一种从食用螺肺中检测广州管圆线虫幼虫的方法技术

本发明专利技术公开了一种从食用螺肺中检测广州管圆线虫幼虫的方法，其特征为：所述从食用螺肺中检测广州管圆线虫幼虫的方法包括以下步骤，ａ．将食用螺（福寿螺）压碎剔壳，ｂ．沿外套膜的左侧至后侧的基部剪开，将外套膜向右翻开取外套膜的后半部分的椭圆形的囊状结构的肺囊，ｃ．然后剪开肺囊囊袋呈双层的两边沿，ｄ．翻开肺囊囊袋呈单层后铺平，ｅ．直接光镜观测，使用的光镜采用物镜２．５－３．５倍，观察其有无幼虫结节，ｆ．若囊袋层壁较厚，尽量拉平或用挑针拨动、玻片压来观察肺囊壁组织有无幼虫结节。本发明专利技术具有工序与材料简单、方法简便、经济及检测速度快的特点，具有与现有技术的检测方法相似的检测效果。可根据幼虫结节的形状及大小初步估计幼虫处于的发育阶段，适合疫区大体螺类的定性筛查。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医学寄生虫方向的生物检测
，具体地说是 。技术背景-广州管圆线虫感染期幼虫(ni期幼虫)必须在软体动物体内发育 完成，因此软体动物在传播广州管圆线虫中起到极其重要的作用。随 着福寿螺与褐云玛瑙螺的入侵和不断扩散，我国广州管圆线虫呈扩散趋势。目前，本虫的中间宿主多达70余种，在其众多中间宿主中褐云玛瑙螺与福寿螺是广州管圆线虫的重要中间宿主。因此，寻找快速 检测福寿螺体内广州管圆线虫的方法是预防广州管圆线虫病的重要 手段。当前检测螺体广州管圆线虫感染期幼虫通常采用研磨匀浆与胃蛋白酶消化法(以下简称酶消化法)。研磨匀浆法螺研磨或粉碎组 织成糊液，置于锥型量筒加入脱氯水沉淀(静置悬浊液)，倾倒上清 液取沉淀滤液镜检。此法材料简单，幼虫活力保持较久，能直观地显 示虫态与活度，故适合幼虫的分离、收集及动物接种。但检测速度慢， 沉淀物多而幼虫容易漏检。胃蛋白酶消化法螺研碎后置于消化液中， 然后倾入滤布中过滤，取滤布上的沉渣镜检。此法可靠、稳"'3，是检 测、分离收集幼虫、计数和定量筛选比较理想的方法。但检测速度较 慢，且加酶后部分幼虫易死亡。此外，其检测需一定的材料与药品如 胃蛋白酶、盐酸、粉碎机、与恒温箱等，因此，检测耗时费力，故不 太适合现场大规模螺的普测。此外关于分子生物检测的技术虽然敏感 可靠，能快速检测螺体内早期幼虫，但目前仍需亟待研究，还无法应 用于现场进行大规模螺的普测。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种从食用螺肺中检测广州管圆线虫幼虫 的方法，该方法适合现场进行检测，并适合疫区大体螺类的定性筛査。为了实现上述目的，本专利技术的技术方案是 一种从食用螺肺中检 测广州管圆线虫幼虫的方法，其特征在于a、将食用螺压碎剔壳，b、 沿外套膜的左侧至后侧的基部剪开，将外套膜向右翻开取外套膜的后 半部分的椭圆形的囊状结构的肺囊(图1箭头所示)，C、然后剪开肺 囊囊袋呈双层的两边沿，d、翻开肺囊囊袋呈单层后铺平，e、直接光镜观测，使用的光镜采用物镜2.5-3.5倍，观察其有无幼虫结节，f、若囊袋层壁较厚，尽量拉平或用挑针拨动、玻片压来观察肺囊壁组织 有无幼虫结节。，其特征在于 a、将食用螺压碎剔壳，b、沿外套膜(呈单层)的左侧至后侧剪开， 将外套膜向右翻开并铺平，c、然后直接光镜观测，使用的光镜采用 物镜2.5-3.5倍，观察其有无幼虫结节。本专利技术由于采用镜检肺幼虫结节的方銜以下简称肺检法)具有工 序与材料简单、方法简便、经济及检测速度快的特点，且具有与现有 技术的检测方法相似的检测效果。还可根据幼虫结节的形状及大小初 步估计幼虫处于的发育阶段，适合疫区大体螺类的定性筛杳。具体地 说本专利技术与现有技术相比具有以下的有益效果(1) 检测速度快，实验显示肺检法速度明显快于研磨匀浆及酶消化法统计分析差异有显著性(f =54.897， P<0.01)可根据幼虫结节 的大小快速估出幼虫处在的发育阶段；(2) 敏感度高，螺肺镜检法、研磨匀浆及酶消化法检测螺肺囊内幼 虫的敏感度分别为96.7%、 93.4%与100%,统计分析差异无显著性(^=2.069， P>0.05)显示3种检测方法具有相似的检测效果；(3) 省时省力省材料，观察表明，肺检法快捷省力，只需简单的解 剖工具，打开肺囊袋直接镜检。一般情况下，当肺囊布满幼虫结节时， 0.20-0.37分即可将螺定性。肺囊中幼虫结节较少时，5-10分种可将螺 定性，而此时若应用酶消化或匀浆法检测，获取幼虫既费时又困难。