本发明专利技术涉及一种采用电子自旋共振（ＥＳＲ）光谱法定性和／或定量测定在测试介质中，优选在液体测试介质中脂质囊泡或脂质体膜的形态完整性和完好性的方法。按照所述方法，ａ）用ＥＳＲ－活性探针标记待分析的脂质囊泡／脂质体，ｂ）将一定量的标记脂质囊泡／脂质体引入测试介质来制备样品，ｃ）将一定量的标记脂质囊泡／脂质体引入阳性介质来制备阳性对照，ｄ）将一定量的ＥＳＲ－活性探针引入测试介质来制备任选的阴性对照，ｅ）记录样品、阳性对照和任选的阴性对照的ＥＳＲ光谱；和ｆ）互相比较记录的ＥＳＲ光谱。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及定性和/或定量测定测试介质，优选液体测试介质中脂质囊泡或脂 质体膜的形态完整性和完好性的方法。专利技术背景术语"脂质体"起源于希腊语，其表示"脂肪微粒(fatty corpuscle)"。脂质 体是无法用光学显微镜看到的非常小的中空球体，也称为囊泡。这些囊泡由围绕水 性核心的一个或多个脂双层构成。在化妆品或药物中，脂质体是作为活性成分运输 系统的首选。此外， 一些情况也利用了脂质体的稳定作用。另外，因为囊泡诸组分 的化妆品和药学相关特性，也常使用脂质体本身。文献中首次报道的脂质体由磷脂构成(A D Bangham， Adv. Lipid Res. 1， 65-104， 1963)。即使如今，大多数脂质体也由磷脂构成，例如纳米体(nanosome)。 然而，脂质体也包括特殊的脂质体类型，例如神经酰胺脂质体(cerasome)(神经 酰胺)、鞘脂体(sphingosome)(鞘月旨)和非离子型表面活性剂脂质体(niosome)(非 离子表面活性剂)-它们均是"脂肪微粒"；脂质中的变化意味着囊泡膜具有不 同特性。脂质体一般从卵磷脂制得；卵磷脂通常从大豆植物或鸡蛋获得。术语"卵磷 脂"被用于描述磷脂(PL)、油及其它亲脂性成分的混合物，也可以只用于磷脂组分 本身。在一些情况中，术语"卵磷脂"表示特定的磷脂，即磷脂酰胆碱(PC)。所有 磷脂由亲脂性部分(脂肪酸)和亲水性头基团构成，其中脂肪酸和头基团经间隔基 团， 一般是甘油而酯化。由磷脂产生的脂质体的稳定性取决于它们的磷脂酰胆碱含量及其脂肪酸组 成。在水性制剂和凝胶中，磷脂酰胆碱含量高(〉70%)产生稳定的脂质体。为产生 囊泡，加入水合磷脂酰胆碱和/或胆固醇可提高稳定性。在化妆品和制药工业中，为增加脂质体所含活性物质的效力和稳定性，将加 载了活性成分的脂质体掺入制品。许多不同的脂质体制品或制剂可以例如喷剂、凝胶、乳剂、洗剂、乳膏、油膏等形式商品化购得。特别是在药物制剂方面，稳定性 和完整性的问题，即所制备制剂的形态完整性和囊泡完好性问题一再出现。在这方 面，讨论中至关重要的一点是制品的各组分与脂质囊泡可能的相互作用。已知乳化剂和表面活性剂能增溶脂质囊泡或脂质体。增溶作用干扰了囊泡的 膜结构，再也不能确保膜的形态完整性，从而严重影响或者甚至破坏了囊泡包裹活性成分的的优点。例如，J T Simonnet的一篇文章(J T Simonnet, Cosmetics & Toiletries Magazine 109， 45-52, 1994)描述了水溶液中各种表面活性剂与脂质体之 间的这种相互作用。所引用的Simonnet文章中述及了各种增稠剂(生物聚合物)的保护性作用。 制剂的各种功能组分可影响稳定性，因而不但可从负面而且可从正面影响脂质 囊泡/脂质体的完整性。随着对高品质化妆品和药物制剂的需求不断增加，研究和评估脂质囊泡/脂质 体与制剂诸组分的积极和/或消极相互作用的重要性与日倶增。对于化妆品和药物 制剂的效力和效率，开发和建立能分析化妆品或药物制剂中脂质囊泡/脂质体的稳 定性和完整性，即形态完整性和完好性的分析方法至关重要。然而，根据现有技术，定量测定化妆品或药物制剂中脂质囊泡/脂质体的稳定 性和完整性，或形态完整性和完好性是不可能的或基本上是不能令人满意的。在这方面，可用的分析方法，例如电子显微术(EM)、静态和动态光散射实验 (SLS， DLS)和不对称场流分级法(AFFF)应用有限。利用EM检验化妆品和药物制剂的冷冻样品，就可以检测脂质囊泡/脂质体并 评估成像囊泡的结构(形态完整性)和大小(在理想情况下)，但利用该方法不能定量 测定制品中未破坏和完好的脂质囊泡/脂质体的含量或分数。该方法的另一主要缺 点在于其工艺和设备昂贵。此外，EM结果的应用十分依赖于研究人员的实验和解 读经验。