用于治疗疼痛和提高疼痛敏感性的肽和其它药剂制造技术

本文描述了可用于在需要治疗的受试者中治疗疼痛或提高疼痛敏感性的肽。另外，本公开内容的肽可以与镇痛剂和/或麻醉剂一起施用。本公开内容的肽适用于当需要治疗的受试者患有损伤、慢性疾病、慢性炎症、莫顿氏神经瘤、手术/手术后疼痛或其组合时使用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗疼痛和提高疼痛敏感性的肽和其它药剂相关申请的交叉引用本申请要求于2017年12月13日提交的美国临时申请号62/598,067的优先权，其公开内容通过引用并入本文。关于联邦资助的声明本专利技术是在美国国立卫生研究院(NationalInstitutesofHealth)授予的NS078184基金的政府支持下完成的。政府拥有本专利技术的某些权利。公开内容的背景伤害感受性神经元具有特定的电压依赖性钠通道(Nav)子集，可使神经元对有害和炎性刺激做出独特反应。因此，针对新镇痛剂开发的当前策略依赖于靶向伤害感受器特异性钠通道。例如，Nav1.8通道(SCN10A)具有独特的生物物理特性，允许伤害感受性神经元在与组织损伤相关的受损条件下反复激发动作电位(AP)。这已经导向了用于缓解疼痛的Nav1.8通道特异性阻断剂的临床测试。由于通道在炎性信号传导中也向膜运输，影响Nav1.8通道发挥功能的另一种方法将是干扰其运输。但是，尚不完全了解控制Nav1.8通道运输的精确分子机制，因此，靶向Nav1.8的特异药物仍然难以捉摸。需要继续开发作用于Nav1.8通道以提高或降低受试者的疼痛敏感性的药物。公开内容的概要本专利技术提供了肽、组合物以及使用这些肽和/或组合物治疗疼痛、诱导镇痛或提高疼痛敏感性的方法。另外，本公开内容提供了通过施用靶向Magi-1(膜相关鸟苷酸激酶1)的shRNA或靶向Magi-1的siRNA来治疗疼痛或诱导局部镇痛的方法。本公开内容还提供了用作研究工具的肽。具有SEQIDNO:1-35序列的肽、靶向Magi-1的shRNA或靶向Magi-1的siRNA的使用将降低或消除对麻醉剂抗疼痛的需要。一方面，本公开内容提供了包含以下序列或由以下序列组成的肽：X1X2X3X4X5X6PX7YX8X9VX10X11X12(SEQIDNO:75)，其中X1是S、P或A；X2是T、S或A；X3是A或T；X4是A、T、I或S；X5是C、S或F；X6是P或L；X7是任意氨基酸残基；X8是E、D或Y；X9是S或R；X10是T、A、E或D，并且T任选地被磷酸化；X11是K或R；和X12是P、A或G，并且其中X1、X2、X3、X9、X10、X11或其组合被酰化(例如，n为4-18，例如4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18)。在另一个实施方案中，酰基(例如)是肉豆蔻酰基。一方面，本公开内容还提供了药物组合物，包含药学上可接受的载体，本公开内容的肽，任选地靶向Magi-1的shRNA或靶向Magi-1的siRNA，以及任选地一种或多种镇痛剂(例如非甾体抗炎药(NSAIDS))和/或一种或多种麻醉剂。镇痛剂或麻醉剂的非限制性实例包括布比卡因、依替卡因、左旋布比卡因、利多卡因、甲哌卡因、丙胺卡因、罗哌卡因、普鲁卡因、氯普鲁卡因、美洛昔康、酮咯酸、双氯芬酸、酪洛芬、吡罗昔康、安乃近或其组合。镇痛剂的其它实例包括对乙酰氨基酚、阿司匹林、布洛芬、萘普生等，以及它们的盐。使用本领域技术人员已知的技术和载体(例如，Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy(2005)第21版,Philadelphia,PA.LippincottWilliams&Wilkin)，可以将组合物配制成肌肉内、皮内、鞘内或神经注射，局部乳膏剂或透皮贴剂。一方面，本公开内容的肽或其组合物用于改变(例如提高或降低)受试者的疼痛敏感性(例如，需要疼痛和疼痛敏感性治疗的受试者)。在一个实施例中，当受试者的疼痛敏感性降低时，受试者的疼痛降低(例如，减轻)。在另一个实施例中，受试者的疼痛敏感性提高。在一个实施例中，将本公开内容的肽、其组合物、靶向Magi-1的shRNA或靶向Magi-1的siRNA用于疼痛管理(例如，疼痛控制)。一方面，本公开内容提供了在受试者中诱导局部镇痛的方法，包括向受试者施用镇痛有效量(例如治疗有效量)的包含具有SEQIDNO:1-7或15-21中任一序列的肽、靶向Magi-1的shRNA或靶向Magi-1的siRNA的组合物。本公开内容还提供了提高受试者的疼痛敏感性的方法，包括向受试者施用提高疼痛敏感性有效量的包含具有SEQIDNO:8-14或21-35中任一序列的肽的组合物。一方面，本公开内容还提供了用作研究工具的SEQIDNO:36-70的肽。这样，可以将它们施用给研究受试者，例如小鼠和大鼠。肽也可用于体外测试。附图说明为了更全面地理解本公开内容的本质和目的，应当参考结合附图进行的以下详细描述。图1显示出PDZ结合基序调控KNa通道表达。(A)直系同源Slack亚基(非洲爪蟾蜍、鸡、大鼠和人Slack)和大鼠Slick亚基的distilC-末端的氨基酸比对。最后四个进化保守的氨基酸(ETQL)(SEQIDNO:112)(在C端以点线框示出)代表共有的1型PDZ基序(X–S/T–X–V/L/I)。(实线框表示AP-2结合位点；点状框表示推定的PKA磷酸化位点；破折线框表示推定的PKC磷酸化位点)(B)在存在或不存在Magi-1的CHO细胞中Slack和突变Slack通道(Mut)(其中Slack的PDZ基序被截断而重组表达)的代表性电流迹线(上方)。每种实验条件的电流密度分析(下方)。每种实验条件下分析了20-25个细胞的电流，并且将值表示为平均值±SEM，*p<0.05，相对于各自对照。(C)Magi-1与野生型和具有截断PDZ基序的突变Slack变体的免疫共沉淀测定。截断Slack的PDZ基序阻止了与Magi-1的免疫共沉淀。(D)共表达Magi-1与Slack的CHO细胞或单独表达Slack的CHO细胞的表面生物素酰化测定的代表性免疫印迹(左侧)。右侧显示了对表面Slack表达的定量分析(t6＝4.276，*p<0.0129，每组n＝4，双尾t检验)。将数据归一化至输入以说明转染效率。(E)双重免疫标记实验显示，当在CHO细胞中表达时，Magi-1与Slack之间的重叠表达和F.Magi-1与Slick之间的重叠表达。(F)成年小鼠的完整DRG神经元的Magi-1和Slack之间的免疫共沉淀测定的代表性免疫印迹。(G)双重免疫标记实验，描绘了培养的DRG神经元(上方小图)和完整DRG神经元(中间小图)中Magi-1与Slack之间的共定位。比例尺，50μm。脊髓的浅层位于下方。比例尺代表50μm。(H)Co-IP显示了小鼠DRG中的Magi-1/Slack相互作用。如图所示，用Magi-1抗体或Slack抗体对DRG裂解物进行免疫沉淀，并用Slack或Magi-1抗体进行免疫印迹。重复该实验至少3次。(I)上方，用来源于SlackC端的PDZ肽处理的神经元的代表性电流钳迹线。扰乱肽B(肉豆蔻酰基-QPNTRLDETE)(SEQIDNO:113)(23/23)(上方左侧)和未处理的神经元(17/17)(上方中间)激发一个动作电位，随后在阈上刺激(400pA)持续1000ms期间激发本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肽，包含以下序列：/nX