附图说明图1为福寿螺软体及肺囊箭头所示示意图 图2为具有玛瑙螺肺幼虫结节示意图 图3为具有福寿螺肺幼虫结节示意图 具体实施例方式下面结合附图和实施例对本专利技术进一步的描述。 本专利技术使用的材料均为市售的，具体有解剖针、眼科剪刀、载玻 片或平皿，解剖镜或有光源的解剖镜。本专利技术为，其特征在于所述从食用螺肺中检测广 州管圆线虫幼虫的方法包括以下步骤，a、将食用螺压碎剔壳，b、沿外套膜的左侧至后侧的基部剪开，将外套膜向右翻开取外套膜的后半部分的一个大小约为24x 16mmS椭圆形的囊状结构的肺囊，(请见图 1)， c、然后剪开肺囊囊袋呈双层的两边沿，d、翻开肺囊囊袋呈单层 后铺平，e、直接光镜观测，使用的光镜采用物镜2.5-3.5倍，观察其 有无幼虫结节，f、若囊袋层壁较厚，尽量拉平或用挑针拨动等手段来观察肺囊壁组织有无幼虫结节。具体实施时若肺囊壁组织观察到有 幼虫结节，并经抽样解剖部分幼虫结节确认为广州管圆线虫幼虫，即 可快速检测出食用螺含有广州管圆线虫幼虫，若肺囊有较多幼虫结 节，则釆用研磨匀浆或酶消化法进行检测，以达到有针对性地收集较 多幼虫目的。具体为，所述检测广州管圆线虫幼虫的方法还包括以卜_歩骤，g、若肺囊壁组织无幼虫结节，将螺研碎后置于35-37"C的消化 液中1-2小时，消化液的配比为盐酸5—9ml，胃蛋白酶3 —7g，加800 —1200ml蒸馏水，配成消化液，每10g螺肉加消化液200—300ml， h、 然后将含有研碎螺渣的消化液倾入200 — 300 f:j滤布中过滤，i、取滤 布上的沉渣镜检收集幼虫。所述检测广州管圆线虫幼虫的方法还包括 以下歩骤，g、若肺囊壁组织无幼虫结节，将螺研磨或粉碎成糊液，h、 置于锥型量筒加入脱氯水沉淀，形成上清液，净水器过滤流出的为脱 氯水，静置悬浊液的时间30-60分钟，i、再倾倒上清液2-3次后取沉 淀滤液镜检观察有无幼虫。-种从食用螺肺中检测广州管圆线虫幼虫的方法，其特征在于 所述从食用螺肺中检测广州管圆线虫幼虫的方法包括以下步骤，a、 将食用螺压碎剔壳，b、沿外套膜(外套膜很薄，山表皮和结缔组织 及少量肌肉纤维组成)的左侧至后侧剪开，将外套膜向右翻开并铺平， c、然后直接光镜观测，使用的光镜采用物镜2.5-3.5倍，观察其冇无 幼虫结节。若外套膜观察到有幼虫结节，在物镜2.5-3.5倍下可见外 套膜内有一密布血管网(网状结构)的肺腔，感染性螺肺腔内清晰可 见幼虫结节，即可快速检测出食用螺含有广州管圆线虫幼虫，若外套 膜组织无幼虫结节，则采用研磨匀浆或酶消化法进行检测，具体为， 所述检测广州管圆线虫幼虫的方法还包括以下歩骤，d、若外套膜组 织无幼虫结节，将螺研碎后置于35-39匸的消化液中1-2小时，消化 液的配比为盐酸5—9ml，胃蛋白酶3 —7g，力U 800—1200ml蒸馏水， 配成消化液，每10g螺肉加消化液200—300ml， e、然后将含有研 碎螺渣的消化液倾入200—300目滤布中过滤，f、取滤布上的沉渣镜 检观察并收集幼虫。所述检测广州管圆线虫幼虫的方法还包括以下步 骤，d、若外套膜组织无幼虫结节，将螺研磨或粉碎成糊液，e、置于 锥型量筒加入脱氯水沉淀，形成上清液，净水器过滤流出的为脱氯水， 静置悬浊液的时间30-60分钟，f、再倾倒上清液2-3次后取沉淀滤液 镜检观察有无幼虫。数据结果显示，尽管螺肌肉组织中的幼虫总数要多于螺肺囊内的 幼虫，但肺囊中的幼虫分布密度要远大于螺肌肉组织，两者的幼虫数 呈正相关。说明螺肺囊幼虫数的多寡基本决定了肌肉组织内幼虫密度 的高低，如此现象提高了肺检法在检测方法中可应用的价值。当然， 肺检法检测广州管圆线虫幼虫虽简便、快捷，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从食用螺肺中检测广州管圆线虫幼虫的方法，其特征在于：所述从食用螺肺中检测广州管圆线虫幼虫的方法包括以下步骤，ａ、将食用螺压碎剔壳，ｂ、沿外套膜的左侧至后侧的基部剪开，将外套膜向右翻开取外套膜的后半部分的椭圆形的囊状结构的肺囊，ｃ、然后剪开肺囊囊袋呈双层的两边沿，ｄ、翻开肺囊囊袋呈单层后铺平，ｅ、直接光镜观测，使用的光镜采用物镜２．５－３．５倍，观察其有无幼虫结节，ｆ、若囊袋层壁较厚，尽量拉平或用挑针拨动、玻片压来观察肺囊壁组织有无幼虫结节。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘和香，张仪，吕山，周晓农，胡铃，
申请(专利权)人：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]