化妆品或医药工业采用SLS和DLS实验，例如光子相关光谱(PCS)来评估脂 质囊泡/脂质体的大小和大小分布。这些方法对于脂质囊泡/脂质体的产品开发和质 量控制至关重要。然而， 一般而言，检测的是非常稀的脂质囊泡/脂质体乳剂，而 不是正常使用的制品。在SLS和DLS方法中，必须高度稀释待检测的溶液，因为较大囊泡的存在，例如乳膏剂的脂肪滴会强烈影响和歪曲光散射实验，这些方法不适于定量和定性地 检测化妆品或药物制剂中脂质囊泡/脂质体的形态完整性和完好性。虽然在最佳条件下，利用动态光反向散射操作的新开发设备，例如Horiba LB-550V (拉奇技术公司(Retsch Technology GmbH)，德国)或Zetasizer Nano系 列(马尔文仪器有限公司(Malvern Instruments Ltd),英国)能表征浓度为20%到 最大40%的脂质囊泡/脂质体乳剂中的颗粒。但这些设备不能检测未稀释的样品 并提供定量信息。利用AFFF定量和定性检测化妆品或药物制剂中脂质囊泡/脂质体的形态完整 性和完好性会发生同样的问题。在该方法中，可将不同尺寸的囊泡分开，例如乳膏 制剂中的脂质囊泡/脂质体和脂肪滴，然后独立地分析它们的大小和大小分布。待 测定的脂质囊泡/脂质体的大小必须与制剂中油滴的大小有实质性差异，以使各参 数不会重叠。可利用AFFF方法获得定量信息。然而，在制备样品时还是必须采取合适的 稀释步骤；这些步骤不仅会改变化妆品或药物制剂的物理特性，例如粘性、流变学 特性、透明度等，还会实质性地改变脂质囊泡/脂质体的物理和化学环境。因此， 可以假定在这些条件下脂质囊泡/脂质体在结构上可能重组。因而这些实验结果不 再能反映化妆品或药物制剂中脂质囊泡/脂质体的原始状态。专利技术目的本专利技术目的是提供一种测定在各种介质中，特别是在化妆品/药物制品中脂质 囊泡/脂质体的形态完整性和完好性的方法，这种方法的使用方式不依赖于介质的 理化特性并且不需要任何稀释步骤。专利技术详述凭借采用电子自旋共振(ESR)光谱法定性和/或定量测定在测试介质中，优选在 液体测试介质中的脂质囊泡或脂质体膜的形态完整性和完好性的方法实现了本专利技术目的，其中a) 用ESR-活性探针标记待分析的脂质囊泡/脂质体；b) 将一定量的标记脂质囊泡/脂质体引入测试介质来制备样品；C)将一定量的标记脂质囊泡/脂质体引入对照介质来制备阳性对照；d) 将一定量的ESR-活性探针引入测试介质来制备阴性对照；e) 记录样品、阳性对照和任选的阴性对照的ESR光谱；和f) 互相比较记录的ESR光谱。利用本专利技术方法测定在测试介质中，优选在液体测试介质中的脂质囊泡或脂 质体膜的形态完整性和完好性。掺入脂质囊泡/脂质体进行研究、开发或使用的测试介质，特别是液体介质可 以是任何类型。本专利技术所用的术语"液体介质"包括低粘度到高粘度液体介质，包 括任何化妆品或药物制品等，例如水包油和油包水乳剂、水凝胶如卡波姆凝胶或海 藻酸盐凝胶、和用包括防腐剂、稳定剂等在内的许多不同组分形成的复合软膏、糊 剂、乳膏或洗剂。例如，掺入基质的脂质囊泡和/或脂质体可以溶解或包埋的形式 存在，本专利技术方法可测定溶解、包埋或以其它方式存在的囊泡未受损和完好的程度如何。本专利技术所用的术语"脂质囊泡/脂质体"表示双层膜囊泡和多层囊泡；活性成 分可以处于囊泡内部的溶液中或本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种采用电子自旋共振（ＥＳＲ）光谱法定性和／或定量地测定在测试介质中，优选在液体测试介质中脂质囊泡或脂质体膜的形态完整性和完好性的方法，其中： ａ）用ＥＳＲ－活性探针标记待分析的脂质囊泡／脂质体； ｂ）将一定量的标记脂质囊泡／脂质体引入测试介质来制备样品； ｃ）将一定量的标记脂质囊泡／脂质体引入对照介质来制备阳性对照；和任选地 ｄ）将一定量的ＥＳＲ－活性探针引入测试介质来制备阴性对照； ｅ）记录样品、阳性对照和任选的阴性对照的ＥＳＲ光谱；和 ｆ）互相比较所记录的ＥＳＲ光谱。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：G布鲁蒙，M扎赫尔，D泰尔奇穆勒，K郑，
申请(专利权)人：若维有限公司化妆品原材料两合公司，角麦曲阿测试实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]
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