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171213 US 62/598,0671.一种肽，包含以下序列：
X1X2X3X4X5X6PX7YX8X9VX10X11X12(SEQIDNO:75)，
其中X1选自S、P和A；
X2选自T、S和A；
X3选自A和T；
X4选自A、T、I和S；
X5选自C、S和F；
X6选自P和L；
X7是任意氨基酸残基；
X8选自E、D和Y；
X9选自S和R；
X10选自T、A、E和D，并且T任选地被磷酸化；
X11选自K和R；和
X12选自P、A和G，
其中，X1、X2、X3、X4、X10、X11或其组合被酰化。


2.根据权利要求1所述的肽，其中，酰基为且n为4-18。


3.根据权利要求2所述的肽，其中，所述酰基是肉豆蔻酰基。


4.根据权利要求3所述的肽，其中，X1是S或P。


5.根据权利要求4所述的肽，其中，所述肽具有选自SEQIDNO:1-7和SEQIDNO:15-21的序列。


6.根据权利要求4所述的肽，其中，所述肽具有选自SEQIDNO:8-14和SEQIDNO:22-35的序列。


7.根据权利要求4所述的肽，其中，X6是P和/或X1是S。


8.根据权利要求1所述的肽，其中，所述肽具有以下序列：SSTTSPPSYDSVTKP(SEQIDNO:6)、SATSFPPSYESVTRG(SEQIDNO:7)、SSTTSPPSYDSVTKP(SEQIDNO:13)、SATSFPPSYESVTRG(SEQIDNO:14)、SSTTSPPSYDSVAKP(SEQIDNO:20)、SATSFPPSYESVARG(SEQIDNO:21)、SSTTSPPSYDSVEKP(SEQIDNO:27)、SATSFPPSYESVERG(SEQIDNO:28)、SSTTSPPSYDSVDKP(SEQIDNO:34)、或SATSFPPSYESVDRG(SEQIDNO:35)，其中，带下划线的S是肉豆蔻酰化的，带下划线的T是磷酸化的。


9.一种组合物，包含一种或多种如权利要求1所述的肽和药学上可接受的载体。


10.根据权利要求9所述的组合物，还包含一种或多种镇痛剂和/或一种或多种麻醉剂。


11.根据权利要求9所述的组合物，其中，所述一种或多种镇痛剂和/或所述一种或多种麻醉剂是布比卡因、依替卡因、左旋布比卡因、利多卡因、甲哌卡因、丙胺卡因、罗哌卡因、普鲁卡因、氯普鲁卡因、美洛昔康、酮咯酸、双氯芬酸、酪洛芬、吡罗昔康、安乃近或其组合。


12.根据权利要求9所述的组合物，还包含靶向Magi-1的shRNA和/或靶向Magi-1的siRNA。


13.一种在需要治疗的受试者中治疗疼痛或提高疼痛敏感性的方法，包括：
向所述需要治疗的受试者施用治疗有效量的一种或多种如权利要求9所述的组合物，
其中减轻了所述需要治疗的受试者的疼痛或提高了所述需要治疗的...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿林达姆·巴塔查尔吉，克里·普赖斯，
申请(专利权)人：纽约州立大学研究基金会，
类型：发明
国别省市：美国;US