,英国)层上，400g离心30分钟。 取淡黄色的薄层(Buflfycoat)(其中含有外周血单核细胞(PBMNC)以及多形 核(PMN)淋巴细胞)，在磷酸盐缓冲液中洗涤。分离得到的淋巴细胞冷冻，并 在0.9%的NaCl、 0.4%Tnton-X100、 1 mMPMSF中裂解，检测核心2 GlcNAc-T。 反应体系为50 mmo1/1的2- (N-吗啉代)乙磺酸，pH为7.0; 1 mmo1/1的 UDP-GlcNAc， 0.5 iiCi UDP-6-N-乙酰葡糖胺(16000 dpm/腿o1， NEN Life Science Products, Hounslow，英国)；0.1 mol/I GlcNAc; 1 mmol/l (3Dgal (1-3) Da-GalNAc-p-石肖基苯酚以及15ul的细)l^解液(100-200昭蛋白)本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种指示受试者中是否存在动脉粥样硬化的方法，其包括将来自受试者的组织样本中的核心２ＧｌｃＮＡｃ－Ｔ水平与相同组织中测定的参照水平进行比较。来自受试者的组织样本中的核心２ＧｌｃＮＡｃ－Ｔ的水平高于参照水平，则表明该受试者患有动脉粥样硬化。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：R奇伯，
申请(专利权)人：英国技术集团国际有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[英国]
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